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肺炎嗜衣原体CPAF诱导thp-1细胞产生前炎症细胞因子和凋亡

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第5期30卷 487-492页

作者：胡旃吴移谋陈虹亮郑江花周洲唐国芳南华大学病原生物学研究所衡阳421001 南华大学附属第二医院

目的研究肺炎嗜衣原体（Chlamydophila pneumoniae,Cpn）衣原体蛋白酶样活性因子（Chlamydial protease-like activity factor,CPAF）能否在体外诱导人单核细胞thp-1产生前炎症细胞因子和凋亡,为进一步探索Cpn感染宿主致病的分子机制... 详细信息

目的研究肺炎嗜衣原体（Chlamydophila pneumoniae,Cpn）衣原体蛋白酶样活性因子（Chlamydial protease-like activity factor,CPAF）能否在体外诱导人单核细胞thp-1产生前炎症细胞因子和凋亡,为进一步探索Cpn感染宿主致病的分子机制提供实验依据.方法将Cpn CPAF全基因克隆于pGEX6p-2载体上,在大肠杆菌（E coli）中诱导表达重组蛋白,经去内毒素纯化柱和琼脂糖凝胶FF获得纯化且无脂多糖（LPS）污染的重组蛋白GST-CPAF.以不同浓度的该蛋白作用于thp-1,ELISA检测TNF-α吨和IL-6水平.MTT法检测经该蛋白处理后thp-1的增生或抑制作用,用Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、Armexin V-FITC-PI染色法检测细胞凋亡情况.结果制备的莺组蛋白GST-CPAF以时间和剂量依赖方式刺激thp-1分泌TNF-α和IL-6,并以剂量依赖方式抑制thp-1增殖;当GST-CPAF刺激thp-1细胞24 h后,能诱导细胞调亡.结论制备的Cpn重组蛋白GST-CPAF能诱导thp-1产生前炎症细胞因子和凋亡,可能是Cpn致病机制中的一个因素.

关键词：肺炎嗜衣原体 CPAF thp-1 前炎症细胞因子细胞凋亡

鼻咽癌细胞条件培养基诱导thp-1源巨噬细胞向M2型极化

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广西医科大学学报 2022年第5期39卷 699-704页

作者：姚小暄杨雨嘉霍慧敏江川崔昆黄中恒唐锦平韦正波谢莹广西医科大学附属肿瘤医院南宁530021 广西医科大学生命科学研究院南宁530021 区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点实验室南宁530021

目的:探讨鼻咽癌细胞系(5-8F、HONE1)来源的条件培养基(CM)对thp-1来源巨噬细胞极化方向的影响。方法:分别用50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L佛波酯(PMA)刺激人单核细胞白血病thp-1细胞诱导分化为M0型巨噬细胞(thp-1-M0组),24 h后,加... 详细信息

目的:探讨鼻咽癌细胞系(5-8F、HONE1)来源的条件培养基(CM)对thp-1来源巨噬细胞极化方向的影响。方法:分别用50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L佛波酯(PMA)刺激人单核细胞白血病thp-1细胞诱导分化为M0型巨噬细胞(thp-1-M0组),24 h后,加入10 pg/mL脂多糖(LPS)和20 ng/mL干扰素(IFN)-γ处理细胞72 h,使M0向类M1型细胞方向极化(thp-1-M1组);加入20 ng/mL IL-4和20 ng/mL IL-13处理thp-1-M0使其向类M2型方向极化(thp-1-M2组)。流式细胞术检测巨噬细胞标记物CD14、CD68、CD86、CD163和CD206的表达。制备鼻咽癌5-8F及HONE-1细胞的条件培养基,培养thp-1-M0细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β1基因表达,分析肿瘤细胞刺激M0巨噬细胞的极化方向。结果:100 nmol/L为PMA的最佳刺激浓度。thp-1-M1组CD68、CD86、CD163表达及IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β1基因表达上调,thp-1-M2组CD14表达下调,CD68、CD86、CD163、CD206表达及IL-10、TGF-β1基因表达上调(均P1表达降低,IL-10表达升高(均Pthp-1源M0型巨噬细胞偏向M2表型极化,HONE1细胞条件培养基培养的M0型巨噬细胞极化为M1/M2混合表型。

