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作者：李欣安徽医科大学

学位级别：硕士

研究目的:建立稳定的急性移植物抗宿主病（aGVHD）小鼠模型,以NLRP3炎症小体的靶向抑制剂硫藤黄菌素（Thl）作为先导化合物研究其对aGVHD的防治作用并探究其作用机制。实验方法:1.使用8-10周龄雄性BABL/c小鼠作为受体,C57BL/6J雄性小鼠... 详细信息

研究目的:建立稳定的急性移植物抗宿主病（aGVHD）小鼠模型,以NLRP3炎症小体的靶向抑制剂硫藤黄菌素（Thl）作为先导化合物研究其对aGVHD的防治作用并探究其作用机制。实验方法:1.使用8-10周龄雄性BABL/c小鼠作为受体,C57BL/6J雄性小鼠作为供体,移植当天受体小鼠采用6.5 Gy 60Co全身照射（TBI）,6h后尾静脉输注供体小鼠来源的骨髓细胞1 × 107作为对照组,输注骨髓细胞1 × 107及脾细胞5 × 106作为aGVHD组,于移植后不同时间点观察记录各组小鼠的生存、体重变化、临床评分;移植后第11天,取对照组和aGVHD模型组小鼠肝脏及小肠进行常规组织病理学检查;移植后第11天,取aGVHD模型组小鼠外周血,分离脾脏淋巴细胞、肝脏淋巴细胞、小肠淋巴细胞,标记anti-mouse H-2Kb及anti-mouse H-2Kd,运用流式细胞学技术对aGVHD模型组小鼠进行移植嵌合率检测。2.aGVHD小鼠实验组于移植前1天通过腹腔注射给予不同剂量Thl（0.25mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg）,隔天给药一次至移植后20天,对照组给予相同体积的药物溶媒DMSO。每天观察实验组和对照组小鼠生存情况和临床表现;每周三次对小鼠进行临床评分并称取体重。于移植后第11天取小鼠肝脏,小肠,结肠组织固定、包埋、切片、H＆E染色进行病理学检查;于移植后第6天和第11天分离小鼠脾脏、肝脏和小肠的淋巴细胞,运用流式细胞学技术检测谱系分化、T淋巴细胞亚群及T细胞的增殖活化;酶联免疫吸附剂测定（ELISA）和细胞因子微球检测技术（CBA）检测小鼠血清中细胞因子的水平;qPCR检测靶器官组织中细胞因子mRNA的表达水平。3.在供体和受体中分别特异性敲除Thl的靶分子BRCC3,以探究BRCC3的缺失对aGVHD的作用,通过组织病理学检测靶器官损伤;酶联免疫吸附剂测定（ELISA）和细胞因子微球检测技术（CBA）检测小鼠血清中细胞因子的水平;移植后第9天分离脾脏、肝脏和小肠淋巴细胞,运用流式细胞学技术检测靶器官中T细胞的浸润和活化。实验结果:1.成功建立了稳定可靠的aGVHD小鼠模型。aGVHD模型组小鼠可观察到明显的体重下降、皮损、竖毛、弓背和腹泻等aGVHD表现,于移植后第19天全部死亡。对照组小鼠仅在移植后第10天左右有轻度的体重下降、竖毛及弓背表现,恢复后可获得长期生存;aGVHD模型组小鼠肝脏及小肠病理切片可见明显的aGVHD病理学表现,对照组小鼠未见明显的aGVHD病理特征;移植后第11天,在aGVHD模型组小鼠外周血、脾脏、肝脏和小肠嵌合率都达到95%左右。2.在发生严重的aGVHD时,与对照组小鼠相比,Thl实验组小鼠生存期显著延长,体重下降程度较轻,临床评分低于对照组。移植后11天病理检测表明Thl处理组靶器官病理损伤较轻,肝脏功能检测表明肝功能好于对照组。血清中细胞因子检测结果显示在移植后的第6天,实验组IL-10、IL-17A、IL-2及TNF细胞因子水平明显降低;而在移植后的第11天,实验组IL-10、IFN-γ、IL-1β和IL-2细胞因子水平明显降低。流式细胞学检测结果显示Thl不影响供体细胞在脾脏中的谱系分化和CD4+T细胞及CD8+T细胞比例,但可以降低脾脏及肝脏中T细胞的活化,抑制供体CD4+T细胞和CD8+T细胞在小肠及肝脏中的浸润,并促进脾脏及肝脏中Treg细胞的分化。qPCR结果Thl可以降低靶器官中IL-1β、IFN-γ、TNF-α和IL-18等细胞因子mRNA表达。3.在aGVHD小鼠模型中,供体BRCC3的缺失对aGVHD无明显影响,但受体中BRCC3的缺失明显加重了 aGVHD。BRCC3在受体中缺失会加重靶器官肝脏的损伤,促进CD8+T细胞在靶器官中的浸润和增殖活化。研究结论:Thl可以显著延长aGVHD小鼠的生存期、减轻aGVHD靶器官的病理损伤、降低血清中aGVHD相关细胞因子的水平及靶器官中aGVHD相关细胞因子mRNA的表达;Thl能够减少供体T细胞在靶器官中的浸润并抑制供体T细胞活化、增加靶器官Treg细胞分化从而延缓aGVHD的发生发展。但是,Thl的靶分子BRCC3在受体中敲除会加重aGVHD,表明Thl减轻aGVHD的作用可能不是通过BRISC复合体实现的。

