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TaqMan探针实时荧光定量PCR检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平及其临床意义

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中国病理生理杂志 2013年第2期29卷 348-353页

作者：吴瑞珊苏运钦余广超林晓丹李莉陈文璟温旺荣暨南大学附属第一医院临床医学检验中心广东广州510632

目的:运用TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平并探讨其临床意义。方法:设计miR-122及U6 snRNA的茎环引物和TaqMan探针,运用TaqMan探针实时荧光定量PCR检测27例肝癌术前(HCC)患者、15例... 详细信息

目的:运用TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平并探讨其临床意义。方法:设计miR-122及U6 snRNA的茎环引物和TaqMan探针,运用TaqMan探针实时荧光定量PCR检测27例肝癌术前(HCC)患者、15例乙型肝炎(hepatitis B)患者、15例丙型肝炎(hepatitis C)患者、15例正常对照者(HC)、11例肝癌术后(PHCC)患者及10例肝癌术后复发(recurrence)患者血清中miR-122的表达水平,并分析miR-122与肝脏疾病相关标志物的关系。结果:TaqMan探针实时荧光定量PCR方法能检测血清中miR-122的表达。HCC、hepatitis B、hepatitis C及recurrence患者血清中miR-122的表达水平均高于HC和PH-CC患者(P0.05),PHCC患者血清miR-122的表达水平比HCC和recurrence患者低(PTaqMan探针实时荧光定量PCR适用于检测血清miR-122的表达水平。在HCC、hepatitis B、hepatitisC及recurrence患者血清中miR-22均有不同程度的增高,尤其是hepatitis C患者,且PHCC患者血清miR-122表达下降,复发后升高。血清miR-122的表达与肝脏疾病的某些指标有关,提示血清miR-122可作为肝脏疾病,特别是肝癌早期诊断、手术疗效及预后判断的新指标。

关键词： TaqMan探针实时荧光定量PCR miR-122 肝细胞癌

TaqMan探针双重荧光定量PCR同时检测解脲支原体和巨细胞病毒

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中国微生态学杂志 2014年第2期26卷 214-216,220页

作者：胡洁张卫英何松哲沈雯儿余道军杭州市第一人民医院浙江中医药大学附属杭州第一医院浙江杭州310006 浙江中医药大学浙江杭州310006

目的探讨双重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于TaqMan探针技术荧光定量法检测同时检测解脲支原体和巨细胞病毒的新方法。方法分别采用普通定性PCR扩增母婴垂直传播常见的病原体(解脲支原体和巨细胞病毒)测序鉴定,然后分别采用taqman... 详细信息

目的探讨双重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于TaqMan探针技术荧光定量法检测同时检测解脲支原体和巨细胞病毒的新方法。方法分别采用普通定性PCR扩增母婴垂直传播常见的病原体(解脲支原体和巨细胞病毒)测序鉴定,然后分别采用TaqMan探针的单重和双重定量PCR技术对解脲支原体和巨细胞病毒同时定性定量检测。结果解脲支原体和巨细胞病毒单种定性PCR检测均为阳性,TaqMan探针单重和双重定量PCR检测解脲支原体和巨细胞病毒阳性率和特异性均为100%,相同样品TaqMan探针单重、双重定量PCR分别检测的结果符合率100%。结论 TaqMan探针双重荧光定量PCR技术可同时检测两种靶分子,结果可靠,应用前景广阔。

关键词：解脲支原体巨细胞病毒 TaqMan探针双重荧光定量PCR

禽网状内皮组织增生病病毒TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2010年第11期40卷 1137-1141页

作者：李凯高宏雷高立祁小乐高玉龙徐延伟王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列设计1对针对REVgp90基因的引物和1条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的taqman荧光定量PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在1×101～1×108copi... 详细信息

根据GenBank中禽网状内皮组织增生病病毒(REV)基因组序列设计1对针对REVgp90基因的引物和1条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的taqman荧光定量PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在1×101～1×108copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到10copies/μL,是常规PCR方法的100倍,该方法与其他禽病病毒无交叉反应,批间与批内重复性试验变异系数均小于2%。用REV HLJR0901株人工感染1日龄SPF雏鸡,定期剖检,对感染鸡体内各器官的病毒分布及载量进行检测,结果表明,在肝、脾、法氏囊、胸腺和腺胃中均可检测到病毒,其病毒载量并无明显差异。本研究结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于REV的定量检测,为该病毒的诊断及致病性的研究提供了技术手段。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒荧光定量聚合酶链反应 TaqMan探针