关键词： thp-1 巨噬细胞鼻咽癌细胞极化

LPXN过表达对thp-1细胞增殖、粘附和侵袭的影响及其机制研究

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中国实验血液学杂志 2017年第3期25卷 673-677页

作者：戴海萍朱国华吴丽丽王谦姚红王琴荣文丽君仇惠英沈群陈苏宁吴德沛苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所、卫生部血栓与止血重点实验室、血液学协同创新中心江苏苏州215006 南京中医药大学第一临床医学院江苏南京210046 南京中医药大学附属医院江苏南京210029

目的:探讨LPXN过表达对白血病细胞株thp-1增殖、粘附和侵袭的影响及其可能机制。方法:构建稳定过表达LPXN的thp-1细胞。CCK-8检测细胞增殖能力;粘附实验检测细胞对Fn的粘附能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测ERK,Inte... 详细信息

目的:探讨LPXN过表达对白血病细胞株thp-1增殖、粘附和侵袭的影响及其可能机制。方法:构建稳定过表达LPXN的thp-1细胞。CCK-8检测细胞增殖能力;粘附实验检测细胞对Fn的粘附能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测ERK,Integrinα4,α5和β1表达;明胶酶谱法检测细胞分泌MMP2和MMP9活性的变化。结果:成功构建稳定过表达LPXN的thp-1细胞。过表达LPXN的thp-1细胞增殖、对Fn的粘附、ERK,Integrinα4,α5和β1表达均高于对照组。过表达LPXN的thp-1细胞跨transwell的侵袭能力和MMP2活性均强于对照组。结论:LPXN基因可能通过上调ERK的表达促进thp-1细胞增殖;通过上调Integrinα4、α5、β1的表达促进thp-1细胞的粘附;通过激活M M P2促进thp-1细胞侵袭。

关键词： LPXN 增殖粘附侵袭 thp-1

LNK基因沉默对thp-1细胞EPO、EPOR表达影响的研究

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中国实验血液学杂志 2019年第4期27卷 1013-1019页

作者：田润梅罗茜谭梅史良黄成双苏琼陈艳遵义医学院附属医院小儿内二科

目的:探讨LNK基因沉默对人单核细胞白血病细胞(thp-1)EPO、EPOR表达的影响。方法:培养thp-1细胞,以慢病毒为载体介导SiRNA稳定沉默LNK基因,感染72h后在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率,RT-PCR验证LN... 详细信息

目的:探讨LNK基因沉默对人单核细胞白血病细胞(thp-1)EPO、EPOR表达的影响。方法:培养thp-1细胞,以慢病毒为载体介导SiRNA稳定沉默LNK基因,感染72h后在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率,RT-PCR验证LNK沉默效应,并检测EPO及EPOR mRNA表达水平;应用Western blot检测LNK、EPO及EPOR蛋白水平。结果:慢病毒感染72h在荧光倒置显微镜下观察GFP表达水平达85%以上,流式细胞术检测感染效率均在99%以上;LNK沉默组LNK、EPO及EPORmRNA表述水平明显低于对照组(Pthp-1细胞株。沉默LNK基因,则EPO及EPOR表达下调,提示LNK可能参与了EPO及EPOR的调控。

关键词： thp-1 淋巴细胞特异性连接蛋白促红细胞生成素促红细胞生成素受体

LNK基因沉默和过表达对thp-1细胞STAT3表达影响的研究

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中国实验血液学杂志 2019年第5期27卷 1469-1475页