关键词： aGVHD Thl NLRP3 BRCC3

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佐剂性关节炎大鼠肺功能变化与Th1/Th2细胞、调节性T细胞的相关性研究

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第1期27卷 56-60页

作者：刘健万磊盛长健谢秀丽安徽中医学院第一附属医院风湿免疫科安徽合肥230031

目的:探讨细胞因子、Th1/Th2细胞及调节性T细胞(Treg)、转录因子Foxp3在佐剂性关节炎(AA)大鼠肺功能损害中的作用机制。方法:将24只Wistar大鼠随机分为正常对照(NC)组和模型(Model)组,每组12只,向Model组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐... 详细信息

目的:探讨细胞因子、Th1/Th2细胞及调节性T细胞(Treg)、转录因子Foxp3在佐剂性关节炎(AA)大鼠肺功能损害中的作用机制。方法:将24只Wistar大鼠随机分为正常对照(NC)组和模型(Model)组,每组12只,向Model组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL致炎,复制成AA模型。致炎48d后,观察两组大鼠足跖肿胀度(E)及关节炎指数(AI),HE染色观察肺组织病理学改变,计算两组大鼠肺系数(LI)、肺泡炎积分,免疫组化染色法检测Foxp3、TGF-β1蛋白表达情况。通过小动物肺功能仪检测肺功能,ELISA法测定细胞因子的变化,流式细胞术(FCM)测定Treg的表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠E、AI、LI、1s内平均呼气流量(FEV1/FVC%)、肺泡炎积分、血清TNF-α、Th1/Th2、肺组织TGF-β1、CD4+ CD25- T细胞的表达水平明显升高,且两者差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);用力肺活量(FVC)、25%肺活量的最大呼气流量(FEF25)、50%肺活量的最大呼气流量(FEF50)、75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、最大呼气中期流量(MMF)、用力最大呼气流量(PEF)、肺动态顺应性(Cldyn)、血清IL-10、CD4+ Treg、CD4+ CD25- Treg、肺组织Foxp3蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。Spearman相关分析结果显示,AA大鼠肺功能参数分别与E、AI、TNF-α、IL-10、Th1/Th2及CD4+ Treg、CD4+CD25+Treg、CD4+ CD25- T细胞、Foxp3、TGF-β1表达呈相关性,且相关有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:大鼠在致炎后对抗原刺激呈高敏反应状态,Th1/Th2状态失衡、CD4+ CD25- T细胞转化成CD4+ CD25+ Treg受阻,免疫调节功能紊乱,释放大量细胞因子和炎症介质,导致局部关节的病变和肺组织损害,从而发生AA肺功能降低。

