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酵母β-葡聚糖改善thp-1/3T3-L1细胞体系胰岛素敏感性的研究

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酵母β-葡聚糖改善THP-1/3T3-L1细胞体系胰岛素敏感性的研究

作者：李淑桢华中科技大学

学位级别：硕士

目的:探究不可溶性及可溶性的酵母β-葡聚糖对thp-1/3T3-L1细胞体系胰岛素敏感性的改善作用及其相关机制。方法:利用诱导分化的thp-1巨噬细胞和3T3-L1脂肪细胞,构建thp-1/3T3-L1细胞体系模拟脂肪组织炎症状态;利用CCK-8试验检测细胞活性... 详细信息

目的:探究不可溶性及可溶性的酵母β-葡聚糖对thp-1/3T3-L1细胞体系胰岛素敏感性的改善作用及其相关机制。方法:利用诱导分化的thp-1巨噬细胞和3T3-L1脂肪细胞,构建thp-1/3T3-L1细胞体系模拟脂肪组织炎症状态;利用CCK-8试验检测细胞活性,选取合适的干预剂量和干预时间;采用干预剂量为0、10、20、50、100μg/mL的浓度梯度,干预时间为48 h,利用不可溶性酵母β-葡聚糖和可溶性酵母β-葡聚糖干预诱导分化完全的thp-1巨噬细胞,并提取干预后的细胞上清液,在3T3-L1脂肪细胞诱导分化的全过程加入该上清液进行干预诱导;利用电化学发光法和ELISA试剂盒检测干预后巨噬细胞上清液中的炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β水平;利用甘油三酯试剂盒检测3T3-L1脂肪细胞内的甘油三酯水平;利用荧光标记葡萄糖类似物2-NBDG进行胰岛素刺激的葡萄糖摄取实验;采用Western Blot实验检测IRS-1、p-IRs-1、AKT、p-AKT、adiponectin等蛋白质水平。结果:(1)与对照组相比,不可溶性酵母β-葡聚糖干预后的thp-1巨噬细胞上清液中促炎性细胞因子TNF-α、IL-6的水平随着干预剂量的增加而增加,在剂量为100μg/mL时达到最高,抗炎性细胞因子IL-10的水平在干预剂量为50μg/mL时最高(P值均小于0.05),而炎症因子IL-1β、趋化因子MCP-1及转化生长因子TGF-β的水平均未出现显著变化;(2)采用thp-1巨噬细胞上清液干预3T3-L1脂肪细胞,其甘油三酯和脂联素水平均显著降低,葡萄糖摄取功能显著降低,AKT、IRS-1蛋白表达显著下降(P值均小于0.001),而细胞甘油三酯、脂联素水平未改变;(3)采用不可溶性酵母β-葡聚糖干预后的thp-1巨噬细胞上清3T3-L1脂肪细胞,干预剂量为50和100μg/mL时其2-NBDG摄取显著增加(P值分别小于0.01和0.001),AKT磷酸化水平显著升高(P1),AKT、IRS-1、IRS-1磷酸化水平未改变;(4)可溶性β-葡聚糖干预对thp-1/3T3-L1细胞体系的炎症因子分泌及葡萄糖摄取均未产生改变。结论:不可溶性酵母β-葡聚糖能够影响细胞炎症因子的分泌,从而改善细胞的胰岛素敏感性。可溶性酵母β-葡聚糖对细胞炎症、胰岛素抵抗没有改善作用。

关键词：不可溶性酵母β-葡聚糖可溶性酵母β-葡聚糖 thp-1 3T3-L1 胰岛素敏感性炎症因子

流式细胞术分析PMA诱导thp-1分化为巨噬细胞的表型特征

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中国比较医学杂志 2017年第10期27卷 10-15,23页

作者：彭卓颖李想丛喆薛婧北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

目的用流式细胞术明确单独使用PMA诱导thp-1细胞分化而来的巨噬细胞的分化情况。方法首先用PMA刺激thp-1细胞分化为巨噬细胞,再分别使用LPS、IFN-γ和IL-6将细胞诱导为M1型巨噬细胞,用IL-4、IL-13和IL-6将细胞诱导为M2型巨噬细胞。显微... 详细信息

