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Journal of Biophysical Chemistry 2014年第4期5卷 134-142页

作者： Heather N. H. Wilks Tara M. Arrington Billy Mark Britt Department of Chemistry and Biochemistry Texas Woman’s University Denton Texas USA

A partial phase diagram characterizing the conformational change that occurs in thermomyces lanuginosus xylanase as it is slowly heated in 150 mM sodium phosphate (pH = 7.0) has been con-structed from slow-scan-rate differential scanning calorimetry measurements. The Clausius-Clapeyron equation was applied to determine an associated volume change of -205 L·mol-1 at 24°C, the equilibrium transition temperature at 1.0 atm pressure. This value is in excellent agreement with that predicted using a previously published [1] empirical equation for calculating the hydro-dynamic radius if the transition is regarded as from a random coil to a functional, folded state and with the assumption that the hydrodynamic radius is a good approximation of the true random coil radius. The existence of a low-temperature random coil is confirmed by circular dichroism and dynamic light scattering measurements. Thus, at 24°C and 1.0 atm pressure the enzyme appears to fold from a random coil to a functional, folded form as it is slowly heated.

关键词： Clausius-Clapeyron Conformational Change Slow-Scan-Rate Differential Scanning Calorimetry thermomyces lanuginosus Xylanase Volume Change

thermomyces lanuginosus ZJB09222脂肪酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

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食品与发酵工业 2012年第5期38卷 56-60页

作者：雷丽华郑仁朝柳志强黎小军郑裕国浙江工业大学生物与环境工程学院浙江杭州310014

thermomyces lanuginosus脂肪酶(简称TLL)是具有重要商业应用价值的脂肪酶之一。运用RT-PCR技术,从thermomyces lanuginosus ZJB09222基因组中克隆得到885 bp脂肪酶基因cDNA序列,其结构基因编码蛋白包含292个氨基酸。将脂肪酶基因cDNA... 详细信息

thermomyces lanuginosus脂肪酶(简称TLL)是具有重要商业应用价值的脂肪酶之一。运用RT-PCR技术,从thermomyces lanuginosus ZJB09222基因组中克隆得到885 bp脂肪酶基因cDNA序列,其结构基因编码蛋白包含292个氨基酸。将脂肪酶基因cDNA序列开放阅读框克隆到大肠杆菌表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),构建了基因工程菌*** BL21/pET28b-TLL。诱导表达后SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子量约为32 ku。筛选获得廉价重组菌培养基,表达条件优化结果表明,当OD600约为0.6～0.8时,加入IPTG至终浓度为0.1 mmol/L,在28℃诱导培养7 h,酶活达到41 U/mL。

关键词：脂肪酶 thermomyces lanuginosus 克隆大肠杆菌诱导表达

嗜热真菌 thermomyces lanuginosus热稳定a—淀粉酶的纯化及特性

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微生物学报 1997年第2期37卷 107-114页

作者：李多川杨依军彭友良沈崇尧周培瑾黄亦存中国农业大学植病系北京100094 中国科学院微生物研究所北京100080

嗜热真菌thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃静止培养14d,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、SephacrylS-300分子筛层析和FPLC MonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均一的淀粉酶... 详细信息

嗜热真菌thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃静止培养14d,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、SephacrylS-300分子筛层析和FPLC MonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均一的淀粉酶。纯酶与淀粉反应不同时间后,用碘色反应法和DNS法测定淀粉和还原糖量,结果显示淀粉量在开始时迅速下降,但还原糖的量却增加很慢;产物经TLC层析分析为麦芽糖和少量葡萄糖。由此说明它为α-淀粉酶。用SDS-PAGE和Sephacryl S-300分子筛层析测定分子量为56000,不具亚基。酶反应最适温度和pH分别为65℃和4.5～5.0。在pH4.6条件下,酶在50℃是稳定的;60℃保温1h,仍保留94％的原酶活性;酶在70℃的半衰期为10min。钙离子对酶有激活作用。酶对糖原和糊精有一定的水解能力。

关键词：嗜热真菌 thermomyces lanuginosus α淀粉酶

嗜热真菌thermomyces lanuginosus热稳定蛋白酶的纯化及特性

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山东农业大学学报（自然科学版） 2002年第1期33卷 19-22页

