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猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其OmpW、tbpa蛋白的克隆表达

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猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其OmpW、TbpA蛋白的克隆表达

作者：代小童华中农业大学

学位级别：硕士

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是一类败血性革兰氏阴性致病菌,可以感染多种动物,使其产生不同程度的损伤。在猪中主要引起猪肺疫和猪萎缩性鼻炎,给养猪业带来了巨大的危害。目前该病的防控主要依赖于药物治疗及疫苗免疫,... 详细信息

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）是一类败血性革兰氏阴性致病菌,可以感染多种动物,使其产生不同程度的损伤。在猪中主要引起猪肺疫和猪萎缩性鼻炎,给养猪业带来了巨大的危害。目前该病的防控主要依赖于药物治疗及疫苗免疫,但随着抗生素的大量使用,耐药性问题愈加多见,这无疑加大了猪多杀性巴氏杆菌病预防控制的难度。因此,本实验通过收集临床发病猪的口鼻拭子及组织病料,对来自不同地区规模化养殖场的猪多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定及生物学特性分析,评估目前我国部分地区养殖场猪多杀性巴氏杆菌的优势血清型菌株;通过生物信息学分析发现在不同源性多杀性巴氏杆菌及猪源多杀性巴氏杆菌不同血清型菌株中存在高度保守的ompW、tbpa基因,通过原核表达对OmpW、tbpa蛋白进行克隆表达,为猪多杀性巴氏杆菌候选免疫原性蛋白提供基础。具体内容如下:1.猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定为了探究猪多杀性巴氏杆菌在规模化猪场的流行情况,首先对来自广西、湖北、内蒙古3个地区规模化猪场中患有呼吸道症状发病猪只的口鼻拭子及组织病料进行病原菌的分离培养、染色镜检、生化鉴定及PCR检测鉴定,结果显示分离得到6株多杀性巴氏杆菌,其中荚膜血清A型1株（命名为GX-Pm A）,荚膜血清D型5株（命名为GX-Pm D1、GX-Pm D2、GX-Pm D3、GX-Pm D4、NMG-Pm D5）。选取20种常见药物进行药敏实验,结果显示GX-Pm D1、GX-Pm D2、GX-Pm D3、GXPm D4未见耐药现象,而NMG-Pm D5表现出明显的新霉素及庆大霉素耐药现象。小鼠致病力实验结果表明荚膜血清A型菌株毒力强于荚膜血清D型菌株,通过攻毒后小鼠死亡数量时间及病理变化,成功筛选出了毒力较强的GX-Pm A及GX-Pm D4菌株。2.猪多杀性巴氏杆菌候选免疫原性蛋白OmpW、tbpa的克隆表达通过对ompW、tbpa基因及其表达产物进行生物信息学分析,证实了这两个基因的高度保守性,蛋白质理化性质分析结果表明OmpW属于疏水类蛋白质,tbpa蛋白属于亲水类蛋白质,并成功预测了两个蛋白的信号肽、跨膜区、抗原表位、二级结构及三级结构。基于此,成功构建了猪源多杀性巴氏杆菌OmpW、tbpa蛋白的重组表达载体p ET28a-ompW、p ET28a-tbpa、p SUMO-ompW、p SUMO-tbpa,通过筛选及条件优化成功得到了可溶性表达的OmpW蛋白,为猪多杀性巴氏杆菌新型疫苗研制奠定基础。

关键词：猪多杀性巴氏杆菌分离鉴定原核表达 OmpW tbpa

红外光谱法研究tbpa对羊毛的阻燃作用机理

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化学世界 1992年第2期33卷 65-68页

作者：马志领薛恩钰石俊瑞田春明河北大学化学系 071002

对比tbpa阻燃羊毛与非阻燃羊毛在不同温度下的红外光谱(IR)可以看到:阻燃羊毛在340℃时-CH_n吸收峰(2950～2899cm^(-1))和-NH_m吸收峰(1580～1490cm^(-1))已经消失,而到400℃时非阻燃羊毛中的-CH_n和-NH_m峰仍然存在。我们得出结论:溴... 详细信息