目的用流式细胞术明确单独使用PMA诱导thp-1细胞分化而来的巨噬细胞的分化情况。方法首先用PMA刺激thp-1细胞分化为巨噬细胞,再分别使用LPS、IFN-γ和IL-6将细胞诱导为M1型巨噬细胞,用IL-4、IL-13和IL-6将细胞诱导为M2型巨噬细胞。显微镜下观察三种细胞的形态学改变,并用流式细胞术检测各细胞主要CD分子表达的差异。结果当thp-1分化为巨噬细胞后变为贴壁生长,细胞形态呈较规则的圆形或椭圆形;M1和M2细胞形态不规则,细胞突起较明显,细胞颗粒度较大。巨噬细胞表面与抗原提呈功能相关的CD分子的表达均较低,大部分呈阴性;而M1和M2细胞表面这些CD分子的表达均较高。结论单独使用PMA刺激thp-1细胞所分化而来的巨噬细胞抗原提呈能力较弱,基本处于静息状态。

关键词： thp-1 巨噬细胞佛波酯流式细胞术

姬松茸多糖对急性单核细胞白血病thp-1细胞增殖和凋亡的影响

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中国老年学杂志 2017年第14期37卷 3413-3414页

作者：王苏亮张淑英曲影霍梅周虹齐齐哈尔医学院附属第二医院黑龙江齐齐哈尔161006

目的观察相对低分子量姬松茸多糖(LMPAB)对急性单核细胞白血病thp-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用4个浓度梯度的LMPAB分别对体外培养的thp-1细胞进行干预,然后应用水溶性四唑盐法(WST-1)检测LMPAB对细胞增殖的影响,借助膜联蛋白V/7氨... 详细信息

目的观察相对低分子量姬松茸多糖(LMPAB)对急性单核细胞白血病thp-1细胞增殖和凋亡的影响。方法采用4个浓度梯度的LMPAB分别对体外培养的thp-1细胞进行干预,然后应用水溶性四唑盐法(WST-1)检测LMPAB对细胞增殖的影响,借助膜联蛋白V/7氨基放线菌素Annexin V/7-AAD,双标记法分析细胞凋亡情况,分别采用PCR与Western印迹检测Bax和Caspase-3信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的表达变化。结果 WST-1检测结果显示,LMPAB对thp-1细胞的增殖具有抑制作用,且大体呈现剂量依赖性(Pthp-1细胞凋亡的作用,且大体呈现剂量依赖性(Pthp-1细胞时增殖和凋亡,其抗肿瘤效应可能通过调控线粒体途径实现。

关键词：姬松茸多糖 thp-1 凋亡

thp-1来源巨噬细胞的诱导分化及CD137/CD137L逆向信号在其中的作用

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THP-1来源巨噬细胞的诱导分化及CD137/CD137L逆向信号在其中的作用

作者：林强苏州大学

学位级别：硕士

研究背景：不同活化状态的巨噬细胞在组织损伤及修复重塑中的不同作用近年来受到愈来愈多的重视。经典活化型巨噬细胞（M1）清除病原体及衰老死亡细胞的同时会造成炎症反应，导致一定程度的组织细胞形态及功能的损害，非经典活化型巨噬... 详细信息