作者：朱俊华李多川陈静山东农业大学植保学院山东泰安271018

嗜热真菌thermomyceslanuginosus在液体培养基中于 5 0℃振荡培养 1周后 ,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Phenythl-Sepharose疏水层析 ,得到了凝胶电泳均一的蛋白酶。用SDS -PAGE测定分子量为 5 5kD ,该酶的最... 详细信息

嗜热真菌thermomyceslanuginosus在液体培养基中于 5 0℃振荡培养 1周后 ,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Phenythl-Sepharose疏水层析 ,得到了凝胶电泳均一的蛋白酶。用SDS -PAGE测定分子量为 5 5kD ,该酶的最适反应温度为 70℃ ,最适作用pH值为 6 .0。该酶具有很好的耐热性 ,在pH值 6 .0 5 0℃条件下酶是稳定的 ;6 0℃保温 1h ,仍保留 92 %的原酶活性 ;90℃时酶活半衰期为 6min。抑制剂试验证明。

关键词：嗜热真菌 thermomyces Lanuginosus 蛋白酶纯化热稳定

来源于thermomyces sp.的植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达

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安徽农业科学 2008年第22期36卷 9423-9425页

作者：张文荟沈微饶志明诸葛斌方慧英诸葛健江南大学教育部重点实验室江南大学生物工程学院工业微生物中心江苏无锡214122

[目的]研究植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达。[方法]用PCR方法从嗜热真菌(thermomyces sp.)中扩增到去除信号肽和内含子后约1.4 kb的phyT基因编码区片段,并对该片段进行克隆与序列测定。[结果]序列相似性分析表明,克隆的植酸酶基因... 详细信息

[目的]研究植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达。[方法]用PCR方法从嗜热真菌(thermomyces sp.)中扩增到去除信号肽和内含子后约1.4 kb的phyT基因编码区片段,并对该片段进行克隆与序列测定。[结果]序列相似性分析表明,克隆的植酸酶基因无信号肽和内含子,与报道的嗜热真菌thermomyces lanuginosus植酸酶基因相似性最高,DNA序列相似性为95%。从验证后的转化子筛选得到了表达嗜热真菌植酸酶的重组毕赤酵母菌株p-phy T,SDS-PAGE分析显示其分子量约为45 kD,重组毕赤酵母成功表达植酸酶。与野生型菌株相比,结果显示重组植酸酶酶活性提高了12.6%,最适温度65℃,75℃仍有64%以上酶活活性;最适pH值为5.5。[结论]嗜热真菌植酸酶基因用组成型质粒能在毕赤酵母中表达。

关键词： thermomyces sp. 植酸酶重组毕赤酵母热稳定性

疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶的纯化及其性质研究

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微生物学报 2005年第2期45卷 270-274页

作者：郭润芳李多川王荣山东农业大学环境生物系泰安271018

采用硫酸铵沉淀、DEAE SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的疏绵状嗜热丝孢菌 (thermomyceslanuginosus)几丁质酶。经SDS PAGE和凝胶过滤层析测得纯酶蛋白的分子量在 4 8～ 4 9 .8kD之间... 详细信息

采用硫酸铵沉淀、DEAE SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的疏绵状嗜热丝孢菌 (thermomyceslanuginosus)几丁质酶。经SDS PAGE和凝胶过滤层析测得纯酶蛋白的分子量在 4 8～ 4 9 .8kD之间。该酶反应的最适温度和最适pH分别为 5 5℃和 4 5 ,在pH4 5条件下 ,该酶在 5 0℃以下稳定 ;6 5℃的半衰期为 2 5min ;70℃保温 2 0min后 ,仍保留 2 4 %的酶活性。其N 端氨基酸序列为AQGYLSVQYFVNWAI。金属离子对几丁质酶的活性影响较大 ,Ca2 + 、Na+ 、K+ 、Ba2 + 对酶有激活作用 ;Ag+ 、Fe2 + 、Cu2 + 、Hg2 + 对酶有显著的抑制作用 ;以胶体几丁质为底物的Km 和Vmax值分别为 9 .5 6mg mL和 2 2 . 12 μmol min。抗菌活性显示 ,该酶对供试病原菌有不同程度的抑制作用。