对比tbpa阻燃羊毛与非阻燃羊毛在不同温度下的红外光谱(IR)可以看到:阻燃羊毛在340℃时-CH_n吸收峰(2950～2899cm^(-1))和-NH_m吸收峰(1580～1490cm^(-1))已经消失,而到400℃时非阻燃羊毛中的-CH_n和-NH_m峰仍然存在。我们得出结论:溴不仅在气相发挥阻燃作用,而且通过氢转移阻燃机理在气-固两相同时发挥阻燃作用。

关键词：羊毛 tbpa 阻燃作用红外光谱

副猪嗜血杆菌安徽分离株的致病性与RELP基因型的相关性研究

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 610-613页

作者：李郁陈申秒王桂军孙裴魏建忠安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

为了研究PCR限制性酶切电泳长度多态性试验(PCR-RELP)与副猪嗜血杆菌(HPS)对豚鼠的致病性,本研究采用PCR-RELP分析12株HPS安徽分离株的tbpa基因,并将12株HPS分为5种不同的RELP基因型(AAA、BBB、BAB、BAC、CAB);12株HPS对豚鼠的致病性试... 详细信息

为了研究PCR限制性酶切电泳长度多态性试验(PCR-RELP)与副猪嗜血杆菌(HPS)对豚鼠的致病性,本研究采用PCR-RELP分析12株HPS安徽分离株的tbpa基因,并将12株HPS分为5种不同的RELP基因型(AAA、BBB、BAB、BAC、CAB);12株HPS对豚鼠的致病性试验表明,致病性最强的RELP基因型为BAC,其次是AAA和CAB,无致病性的为BBB和BAB型。进一步分析12株HPS的tbpa基因序列系统进化关系发现,HPS的RFLP基因型的不同,其致病性存在差异,表明tbpa是影响HPS致病性的重要因素。

关键词： HPS 致病性 tbpa RFLP基因型

卡介苗D2株分泌蛋白基因植物表达载体的构建

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中国公共卫生 2004年第10期20卷 1193-1195页

作者：刘凤娟俞守义聂军陈清朱丽芮勇宇李建栋江晓玲吴敏李志锋第一军医大学热带军队卫生学系流行病学教研室广州510515

目的　克隆卡介苗 (BCG)D2株 32 -kDa分泌蛋白基因 (fbpA基因 ) ,构建重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA ,为研制转基因植物口服疫苗奠定基础。方法　采用PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离fbpA基因 ,构建重组克隆载体 pUCm -T -fbpA ,经过... 详细信息

目的　克隆卡介苗 (BCG)D2株 32 -kDa分泌蛋白基因 (fbpA基因 ) ,构建重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA ,为研制转基因植物口服疫苗奠定基础。方法　采用PCR法从BCGD2株基因组DNA中分离fbpA基因 ,构建重组克隆载体 pUCm -T -fbpA ,经过单菌落PCR法、BamHⅠ、SacⅠ和HindⅢ单 /双酶切、DNA序列分析鉴定后 ,将fb pA基因亚克隆入植物表达载体 pBI 12 1,得到重组载体pBI 12 1-fbpA ,并转化根癌农杆菌株EHA10 5 ,用PCR法对其进行鉴定。结果　重组载体 pUCm -T -fbpA测序后证实fbpA基因由 10 4 1bp组成 ,包括 1个 10 14bp的开放阅读框。DNA序列上游由编码一段信号肽的 12 9bp组成 ,并对 32 -kDa蛋白的分泌起决定作用。相应的编码成熟蛋白的序列由 885个碱基组成。fbpA基因与来源于BCG1173P2株的同一基因序列完全一致。此外 ,构建的重组植物表达载体 pBI12 1-fbpA成功转入根癌农杆菌株EHA10 5。结论　编码BCGD2株 32 -kDa分泌蛋白的fbpA基因分离成功 ,DNA序列分析证实fbpA基因在分枝杆菌中高度保守 ,为进一步深入分析fbpA基因以及研制抗结核病转基因植物疫苗奠定了基础。