研究背景：不同活化状态的巨噬细胞在组织损伤及修复重塑中的不同作用近年来受到愈来愈多的重视。经典活化型巨噬细胞（M1）清除病原体及衰老死亡细胞的同时会造成炎症反应，导致一定程度的组织细胞形态及功能的损害，非经典活化型巨噬细胞（M2）则对组织细胞的损害具有修复重塑功能。不同的微环境能使单核细胞向M1或M2两个不同表型分化，并能使已分化为某一固定表型的巨噬细胞向另一表型转变。已有个别通过诱导巨噬细胞不同表型分化而治疗疾病的研究。CD137/CD137L介导的逆向信号对巨噬细胞具有多方面影响，但是否会影响巨噬细胞表型的转变目前尚不明确。目的：本实验使用不同方法诱导出thp-1来源的不同表型巨噬细胞，比较各表型间标记物的差异，建立起thp-1来源巨噬细胞的表型分化体系，为进一步的体内实验作好准备，同时研究鼠抗人CD137L单克隆抗体（1F1）对thp-1来源的巨噬细胞表型的影响。方法:在豆蔻酰佛波醇乙酯（PMA）刺激thp-1分化为巨噬细胞的过程中，分别加用LPS+IFN-γ、IL-4、1F1刺激，同时设立control组、小鼠IgG组，培养48小时后收取细胞及上清液，行逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）以及流式细胞术检测诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、精氨酸酶-1（arginase-1）、CD206的信使RNA（mRNA）以及蛋白表达水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液IL-6、TNF-α、IL-10的表达。结果：***刺激thp-1分化为巨噬细胞的过程中，LPS+IFN-γ使iNOS、IL-6及TNF-α表达升高（P＜0.05），IL-4则使iNOS、IL-6、TNF-α表达降低而IL-10表达水平明显升高（P＜0.05）;***的刺激使thp-1分化为巨噬细胞的过程中上调CD137L的表达，1F1使thp-1在分化为巨噬细胞的过程中上调iNOS mRNA的表达（P＜0.05），但未影响iNOS蛋白表达率以及IL-6、TNF-α、IL-10的分泌;***-1及CD206在此条件下未见表达。结论：***刺激thp-1分化为巨噬细胞的过程中同时加用LPS+IFN-γ能使其向M1型巨噬细胞分化;加用IL-4则使其向M2型巨噬细胞分化;***刺激thp-1分化为巨噬细胞的过程中上调CD137L的表达，1F1虽升高iNOS mRNA，但对iNOS蛋白表达率以及IL-6、TNF-α、IL-10的分泌无影响，在此条件下可能并不影响thp-1来源巨噬细胞的表型分化;***-1来源的巨噬细胞在此条件下不能表达arginase-1以及CD206，此两种分子不适宜作为thp-1来源巨噬细胞的分型标记。

关键词：巨噬细胞表型 CD137/CD137L thp-1 iNOS Arginase-1 CD206

威灵仙提取物促使M1型thp-1源巨噬细胞向M2型极化的研究

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时珍国医国药 2021年第12期32卷 2893-2898页

作者：陈博鉴黄永明刘文渤林跃玮梁超伦冯恩辉广东省中医院广东广州510120 广州中医药大学第二临床医学院广东广州510405

目的研究威灵仙提取物对thp-1源巨噬细胞极化的影响。方法用佛波酯诱导thp-1为M0型巨噬细胞,LPS诱导M1型巨噬细胞极化,IL-4诱导M2型巨噬细胞极化,观察并记录细胞状态。以威灵仙提取物干预上述细胞,CCK-8法检测thp-1源巨噬细胞增殖情况... 详细信息

目的研究威灵仙提取物对thp-1源巨噬细胞极化的影响。方法用佛波酯诱导thp-1为M0型巨噬细胞,LPS诱导M1型巨噬细胞极化,IL-4诱导M2型巨噬细胞极化,观察并记录细胞状态。以威灵仙提取物干预上述细胞,CCK-8法检测thp-1源巨噬细胞增殖情况、台盼蓝染色检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡情况及观察巨噬细胞极化表型、ELISA法检测分泌的细胞因子。结果威灵仙干预48h, 0.5、1.0及2.0g/L组的增殖活性均高于对照组,且2.0g/L组最高(P1及M2组,两组的CD68和CD86表达均略有下降,而CD206和CD163均有明显升高,其中M2-威灵仙组CD206表达显著升高。威灵仙提取物处理后抑制了M1型巨噬细胞TNF-α和IL-6的表达(P1),而促进了TGF-β1的表达(P1的表达(P1),而对TNF-α的表达无明显作用。结论威灵仙对thp-1源巨噬细胞的增殖、活性具有良好的促进作用,且能够抑制其向M1型极化,促使其向M2型极化。

关键词：威灵仙 thp-1 巨噬细胞极化

不对称二甲基精氨酸对thp-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子的影响

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中国动脉硬化杂志 2010年第3期18卷 169-172页

作者：崔璐华王庸晋王金胜王治平李启富山西医科大学第一医院山西省太原市030001 长治医学院心血管病研究所长治医学院附属和平医院山西省长治市046000

目的研究不对称二甲基精氨酸对thp-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子的影响。方法 150nmol/L佛波酯诱导thp-1细胞48h使其转化为巨噬细胞,并用抗人CD68进行免疫细胞化学鉴定,以不同浓度的不对称二甲基精氨酸(1、5、10、20和30μmol... 详细信息