利用TaqMan探针实时荧光PCR方法检测香石竹细菌性萎蔫病菌

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植物病理学报 2011年第1期41卷 24-30页

作者：邵秀玲甘琴华厉艳赵文军吴兴海粟智平山东出入境检验检疫局青岛266002 中国检验检疫科学研究院北京100029 烟台出入境检验检疫局烟台264000

根据香石竹细菌性萎蔫病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对香石竹细菌性萎蔫病菌的taqman实时荧光PCR检测方法。除香石竹细菌性萎蔫病菌外,还对其他7种病原细菌菌株进... 详细信息

根据香石竹细菌性萎蔫病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对香石竹细菌性萎蔫病菌的taqman实时荧光PCR检测方法。除香石竹细菌性萎蔫病菌外,还对其他7种病原细菌菌株进行了荧光PCR检测。结果表明,只有香石竹细菌性萎蔫病菌产生荧光,其他病原细菌均没有荧光产生。与常规PCR相比,实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为0.4 pg/μL的DNA,且能直接用于苗木等样品的检测,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用。

关键词：香石竹细菌性萎蔫病菌 TaqMan探针实时荧光PCR 检测

两种TaqMan探针的制备及荧光检测性能比较

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化学研究与应用 2011年第8期23卷 1057-1061页

作者：李红霞滨州职业学院轻纺化工学院山东滨州256603

采用固相合成法,分别合成FAM/TAMRA和FAM/BHQ2双荧光标记的TaqMan探针,得到的粗产物分别采用乙醇沉淀法、离子对反相色谱法、凝胶过滤柱脱盐法纯化。采用实时荧光PCR法,分别从感染的南瓜果实中检测到黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV),扩增曲... 详细信息

采用固相合成法,分别合成FAM/TAMRA和FAM/BHQ2双荧光标记的TaqMan探针,得到的粗产物分别采用乙醇沉淀法、离子对反相色谱法、凝胶过滤柱脱盐法纯化。采用实时荧光PCR法,分别从感染的南瓜果实中检测到黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV),扩增曲线表明采用该实验条件制备的探针检测性能良好。在相同荧光PCR反应体系下,通过比较△Rn、CT值,证明FAM/BHQ2探针检测效果好于FAM/TAMRA探针。

关键词： TaqMan探针制备检测

TaqMan探针荧光定量PCR支原体快速检测方法的建立及应用

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吉林大学学报（医学版） 2010年第4期36卷 797-802页

作者：倪红霞刘志辉郑学星王化磊扬松涛夏咸柱北华大学基础医学院细胞生物学教研室吉林吉林132013 吉林大学口腔医院口腔修复科吉林长春130021 军事医学科学院军事兽医研究所病毒实验室吉林长春130062

目的:在支原体16SrRNA的种属特异性区域设计一对引物及其相应的TaqMan探针,建立荧光定量PCR方法,检测细胞培养物中支原体。方法:选择16srRNA支原体种属特异性区域作为扩增区,设计支原体通用引物,PCR扩增片段的预期大小为288bp。回收PCR... 详细信息

目的:在支原体16SrRNA的种属特异性区域设计一对引物及其相应的TaqMan探针,建立荧光定量PCR方法,检测细胞培养物中支原体。方法:选择16srRNA支原体种属特异性区域作为扩增区,设计支原体通用引物,PCR扩增片段的预期大小为288bp。回收PCR扩增产物,连接pMD-18T载体,转化JM109大肠杆菌,涂布Amp+琼脂平板,挑取阳性克隆进行PCR鉴定后提取质粒。构建荧光定量PCR绝对定量的标准品,设计荧光定量引物、探针,采用矩阵法对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验灵敏度并与普通PCR法及培养法进行比较;对支原体及其他5种革兰氏阳性杆菌进行特异性检验;对培养法、普通PCR法及荧光定量PCR法检测样本的灵敏度进行比较。结果:支原体PCR产物大小约为288bp,质粒质量浓度为13.9mg·mL-1,A260/A280(Ratio)为1.780,质粒溶液浓度为4.25×109拷贝.μL-1。10μmol.L-1的引物浓度和10μmol.L-1探针浓度为最佳反应浓度,双温循环及60℃退火温度为最佳的循环条件。检测灵敏度为4.250×101拷贝。拷贝数与Ct值之间的线性关系表达式:Ct=-2.916×log拷贝数+40.02。特异性检验中5种革兰氏阳性杆菌样本检测均为阴性,支原体样本为阳性,表明特异性好。准确性检测中变异系数小,表明稳定性好。组内及组间相同浓度样本检测具有相同的Ct值,表明重现性好。样本检验中,荧光定量PCR检测出的阳性样本高于普通PCR及培养法。结论:支原体荧光定量PCR法检测细胞样本及临床样本中支原体快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好。

关键词： TaqMan探针支原体荧光定量PCR

鼠脑心肌炎病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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实验动物科学 2017年第5期34卷 13-17页