关键词：关节炎大鼠调节性T细胞佐剂性关节炎 Th2细胞肺功能变化 Thl 转录因子Foxp3 相关性

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Lactobacillus isolates from healthy volunteers exert immunomodulatory effects on activated peripheral blood mononuclear cells

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The Journal of Biomedical Research 2013年第2期27卷 116-126页

作者： Keyi Sun Chao Xie Donghua Xu Xiaofan Yang James Tang Xiaohui Ji Department of Microbiology and Immunology Nanjing Medical University Cultech Limited Unit 2 Christchurch Road Baglan Industrial Park

As probiotics in the gut, Lactobacilli are believed to play important roles in the development and maintenance of both the mucosal and systemic immune system of the host. This study was aimed to investigate the immunomodulatory function of candiate lactobacilli on T cells. Lactobacilli were isolated from healthy human feces and the microbiological characteristics were identified by API 50 CHL and randomly amplified polymorphic DNA （RAPD） assays. Anti-CD3 antibody activated peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） were treated by viable, heat-killed lactobacilli and genomic DNA of lactobacilli, and cytokine profiles were tested by ELISA. Isolated lactobacilli C44 and C48 were identified as L. acidophilus and L. paracacei, which have properties of acid and bile tolerance and inhibitor effects on pathogens. Viable and heat-killed C44 and C48 induced low levels of proinflammatory cytokines （TNF-a, IL-6 and IL-8） and high levels of IFN-y and IL-12p70 in PBMCs. In anti- CD3 antibody activated PBMCs, viable and heat-killed C44 increased Th2 cytokine levels （IL-5, IL-6 and IL-10）, and simultaneously enhanced Thl responses by inducing IFN-y and IL-12p70 production. Different from that of lactabacillus strains, their genomic DNA induced low levels of IL-12p70, IFN-y and proinflammatory cytokines in PBMCs with or without anti-CD3 antibody activation. These results provided in vitro evidence that the genomic DNA of strains of C44 and C48, especially C44, induced weaker inflammation, and may be potentially applied for treating allergic diseases.

关键词： lactobacilli probiotics Thl Th2 cytokine immuno-modulation

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Th1/Th2/Th17/Treg平衡在特应性皮炎中的变化规律

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中国皮肤性病学杂志 2018年第5期32卷 503-506页

作者：王相华李冬芹张金凤赵林栋史四季焦作市人民医院皮肤科河南焦作454002 郑州大学第一附属医院皮肤科河南郑州450052

目的探讨Th1/Th2/Th17/Treg平衡在特应性皮炎中的变化规律。方法收集2014年2月-2017年1月在本院收治的56例确诊的特应性皮炎患儿,其中轻症11例、中症29例和重症16例。选择同期的健康儿童26例为对照组。检测外周血中IFN-y、IL-4、IL-17、... 详细信息

目的探讨Th1/Th2/Th17/Treg平衡在特应性皮炎中的变化规律。方法收集2014年2月-2017年1月在本院收治的56例确诊的特应性皮炎患儿,其中轻症11例、中症29例和重症16例。选择同期的健康儿童26例为对照组。检测外周血中IFN-y、IL-4、IL-17、IL-21、IL-23、IL-10和转化生长因子(TGF-")水平。结果与对照组相比,特应性皮炎组的IL-4、IL-17、IL-21、IL-23均明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,特应性皮炎组的IFN-y/IL-4、IFN-y/IL-17、IFN-y/IL-21、IFN-y/IL-23、IL-10/IL-17和TGF-"/IL-17均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),且呈严重程度依赖性降低。结论 Th1、Th2、Th17和Treg细胞均参与了特应性皮炎的发生发展过程,Th2和Th17细胞处于主导地位。

关键词： Thl Th2 Thl7 Treg 特应性皮炎

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骨髓间充质干细胞对肺纤维化大鼠肺组织中Thl／Th2平衡的调节作用