关键词：嗜热真菌 thermomyces lanuginosus 几丁质酶纯化性质

疏棉状嗜热丝孢菌Thermo myces lanuginosus YNUCC4154耐碱热稳定木聚糖酶的特性及其产生菌的系统发育分析

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应用与环境生物学报 2004年第4期10卷 480-483页

作者：李文鹏陈静廖昌珑周建国杨亚辉重庆市疾病预防控制中心重庆400042 山东农业大学植保学院山东泰安271018 云南云景林纸业股份有限公司云南景谷666400

从云南洱源县热泉中分离到一株产木聚糖酶嗜热真菌thermomyceslanuginosusYNUCC4 15 4 .对其 2 8SrD NA的 5′端约 90 0bp的片段进行了扩增和测序 ,并与GenBank中最相似的 12个分类单位进行了比较 .邻近接合法构建的系统发育树显示 ,T .... 详细信息

从云南洱源县热泉中分离到一株产木聚糖酶嗜热真菌thermomyceslanuginosusYNUCC4 15 4 .对其 2 8SrD NA的 5′端约 90 0bp的片段进行了扩增和测序 ,并与GenBank中最相似的 12个分类单位进行了比较 .邻近接合法构建的系统发育树显示 ,T .lanuginosusYNUCC4 15 4与几个产木聚糖酶的嗜热真菌关系较近 .在 30L全自动发酵罐中5 5℃发酵 5 0h后 ,木聚糖酶酶活达 10 32UmL-1.该木聚糖酶最适反应温度为 73℃ ,最适pH为 6 .5 ,在 10～ 6 7℃和pH 3～ 12时比较稳定 ,表明这是一种热稳定耐碱木聚糖酶 ,在造纸工业中具有良好的应用前景 .图 7表 1参 2

关键词：热稳定耐碱木聚糖酶 thermomyces lanuginosus YNUCCAl54 28S rDNA

外源热稳定葡萄糖淀粉酶处理对初烤烟叶的影响

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现代生物医学进展 2007年第8期7卷 1155-1157页

作者：李文鹏刘维涓云南大学工业微生物发酵工程重点实验室昆明650091 云南瑞升科技有限公司昆明650106

采用thermomyces lanuginosus YNUCC4154生产的热稳定葡萄糖淀粉酶处理新鲜烟叶后进行烘烤。结果表明:处理后上部烟叶(B2K、B3F和B4F)的平均总糖和还原糖分别比对照增加2.8%和7.9%,中部烟叶(C3F、C4F和CX1K)的平均总糖和还原糖分别比对... 详细信息

采用thermomyces lanuginosus YNUCC4154生产的热稳定葡萄糖淀粉酶处理新鲜烟叶后进行烘烤。结果表明:处理后上部烟叶(B2K、B3F和B4F)的平均总糖和还原糖分别比对照增加2.8%和7.9%,中部烟叶(C3F、C4F和CX1K)的平均总糖和还原糖分别比对照增加20.9%和40.7%,但对不同部位和不同等级烟叶的作用效果不同。葡萄糖淀粉酶处理样在香气质方面较未处理样效果提升明显,上部低次烟叶的整体改善程度较其他部位的烟叶明显。

关键词：烟叶烘烤热稳定葡萄糖淀粉酶 thermomyces lanuginosus YNUCC4154

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加拿大公布面包等临时营销许可

福建质量技术监督 2005年第11期 34-34页

目前，加拿大卫生部收到一份申请，要求允许使用由Aspergillus oryzae转基因种类（被指定为BECh2#3[pcaHj559]）获得的脂肪酶（Aspergillu soryzae转基因种类携带来自译码为脂肪酶的thermomyces lanuginosus／Fusarium oxysporum混合基因），用于面包、面粉、非标准面包食品、蛋黄／全蛋改制品及水解蛋黄素。对现有数据的评估支持由转基因Aspergillus oryzae BECh2#3（pCaHj559）获得的脂肪酶的安全及有效性。因此，卫生部建议修改食品药物法规，在面包、面粉、非标准面包食品、蛋黄／全蛋改制品，及水解蛋黄素中按照良好生产规范标准使用脂肪酶时，允许使用转基因Aspergillus oryzae BECh2#3（pCaHj559）作为产生脂肪酶的有机体。

关键词： Aspergillus 加拿大面包 thermomyces lanuginosus 许可营销脂肪酶转基因标准使用