作者：蔡骁垚张泉陈懿斐林颖峥熊炜魏晓锋陈鸿军中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 扬州大学兽医学院扬州225009 上海实验动物研究中心上海201203 上海出入境检验检疫局上海200135

目的建立快速诊断鼠脑心肌炎病毒感染的荧光定量RT-PCR方法。方法根据鼠脑心肌炎病毒(EMV)PEC9毒株全基因组序列(Gen Bank登录号:DQ288856.1),设计一对特异性引物和TaqMan探针,建立EMV的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法,进行条件优化,检... 详细信息

目的建立快速诊断鼠脑心肌炎病毒感染的荧光定量RT-PCR方法。方法根据鼠脑心肌炎病毒(EMV)PEC9毒株全基因组序列(Gen Bank登录号:DQ288856.1),设计一对特异性引物和TaqMan探针,建立EMV的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法,进行条件优化,检测其特异性,敏感性,稳定性。结果建立的荧光定量PCR方法,标准曲线的线性关系良好,r2值可达0.99,敏感性最低检测限为1个拷贝数,高于普通PCR方法 1000倍,其特异性强,与其他常见感染的小鼠病毒株均无特异性扩增,批内和批间变异系数均小于2%。利用该方法对上海市120份小鼠心肌样品进行检测,未检测到阳性感染。结论本研究为鼠脑心肌炎病毒感染的分子检测,为制定国家标准提供良好的方法。

关键词：鼠脑心肌炎病毒 EMV TaqMan探针荧光定量RT-PCR

基于双TaqMan探针实时荧光PCR技术的HLA-B*5801基因检测方法建立与应用

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热带医学杂志 2020年第11期20卷 1402-1404,1437页

作者：赵学峰袁晓文谭荧飞罗丽贞南方医科大学附属南海医院检验科广东佛山528200

目的建立一种基于TaqMan探针实时荧光PCR技术的HLA-B*5801基因检测方法;调查佛山地区HLA-B*5801基因阳性携带率。方法根据HLA-B*5801等位基因外显子2和3的基因序列设计引物和TaqMan探针,建立一种实时荧光PCR检测方法,与商业试剂盒和San... 详细信息

目的建立一种基于TaqMan探针实时荧光PCR技术的HLA-B*5801基因检测方法;调查佛山地区HLA-B*5801基因阳性携带率。方法根据HLA-B*5801等位基因外显子2和3的基因序列设计引物和TaqMan探针,建立一种实时荧光PCR检测方法,与商业试剂盒和Sanger测序进行对比检测性能评价。选取健康体检男女样本各200例,采用本方法检测并调查分析本地区汉族人群HLA-B*5801基因携带率。结果本研究建立的HLA-B*5801实时荧光PCR检测方法与2种商业试剂盒和Sanger测序的检测结果相符性为100%;佛山地区汉族人群男女HLA-B*5801基因携带率分别为8.5%和11.5%,差异无统计学意义(P=0.48)。结论本研究建立的双TaqMan探针HLA-B*5801基因检测方法操作简单、结果准确,可应用于常规检测。

关键词： HLA-B*5801 TaqMan探针实时荧光PCR

A型肉毒梭菌atx基因TaqMan探针荧光定量PCR检测

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中国公共卫生 2012年第6期28卷 863-865页

作者：王春晖赵素慧韦耀周莹万成松南方医科大学公共卫生与热带医学学院中心实验室广东广州510515

目的采用TaqMan探针荧光定量PCR方法对A型肉毒梭菌atx基因进行检测。方法以atx基因为靶基因,设计引物和TaqMan探针,优化反应条件,制作定量标准曲线,进行灵敏度、特异性和重复性验证,建立A型肉毒梭菌taqman荧光定量PCR检测方法。结果构... 详细信息

目的采用TaqMan探针荧光定量PCR方法对A型肉毒梭菌atx基因进行检测。方法以atx基因为靶基因,设计引物和TaqMan探针,优化反应条件,制作定量标准曲线,进行灵敏度、特异性和重复性验证,建立A型肉毒梭菌taqman荧光定量PCR检测方法。结果构建质粒pUC57-△atx,标准曲线在103～107拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.997,灵敏度达到22个拷贝数,比普通PCR提高约100倍;能选择性检测A型肉毒梭菌,与其他5种食源性病原菌无交叉反应,结果与普通PCR一致;重复性试验表明,同一浓度的15个平行样品的变异系数为1.0%。结论 A型肉毒梭菌TaqMan探针荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可以快速、准确、定量地检测A型肉毒梭菌。

关键词：肉毒梭菌 TaqMan探针 atx基因荧光定量PCR