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解剖学杂志 2014年第1期37卷 10-14,29页

作者：李月红张春来王艳孟令丽杨莎莎唐山市工人医院妇产科唐山市工人医院心内科河北联合大学基础医学院唐山063000

目的：观察博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织中Thl型细胞因子干扰素У（IFN-У）和Th2细胞因子白介素4（IL-4）的动态变化，并探讨骨髓问充质干细胞（BMSCs）对Thl／Th2平衡的调节作用。方法：健康雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、B... 详细信息

目的：观察博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织中Thl型细胞因子干扰素У（IFN-У）和Th2细胞因子白介素4（IL-4）的动态变化，并探讨骨髓问充质干细胞（BMSCs）对Thl／Th2平衡的调节作用。方法：健康雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、BMSCs组。采用气管内注射博莱霉素法（5mg／kg）制作大鼠肺纤维化模型，并给予BMSCs干预治疗。分别于造模后7、14d取肺组织。采用H-E染色法观察肺组织形态学改变；羟脯氨酸检测定量分析肺组织中总胶原蛋白的含量；免疫组织化学检测IFN-У、IL-4在肺组织中的分布及定位；免疫印迹检测IFN-У、IL-4的蛋白表达量。结果：与正常组大鼠相比，模型组大鼠肺组织有较多炎细胞浸润，纤维组织增生及胶原沉积；羟脯氨酸含量显著增加；IFN-У蛋白表达明显下调，IL-4的蛋白表达明显上调。与模型组大鼠相比，BMSCs组大鼠肺组织病理改变显著减轻；羟脯氨酸含量明显减少；IFN-У表达显著上调，但仍低于正常组表达水平；IL-4的表达显著下调，但仍高于正常组表达水平。结论：博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠模型中存在Thl／Th2失衡现象，BMSCs移植可减缓其纤维化程度及病理进程，通过对Thl／Th2的调节作用实现。

关键词：骨髓间充质干细胞博莱霉素纤维化 Thl Th2 干扰素У 白介素4

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转录因子GATA-3和T—bet的表达失衡在复苏后急性肺损伤中的作用

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中华急诊医学杂志 2014年第1期23卷 8-14页

作者：顾伟李春盛殷文朋张健侯晓敏张达首都医科大学北京朝阳医院急诊科北京100020

目的探讨转录因子GATA-3和T．bet的表达失衡是否参与了猪心肺复苏后的急性肺损伤机制。方法26头猪随机（随机数字法）分为假手术组（SHAM）（6只）、复苏12h组和复苏24h组（各10只）。建立室颤8min小型猪模型；用流式细胞术检测猪外周... 详细信息

目的探讨转录因子GATA-3和T．bet的表达失衡是否参与了猪心肺复苏后的急性肺损伤机制。方法26头猪随机（随机数字法）分为假手术组（SHAM）（6只）、复苏12h组和复苏24h组（各10只）。建立室颤8min小型猪模型；用流式细胞术检测猪外周血淋巴细胞（PBL）中CD3＋、CD4＋和CD8＋淋巴细胞亚群的分布；采用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测血浆中白细胞介素4（IL4），肿瘤坏死因子仅（TNF—d）和干扰素1（INF-1）的含量；采用Western-blot法检测肺组织GATA．3和T—bet的蛋白表达；用实时荧光PCR法定量肺组织GATA一3和T—betmRNA水平。结果复苏组小猪发生严重肺组织细胞损伤，在复苏后的12h和24h，猪血清中CD4＋细胞的比例（28．4±2．3）％，（24．1±1．6）％明显低于假手术组（48．4±2．9）％，（51．1±5．4）％；CD4＋／CD8＋（1．7±0．9），（1．5±1．0）也较假手术组明显减低（2．5±1．3），（2．7±1．1）（P〈0．05）；IL-4和TNF-d水平在2～12h逐渐升高（P〈0．01）；INF-1水平和INF-y／IL4却在2～12h逐渐降低。复苏组的肺组织GATA-3的蛋白表达较假手术组分别在12h、24h明显升高，T—bet的蛋白表达和T—bet/GATA-3则分别在12h、24h明显降低。复苏组的肺组织GATAd和T—bet的mRNA水平较假手术组分别在12h、24h明显升高和减低。结论转录因子GATA-3和T-bet的表达失衡导致的肺免疫功能障碍可能参与了心肺复苏后急性肺组织损伤的过程。