目的研究不对称二甲基精氨酸对thp-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子的影响。方法 150nmol/L佛波酯诱导thp-1细胞48h使其转化为巨噬细胞,并用抗人CD68进行免疫细胞化学鉴定,以不同浓度的不对称二甲基精氨酸(1、5、10、20和30μmol/L)作用于thp-1源性巨噬细胞24h及20μmol/L不对称二甲基精氨酸作用于thp-1源性巨噬细胞0h、6h、12h、24h及48h,逆转录聚合酶链反应检测各组细胞的巨噬细胞移动抑制因子mRNA表达水平,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中巨噬细胞移动抑制因子的蛋白含量。结果与对照组相比,5、10、20和30μmol/L的不对称二甲基精氨酸作用于thp-1源性巨噬细胞24h后,巨噬细胞移动抑制因子的mRNA和蛋白表达水平均明显提高(Pthp-1源性巨噬细胞12、24和48h,巨噬细胞移动抑制因子的mRNA和蛋白表达水平均明显提高(Pthp-1源性巨噬细胞的巨噬细胞移动抑制因子表达,并呈剂量和时间依赖性,不对称二甲基精氨酸可能通过诱导巨噬细胞移动抑制因子的表达而促进动脉粥样硬化的发生和发展。

关键词：不对称二甲基精氨酸 thp-1 巨噬细胞移动抑制因子动脉粥样硬化

幽门螺杆菌对GES-1细胞功能的影响及LAIR-1对幽门螺杆菌诱导thp-1细胞凋亡的作用

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幽门螺杆菌对GES-1细胞功能的影响及LAIR-1对幽门螺杆菌诱导THP-1...

作者：孙辉滨州医学院

学位级别：硕士

目的:1.明确幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H. pylri)不同菌株对人胃上皮细胞GES-1的细胞凋亡、增殖、粘附、迁移等功能的影响。2.研究白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(Leukocyte-associated immuno-globulin-like receptor-1,LAIR-1)对单核细胞 thp-1 细胞凋亡的作用。方法:1.将H. pylori ATCC26695和SS1与人胃上皮细胞GES-1共同培养,采用流式细胞仪检测细胞凋亡水平,EdU法测定细胞增殖活性,噻唑蓝比色法检测细胞粘附情况,划痕实验及活细胞工作站系统分析细胞迁移能力。2. ATCC26695与单核细胞thp-1共培养,流式细胞术检测细胞凋亡及LAIR-1 蛋白的表达;应用 Lipofectamine RNAiMAX 转染 3 对 LAIR-1 siRNAs 入单核细胞thp-1中,倒置荧光显微镜观察脂质体转染效率,realtime-PCR、流式细胞术检测LAIR-1的表达并筛选出最有效的siRNA,Western Blot验证LAIR-lsiRNA的沉默效应;将最有效的siRNA转染入单核细胞thp-1, 48 h后加入ATCC26695共同培养24 h,流式细胞术检测细胞表面LAIR-1蛋白的表达及细胞凋亡率。结果:1. SS1和ATCC26695在感染GES-1细胞Oh、3h、12h及24h后的细胞凋亡率分别为(3.57±2.00)%、(12.80±1.85)%、(15.23±3.18)%、(33.30±5.89)%和(5.00±3.15)%、(31.83±4.39)%、(50.80±7.54)%、(54.00±6.41)%。两感染组细胞在感染后3 h、12 h及24 h的凋亡率明显高于空白对照组(P1 ),ATCC26695感染组细胞在各个时间点的细胞凋亡率均高于SS1感染组(P1和ATCC26695在感染GES-1细胞各个时间点后的细胞增殖率无明显变化,分别为(33.66±4.13)%、(28.44±1.39)%,与空白对照组(30.24±1.72)%相比较,两菌株对GES-1细胞增殖均无明显影响,且各个时间点SS1感染组与ATCC26695感染组的细胞增殖率差异均无统计学意义(P>0.05);***1和ATCC26695在感染GES-1细胞3h、12h及24h后的细胞粘附率分别为(81.61±2.76)%、(68.24±6.29)%、(37.98±5.48)% 和(76.95±4.97)%、(56.71±9.71)%、(45.77±3.88)%,SS1 感染组和 ATCC26695 感染组细胞粘附率较空白对照组(96.00±2.3)%明显降低(P0.05);4. SS1和ATCC26695在感染GES-1细胞各个时间点后的细胞迁移速度无明显变化,分别为(4.04±0.55)μm/h、(1.86±0.59)μm/h,与空白对照组(1.78±0.52)μm/h相比较,ATCC26695感染组细胞迁移的能力明显增强(P1感染组与对照组迁移能力无明显差异(P>0.05)。5. ATCC26695感染thp-1细胞6h、12h、24h和48h后的细胞凋亡率分别为(84±1.77)%、(69.13±4.29)%、(48.3±3.37)%、(21.1±4.67)%,LAIR-1 蛋白表达相对荧光强度分别为 14934±178、14369 ±244、12259±523、7438±539,空白组细胞凋亡率及LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为(4.3±2.17)%、15576±626;6.细胞转染效率为38.9%,并且3对不同LAIR-1 siRNAs转染thp-1细胞后LAIR-1 mRNA及蛋白表达水平均有所下降,转染48 h后最有效的siRNA在mRNA水平和蛋白表达水平的沉默效率分别为(39.1 ±4.67)%、(38.4±3.18)%;7.将筛选出的最有效的siRNA转染thp-1细胞48 h后,用ATCC26695共培养24h,流式细胞仪检测结果显示转染组与阴性对照组细胞凋亡率分别为(56.1±9.8)%、(36.9±3.2)%,转染后感染组与空白组LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为 12181±219、10228 ±136。结论:1. ATCC26695和SS1对胃上皮细胞GES-1的细胞凋亡、增殖、粘附和迁移等功能的影响存在不同程度上的差别,ATCC26695促进细胞凋亡、抑制细胞粘附的能力均比SS1强。***可显著下调LAIR-1的表达,参与诱导TH