作者：田润梅史良容颖谭梅罗茜苏琼黄成双陈艳遵义医学院附属医院小儿内二科

目的:探讨LNK基因沉默和过表达对人单核细胞白血病细胞(thp-1)STAT3基因表达的影响。方法:培养thp-1细胞;以慢病毒为载体介导SiRNA、LNK(SH2B3)稳定沉默及过表达LNK基因;转染72h后于倒置荧光显微镜下观察细胞的GFP表达量;应用流式细胞... 详细信息

目的:探讨LNK基因沉默和过表达对人单核细胞白血病细胞(thp-1)STAT3基因表达的影响。方法:培养thp-1细胞;以慢病毒为载体介导SiRNA、LNK(SH2B3)稳定沉默及过表达LNK基因;转染72h后于倒置荧光显微镜下观察细胞的GFP表达量;应用流式细胞术检测慢病毒感染效率;RT-PCR验证LNK沉默及过表达效应,检测STAT3 mRNA表达量;Western blot检测LNK、STAT3蛋白水平。结果:慢病毒感染72 h thp-1细胞GFP表达量达85%以上,细胞感染效率在99%以上。LNK沉默组LNK及STAT3 mRNA表达量明显低于对照组,而LNK过表达组的LNK和STAT3 mRNA表达水平明显高于对照组(Pthp-1细胞株。沉默LNK基因导致STAT3表达下调;过表达LNK基因,使STAT3表达上调;此结果提示LNK可能参与了STAT3的调控。

关键词： thp-1 淋巴细胞特异性连接蛋白信号转导转录活化因子3

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第9期36卷 667-675页

作者：郭刚强陈静陈文静叶璐璐孙祥威张良章慧娣林巧爱沈贤张丽芳薛向阳温州医科大学微生物学和免疫学教研室 325035 温州医科大学附属第一医院风湿免疫科 325035 温州医科大学附属第一医院胃肠外科 325035 温州医科大学附属第一医院肾内科 325035

目的：构建含人巨细胞病毒（ HCMV）潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对thp-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染thp-1细胞,通过绿色... 详细信息

目的：构建含人巨细胞病毒（ HCMV）潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对thp-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染thp-1细胞,通过绿色荧光蛋白表达确定感染thp-1细胞最佳MOI值；定量PCR分析UL138表达对thp-1细胞前炎症细胞因子表达变化,通过定量PCR芯片分析趋化因子及受体的表达变化。结果成功构建了携带UL138基因的重组腺病毒,TCID50法测定病毒的滴度达1x1011 PFU/ml。利用重组腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达检测thp-1细胞的感染率,结果显示,重组腺病毒以MOI=1∶100感染thp-1细胞,感染率为60%, RT-PCR和Western blot证实了thp-1细胞能够表达UL138,且随着时间的延长,蛋白表达量逐渐增多。定量PCR检测发现,thp-1细胞 UL138过表达后,可明显抑制IL-18、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等前炎性细胞因子的表达。定量PCR芯片分析显示,UL138表达明显改变thp-1单核细胞内趋化因子及受体的表达,除外 CCL17、CCL21、CCL22、XCL2等趋化因子以及 CCR2、CXCR1、CXCR2、 CXCR4及CX3CR1等趋化因子受体在不同时间点上调表达外, CXCL1、CXCL3、CXCL9、CXCL10、CXCL11等大部分趋化因子及受体的表达均显著减少。结论成功构建了可感染thp-1单核细胞的UL138基因重组腺病毒；thp-1单核细胞过表达UL138可明显影响其功能。