关键词：心肺复苏急性肺损伤 Thl Th2失衡免疫功能障碍 GATA-3 T—bet

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纤维细胞和Thl／Th2型细胞因子在放射性肺损伤中的作用及相关机制

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中华放射医学与防护杂志 2013年第2期33卷 124-127页

作者：熊珊珊李若曦杜丽肖凤君徐龙刘坤璐杨陟华朱茂祥潘秀颉军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的观察小鼠经60Co γ射线胸部照射后肺组织中纤维细胞和Th1/Th2型细胞因子变化规律,探究其在放射性肺损伤中的作用及相关机制.方法小鼠经60Coγ射线单次胸部照射25 Gy,建立肺损伤模型,用HE染色和Masson三联染色观察肺组织病理变化,... 详细信息

目的观察小鼠经60Co γ射线胸部照射后肺组织中纤维细胞和Th1/Th2型细胞因子变化规律,探究其在放射性肺损伤中的作用及相关机制.方法小鼠经60Coγ射线单次胸部照射25 Gy,建立肺损伤模型,用HE染色和Masson三联染色观察肺组织病理变化,酶标仪测定Ⅰ型胶原浓度,流式细胞仪测定小鼠肺实质中纤维细胞数目,液相悬浮芯片检测肺泡灌洗液中纤维化相关细胞因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、巨噬细胞炎症/性蛋白-1α（MIP-1α）和Th1/Th2型细胞因子表达.结果照后14 d至3个月,小鼠体重明显下降（F=7.19、40.62、58.70,P＜0.05）.1个月时小鼠肺组织胶原纤维增生,第3个月时更加明显.照后1～3个月,Ⅰ型胶原浓度明显增加（Z=-2.470、-2.236,P＜0.05）.照射后14 d至3个月,纤维细胞数目增多（Z=-2.19、-2.64、-2.64,P＜0.05）,肺灌洗液中MCP-1（Z=-2.35、-2.37、-2.34,P＜0.05）及MIP-1α（Z=-2.43、-2.35、-2.35,P＜0.05）表达增高.Th1型细胞因子IFN-γ在照后1个月短暂升高（Z=-2.34,P＜0.05）,IL-12在照后3d及7d下降（Z=-2.31、-2.30,P＜0.05）,1个月及3个月升高（Z=-2.32、-2.12,P＜0.05）；Th2型细胞因子IL-4在照后7、14 d及1个月表达升高（Z=-2.31、-2.35、-2.32,P＜0.05）,IL-10在照后3d及1、3个月升高（Z=-2.33、-2.37、-2.34,P＜0.05）.结论纤维细胞是诱发放射性肺损伤的重要效应细胞,MCP-1及MIP-1α能明显诱导纤维细胞聚集,Th1/Th2可能参与调节这一过程.

关键词：放射性肺损伤纤维细胞单核细胞趋化蛋白-1 巨噬细胞炎症性蛋白-1α Thl Th2型细胞因子

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The effect and mechanism of Chlorogenic acid in allergic rhinitis mice induced by OVA

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中国药理学通报 2015年第B11期31卷 126-127页

作者： LIHong-xin JiangHong-bin LIUShu-nan DepartmentofPharmacology SchoolofPharmacyJilinUniversityChangchun130021