关键词：幽门螺杆菌 GES-1 细胞功能 thp-1 白细胞相关免疫球蛋白样受体-1

结核分枝杆菌H37Rv感染thp-1源性巨噬细胞基因调控网络的构建与分析

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结核分枝杆菌H37Rv感染THP-1源性巨噬细胞基因调控网络的构建与分...

作者：徐峰吉林大学

学位级别：硕士

背景及目的:2016年全球约170万人死于结核病(Tuberculosis,TB),超过因感染人类免疫缺陷病毒(HIV)而死亡的病人人数,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)作为TB的病原体,再次成为了导致全球人类死亡的主要传染病因素。近年来,... 详细信息

背景及目的:2016年全球约170万人死于结核病(Tuberculosis,TB),超过因感染人类免疫缺陷病毒(HIV)而死亡的病人人数,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,***)作为TB的病原体,再次成为了导致全球人类死亡的主要传染病因素。近年来,由于耐药结核分枝杆菌甚至多重耐药结核分枝杆菌的出现和快速传播,加之目前卡介苗(BCG)疫苗的保护力有限,使得TB疫情很难得到有效控制。基因芯片技术可以同时检测上千万个基因的表达,绘制全基因组表达谱,这一技术的产生拓展了生物学的研究方法,极大地推动了基因功能的阐明以及基因间相互作用的研究。本研究基于结核分枝杆菌H37Rv感染人急性白血病单核细胞(Human acute monocytic leukemia cell line,thp-1)源性巨噬细胞表达谱芯片,运用生物信息学的分析方法,构建H37Rv感染thp-1源性巨噬细胞基因调控网络,挖掘出与结核分枝杆菌感染过程相关的功能模块,并筛选出关键基因,对深入了解结核病的发病及宿主防御机制具有重要意义,并为更有效地诊断与治疗结核病提供了新视角。材料及方法:从NCBI的GEO Datasets数据库中获取结核分枝杆菌H37Rv感染人白血病单核细胞thp-1源性巨噬细胞模型的芯片数据集,使用R语言的limma包筛选出差异表达的基因,运用DAVID(Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery)对差异基因进行功能注释分析(GO-Analysis)和信号通路富集分析(Pathway-Analysis),再整合转录调控元件数据库(Transcriptional Regulatory Element Database,TRED)分析差异表达的转录因子与基因的靶向关系,构建结核分枝杆菌H37Rv感染thp-1源性巨噬细胞转录因子-基因调控网络,进一步运用DAVID对网络调控图中的基因和转录因子(Transcription Factor,TF)进行功能注释分析以及疾病关联分析。进一步构建结核分枝杆菌H37Rv感染thp-1源性巨噬细胞的细胞实验模型,借助形态学分析方法、激光共聚焦显微镜和ELISA方法等验证模型构建成功与否,并通过qRT-PCR验证网络中重要节点基因(CYP19A1)和转录因子(NFKB1,STAT1,PPARG,CEBPB)的表达水平,最后对基因NFKB1,CEBPB和CYP19A1进行受试者工作特征曲线(ROC曲线,receiver operator characteristic curve)分析,确定其区分感染细胞与未感染细胞的特异性与灵敏度。实验结果:本研究收集到2个基因表达谱原始数据集,利用limma包筛选获得625个差异表达基因,其中427个基因表达上调,198个基因表达下调。对差异表达基因进行GO分析,得到在生物过程(Biologocal Process,BP)、细胞组分(Cellular Component,CC)和分子功能(Molecular Function,MF)分类中的基因条目分别为179、61和85条,如defense response to virus,response to virus,inflammatory response(BP);cytosol,cytoplasm,nucleoplasm(CC);chemokine activity,protein binding,ATP binding(MF)等。