关键词：卡介苗 32-kDa蛋白 tbpa 克隆 DNA序列分析重组植物表达载体

以复合材料为支持电解质的电化学诱导C-H键活化官能团化研究

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以复合材料为支持电解质的电化学诱导C-H键活化官能团化研究

作者：李龙吉北京工业大学

学位级别：硕士

有机电化学合成作为一种“绿色化学”合成手段受到了越来越多的关注。在有机电化学合成过程中,往往要加入大量的支持电解质以保证离子电导率和电荷有效移动,导致反应后处理步骤繁多,同时浪费大量资源;因此,对支持电解质的回收利用研究... 详细信息

有机电化学合成作为一种“绿色化学”合成手段受到了越来越多的关注。在有机电化学合成过程中,往往要加入大量的支持电解质以保证离子电导率和电荷有效移动,导致反应后处理步骤繁多,同时浪费大量资源;因此,对支持电解质的回收利用研究具有很重要的意义,是有机电化学合成中的一个重要研究领域。本实验组的合作伙伴——UCSB的Little课题组,采用离子液体聚合物与超级碳黑制备可回收的复合材料,并将其作为支持电解质进行研究和测试。发现该离子液体聚合物复合材料作为支持电解质时不仅具有很好的电化学稳定性和很宽的电化学窗口,而且可以通过简单的方法进行回收利用。在此基础上,本课题进行了以下研究:(1)使用可回收离子液体聚合物复合材料作为支持电解质进行一系列的电化学氧化反应。首先,在双室电解池中,进行了恒电位条件下查尔酮的环氧开环/傅-克烷基化反应,同时,考察可回收离子液体聚合物复合材料的重复利用性和回收率;随后,进行了单室电解池恒电位条件下的苄醚的羰基化反应研究;最后,进行了单室电解池恒电流条件下的苯并噁唑衍生物的氧化胺化反应研究。通过实验发现该离子液体聚合物复合材料可以广泛的应用于电化学氧化中,并且在多次回收利用后,依然保持较高的电化学性能。(2)电化学原位生成的tbpa阳离子自由基诱导富电子芳香族化合物与烯酰胺间的阳离子链式反应研究。在此过程中,首先,考察了一锅法和预制备tbpa+。法这两种不同的反应方式、底物比例以及催化剂量对反应的影响,并进一步考察了该反应的普适性;随后,在可回收的离子液体聚合物复合材料作为支持电解质的体系中对该反应进行考察;最后,结合循环伏安法、控制实验等手段探讨并提出了可能的反应机理。

关键词：离子液体聚合物复合材料电氧化氧化回收利用 tbpa

黄酮衍生物对大鼠体内甲状腺素结合前白蛋白的选择性竞争结合

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上海医科大学学报 1992年第3期19卷 167-171页

作者：杨永年 S.Pino 上海医科大学中山医院内分泌科美国麻省大学医学院碘研究实验室

合成的黄酮衍生物EMD_(21388)是T_4与甲状腺素结合前白蛋白(Thyroxine-bindingprealbumin,tbpa)结合的强烈抑制物。对大鼠全身使用EMD_(21388)后,血清tbpa与T_4结合即遭抑制,而白蛋白与T_4结合则增加,因而产生血清总T_4浓度降低,游离T_... 详细信息

合成的黄酮衍生物EMD_(21388)是T_4与甲状腺素结合前白蛋白(Thyroxine-bindingprealbumin,tbpa)结合的强烈抑制物。对大鼠全身使用EMD_(21388)后,血清tbpa与T_4结合即遭抑制,而白蛋白与T_4结合则增加,因而产生血清总T_4浓度降低,游离T_4百分率(FT_4％)增加以及血清TSH降低。提示在T_4与tbpa结合受抑,并与白蛋白结合增多的同时,由于血清T_4结合蛋白结合容量的减少,血清FT_4有短暂的增加;以及EMD_21388并不能通过血脑屏障。本文也进一步表明血清FT_4的稳定是垂体-甲状腺轴功能正常的十分重要的标志,以及大鼠血清游离甲状腺素的半衰期短于1h。

关键词：黄酮类衍生物 tbpa 血清FT4