关键词：人巨细胞病毒潜伏感染 UL138 重组腺病毒 thp-1 单核细胞趋化因子及受体

let-7e 对脂多糖诱导thp-1 细胞产生TNF-α 的影响

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第12期 7-10页

作者：张倩倩王莉杰于婷中山大学附属第五医院分子影像中心广东珠海519000

研究let-7e对脂多糖(LPS)诱导thp-1细胞产生TNF-α的作用。方法用1 mg/L TNF-α 诱导剂LPS刺激thp-1细胞,ELISA 法检测细胞培养上清中TNF-α表达量并筛选最佳LPS刺激时间;thp-1细胞转染let-7e mimic(let-7e组)及其negative control(CTL组)48 h,再用1 mg/L LPS刺激后,qRT-PCR 和ELISA 法分别在mRNA 和蛋白水平上检测TNF-α 的表达情况。结果 LPS 刺激thp-1 细胞1 h 即出现TNF-α 表达量明显增高,3 h 时达到最高峰随后呈下降趋势。let-7e组TNF-α的表达量在mRNA 水平与CTL 组无差异,但在蛋白水平表达量低于CTL 组。结论 let-7e 能够在一定程度上抑制LPS 诱导thp-1 细胞产生的TNF-α。

关键词： let-7e TNF-α LPS thp-1 细胞

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制thp-1源性巨噬细胞向M1型极化

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南方医科大学学报 2021年第3期41卷 344-351页

作者：邱峰张琳郑介婷操龙斌张子康邓屹琪南方医科大学南海医院医学检验科广东佛山528244 南方医科大学中医药学院广东广州510515 广州中医药大学第二附属医院急诊科广东广州510120

目的探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组:不同浓度的(5、10μmol/L)穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组:溶媒3‰DMSO... 详细信息

目的探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组:不同浓度的(5、10μmol/L)穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组:溶媒3‰DMSO;无药对照组:不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的thp-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达(P1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达(P1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。

关键词：穗花杉双黄酮巨噬细胞极化动脉粥样硬化 PPAR-α/γ thp-1

甘露聚糖结合凝集素抑制肽聚糖刺激thp-1／CD14细胞产生的炎性反应及机制

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第11期32卷 977-982页

作者：王凡平王明永杨建斌赵东方连荣徐素玲邵峰孙瑞利郭庆合李海斌郭继强宋志善新乡医学院医学检验系 453003 新乡医学院第一附属医院检验科学院第三附属医院检验科

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（mannan-bindinglectin，MBL）对肽聚糖（peptidogly—can，PGN）刺激佛波酯（PMA）活化的thp-1／CD14细胞产生TNF—α和IL-6影响。方法用PMA活化thp-1／CD14细胞，以不同浓度人MBL预处理2b后再用PGN刺激24... 详细信息

目的探讨甘露聚糖结合凝集素（mannan-bindinglectin，MBL）对肽聚糖（peptidogly—can，PGN）刺激佛波酯（PMA）活化的thp-1／CD14细胞产生TNF—α和IL-6影响。方法用PMA活化thp-1／CD14细胞，以不同浓度人MBL预处理2b后再用PGN刺激24h。收集培养上清，以ELISA从蛋白水平分析TNF-α和IL-6的产生。收集细胞提取总RNA，以RT—PCR从转录水平评估TNF—α和IL-6的表达。FACS分析MBL与thp-1／CD14细胞的结合，并进一步分析MBL对PGN结合thp-1／CD14细胞的影响，Western blot分析NF-κB的细胞核移位。结果ELISA检测发现，PGN可刺激PMA活化的各thp-1／CD14细胞分泌TNF-α和IL-6，高浓度MBL（10～20mg／L）可抑制PGN诱导细胞分泌TNF—α和IL-6；RT—PCR分析亦显示，MBL（20mg／L）对PGN诱导的TNF—α和IL-6的mRNA表达有不同程度的抑制作用；流式细胞术检测显示MBL能够与thp-1／CD14细胞以Ca^2＋依赖形式结合，PGN可竞争性抑制MBL结合thp-1／CD14细胞。MBL还可通过结合thp-1／CD14竞争性抑制PGN与thp-1／CD14的结合。Western blot分析显示，MBL对PGN诱导的NF—κB细胞核移位有显著的抑制作用。结论MBL通过配体结合抑制PGN诱导的thp-1／CD14细胞产生的细胞反应，提示MBL能够在PGN诱导的炎性反应中起免疫调控作用。

关键词：甘露聚糖结合凝集素肽聚糖 thp-1 CD14细胞细胞因子免疫调节