Pathway分析发现差异基因主要富集在Influenza A,Herpes simplex infection,NF-kappa B signaling pathway等47个条目。根据差异表达的8个转录因子(NFKB1,STAT1,PPARG,CEBPB,E2F2,STAT4,RELB,NFKB2),整合TRED数据库,建立了包含58个差异基因的转录因子-基因调控网络,其中转录因子NFKB1,STAT1,CEBPB和PPARG调控了大部分差异表达基因,网络中同时受三个以上转录因子调控的基因称为枢纽基因(Hub Gene),包括CYP19A1,IL6和IRF1,其中CYP19A1是被多个转录因子调控的基因。进一步分析网络中58个基因主要注释在inflammatory response、immune response、extracellular space、cytosol、protein binding、transcription factor activity,sequence-specific DNA binding等功能上,并与cancer、infection、immune、renal

关键词：结核病 H37Rv thp-1 基因表达谱基因调控网络

合成七肽在牛种布鲁氏菌RB51株侵染人单核细胞系thp-1过程中对MAPK通路的影响

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中国病原生物学杂志 2016年第2期11卷 103-106,121页

作者：牟路萌张亚丽王丽娜杜景云王杰陈创夫赵姗姗郭利萍李红雨王远志石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室新疆石河子832002 石河子大学第一附属医院新疆石河子832000 石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 河北省保定市妇幼保健院河北保定071000

目的观察七肽LPAAQKT在布鲁氏菌侵染人单核细胞系thp-1过程中对MAPK通路的影响。方法通过MTT法检测合成七肽对thp-1的毒性;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测七肽对感染细胞凋亡的影响;通过CFU计数分析七肽对感染细胞内细菌数量的影响;采... 详细信息

目的观察七肽LPAAQKT在布鲁氏菌侵染人单核细胞系thp-1过程中对MAPK通路的影响。方法通过MTT法检测合成七肽对thp-1的毒性;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测七肽对感染细胞凋亡的影响;通过CFU计数分析七肽对感染细胞内细菌数量的影响;采用qRT-PCR和Western blot检测牛种布鲁氏菌RB51感染thp-1不同阶段MAPK通路中ERK1/2、JNK1/2、P38的mRNA和蛋白活化及表达情况。结果合成七肽对thp-1无毒性作用;流式细胞术检测七肽对thp-1细胞凋亡作用的影响为:感染复数50∶1组4h时对细胞凋亡有促进作用,48h时对细胞凋亡有抑制作用;CFU计数显示在感染前预先加入七肽导致thp-1细胞内布鲁氏菌数少于未加七肽组;qRTPCR和磷酸化Western blot显示,感染4h时,七肽降低感染组中erk1的转录与蛋白活化,感染48h时七肽降低jnk1/2的转录与蛋白活化。结论环化七肽CLPAAQKTC参与感染细胞的凋亡过程,因此有望用于布鲁氏菌病治疗药物的研发。

关键词：布鲁氏菌RB51 thp-1 七肽丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 细胞凋亡