Aim To study the effect and mechanism of Chlorogenic acid in allergic rhinitis （AR） mice. MethodsAR was induced in BALB/c mice according to a published method with ovalbumin （OVA）. The AR model was de- veloped by intraperitoneal injection of adjuvant suspension on every other day for 7 times. Adjuvant suspension in- clude 50 μg of OVA and 2rag of AI（OH） s, which were combined in 2ml of normal saline （NS）. Then, the mice received a nasal drip of 10% OVA daily for 10days, and in normal control were dripped NS. After administration with 50 mg· kg^-1, 100 mg · kg^-1 and 200 mg · kg^-1 of Chlorogenic acid for 30min, The mice were attacked lo- cally for 10 days. We observed behavior analysis, evaluated the weight of nosal draingage, related the index of thy- mus and spleen, determined the effect of Chlorogenic acid on the contents of cytokines, IgE and histamine by ELISA in AR mice and analyzed the mRNA expression of inflammatory cytokines （IL-4, IL-5, IL-10, IFN-y） in the nasal mucosa tissues samples by RT-PCR. Results Chlorogenic acid decreased the number of nose-scratching events in 10min, the weight of nosal draingage, the index of spleen, the content of IL-4 in nasal lavage fluid（NLF） and the contents of cytokines, IgE and histamine in serum; while increased the index of thymus, the content of IFN-γ in NLF, the contents of IFN-γ in serum and the rate of IFN-γ/IL-4 ; The data showed a statistically signifi- cant up-regulation of IFN-γ mRNA expressions and down-regulation of IL-4mRNA, IL-5mRNA, IL-10mRNA ex- pressions after adiminstration of Chlorogenic acid. Conclusion Chlorogenic acid might exert the effect in AR mice through regulating the balance of Thl and Th2.

关键词： Chlorogenic acid allergic rhinitis histamine IgE cytokine Thl Th2

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子痫前期患者辅助性T淋巴细胞及协同刺激分子CD28/CTLA-4的表达

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实用妇产科杂志 2014年第5期30卷 370-373页

作者：吕英璞郭清张娜娜张文真李彬河北省石家庄市第一医院河北石家庄050011 河北省石家庄市第三医院河北石家庄050011 河北医科大学第二医院河北石家庄050000 河北医科大学生化教研室河北石家庄050080

目的:探讨辅助性T淋巴细胞及协同刺激分子CD28/CTLA-4在子痫前期发病中的作用。方法:采集22例正常妊娠妇女(正常妊娠组)及45例子痫前期患者(子痫前期组,包括22例轻度和23例重度)外周血,用流式细胞技术分别检测外周血Th1、Th2及Th1/Th2... 详细信息

目的:探讨辅助性T淋巴细胞及协同刺激分子CD28/CTLA-4在子痫前期发病中的作用。方法:采集22例正常妊娠妇女(正常妊娠组)及45例子痫前期患者(子痫前期组,包括22例轻度和23例重度)外周血,用流式细胞技术分别检测外周血Th1、Th2及Th1/Th2比率及CD28和CTLA-4在CD4+T细胞的表达。结果:子痫前期组Th1、Th1/Th2、CTLA-4均高于正常妊娠组,且重度高于轻度(P<0.05);子痫前期组Th2、CD28/CTLA-4低于正常妊娠组,且重度低于轻度(P<0.05)。CD28与Th1呈负相关,r=-0.295;CTLA-4与Th1呈正相关,r=0.551,与Th2呈负相关,r=-0.363;CD28/CTLA-4与Th1/Th2呈负相关,r=-0.707。结论:子痫前期患者外周血协同刺激分子CD28/CTLA-4表达异常,高表达的CTLA-4促进CD4+T淋巴细胞过度活化并向Th1亚群分化,导致Th1/Th2比率失衡,这可能是子痫前期发生的重要原因之一。

关键词： CD28 CTLA-4 Thl Th2 T淋巴细胞亚群妊娠期高血压疾病子痫前期

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Thl和Th2型细胞因子在椎间盘突出组织中的表达及意义

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江苏医药 2011年第19期37卷 2340-2341页

作者：张建伟唐振宇张雷葛灵常州市第一人民医院骨科 213003

腰椎间盘突出症是骨科的常见病,近年来,随着研究的深入,对于腰椎间盘突出症的病因、病理、发病机制等方面存在着不同的学说和观点,并且一直存在争论。目前,突出椎间盘所诱发的自身免疫反应在其发病过程中起着重要作用。

关键词：腰椎间盘突出症椎间盘组织 Th2型细胞因子 Thl 自身免疫反应免疫炎性细胞发病机制发病过程

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