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黑松露成分taqman探针实时荧光pcr检测方法的建立与应用

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中国食品学报 2023年第7期23卷 403-409页

作者：杨爱馥孙赟万超刘雪华邰丽梅王玫大连海关技术中心辽宁大连116001 中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所昆明650033

以黑松露核糖体内转录间隔区基因为靶基因设计特异性引物和探针,建立黑松露成分的taqman实时荧光pcr检测方法,并进行物种特异性验证。同时对不同掺入比例的模拟样品和市售黑松露及制品进行检测。结果表明:该方法特异性强,仅对黑松露基因... 详细信息

以黑松露核糖体内转录间隔区基因为靶基因设计特异性引物和探针,建立黑松露成分的taqman实时荧光pcr检测方法,并进行物种特异性验证。同时对不同掺入比例的模拟样品和市售黑松露及制品进行检测。结果表明:该方法特异性强,仅对黑松露基因组DNA出现特异性扩增曲线,与其它食用菌和异源性动植物样品无非目标扩增;检测灵敏度为1×10-3ng/μL黑松露基因组DNA或质量分数0.01%的黑松露粉。对120份市售黑松露(鲜品、冻品、干品、粉末)、黑松露制品(黑松露酱和黑松露调味粉)以及不含黑松露成分的杂菌包进行检测,在70份黑松露(鲜品、冻品、干品、粉末)和10份黑松露制品中检出黑松露成分,其它样品均未检出黑松露成分,检测结果与商品标识一致。该方法灵敏度高,特异性强,可快速精准地进行黑松露成分的真实性甄别。

关键词：黑松露 ITS基因 taqman实时荧光pcr 快速检测

中华鲟taqman实时荧光pcr检测方法的建立

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江苏农业学报 2018年第2期34卷 399-403页

作者：陈光哲郑红霞祝长青江苏省农业科学院中心实验室江苏南京210014 南京农业大学江苏南京210095 江苏出入境检验检疫局江苏南京210001

为给中华鲟提供及时而有效的保护,本研究根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因序列设计并筛选了引物与探针组合,建立了中华鲟taqman实时荧光pcr检测方法,并对所建立的实时荧光pcr方法进行方法学评价。结果显示,建立的方法能够对中华鲟及... 详细信息

为给中华鲟提供及时而有效的保护,本研究根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因序列设计并筛选了引物与探针组合,建立了中华鲟taqman实时荧光pcr检测方法,并对所建立的实时荧光pcr方法进行方法学评价。结果显示,建立的方法能够对中华鲟及其产品进行快速而准确的检测,且特异性好,检测灵敏度高,能够达到0.001 ng的中华鲟DNA和100个拷贝的重组质粒DNA。该方法在应用于全国多个地区采集的鲟鱼样品的检测时,结果表明只有7个从相关科研单位得到的已经鉴定的中华鲟标本,经检测才是真正的中华鲟,而许多餐馆中号称的"中华鲟"经检测并非真正的中华鲟,只是其他的一些鲟鱼品种。因此本研究建立的中华鲟taqman实时荧光pcr检测方法特异性强、灵敏度高,且具有较好的应用价值。

关键词：中华鲟 taqman实时荧光pcr 特异性灵敏度

基于taqman实时荧光pcr技术检测转基因作物中的调控基因

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河南农业科学 2020年第11期49卷 159-165页

作者：罗建兴海小刘国强其勒木格郭梁锡林郭勒职业学院内蒙古锡林浩特026000 锡林郭勒生物工程研究院内蒙古锡林浩特026000 锡林郭勒食品检验检测和风险评估中心内蒙古锡林浩特026000

为检测食品中的植物转基因成分,自主构建ppCaMV35S、ptNOS和ptCaMV35S 3种阳性质粒作为试验阳性对照,选用2种内源基因(pUbi、pRice-actin)和3种调控基因(pCaMV35S、tNOS和tCaMV35S),利用taqman实时荧光pcr技术对4种转基因作物(玉米、水... 详细信息

为检测食品中的植物转基因成分,自主构建ppCaMV35S、ptNOS和ptCaMV35S 3种阳性质粒作为试验阳性对照,选用2种内源基因(pUbi、pRice-actin)和3种调控基因(pCaMV35S、tNOS和tCaMV35S),利用taqman实时荧光pcr技术对4种转基因作物(玉米、水稻、棉花、大豆)和2种非转基因作物(玉米、小麦)进行转基因成分检测。特异性检测结果表明,构建的阳性质粒能够满足实际检测需要,且内源基因和其他调控基因均具有较好的特异性。在转基因棉花试样中分别对调控基因pCaMV35S和tNOS进行检出限试验,检测结果显示,在转基因棉花试样中pCaMV35S和tNOS的检测限度分别为1、10 ng,能够对商业化或处于中间试验阶段的转基因作物及产品进行有效筛查检测。

关键词：阳性质粒转基因作物特异性检出限转基因检测 taqman实时荧光pcr 调控基因

基于gyrB序列taqman实时荧光pcr检测在MTC鉴定中的应用

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实用医学杂志 2014年第3期30卷 472-474页

作者：张诗蒙尹小毛刘非郑磊王前南方医科大学南方医院检验科广州市510515 广州市妇女儿童医疗中心检验部 510623

目的:初步分析基于gyrB序列的taqman实时荧光pcr在MTC(结核分枝杆菌复合群)鉴定中的应用。方法:根据MTC gyrB序列设计引物和探针,应用荧光定量pcr对14株标准株及90株临床分离株进行临床研究,并与测序法结果进行比较。结果:14株标准株中... 详细信息

目的:初步分析基于gyrB序列的taqman实时荧光pcr在MTC(结核分枝杆菌复合群)鉴定中的应用。方法:根据MTC gyrB序列设计引物和探针,应用荧光定量pcr对14株标准株及90株临床分离株进行临床研究,并与测序法结果进行比较。结果:14株标准株中,非洲分枝杆菌与结核分枝杆菌结果为阳性,其余结果为阴性;30株临床分离株与ITS测序比较,有1株NTM结果为阳性,1株MTC结果为阴性,其余菌株检测结果与测序结果符合,分析特异度高;将60株临床分离株的检测结果与测序结果进行比较,得到该方法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均为100%。结论:采用基于gyrB序列的taqman荧光pcr可快速检测和鉴别MTC和NTM。

关键词：结核分枝杆菌 gyrB基因 taqman实时荧光pcr

大洋臀纹粉蚧和南洋臀纹粉蚧taqman实时荧光pcr检测方法

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植物检疫 2010年第2期24卷 24-28页

作者：徐浪余道坚焦懿王银竹陈志粦深圳出入境检验检疫局广东深圳518001 中山大学昆虫学研究所有害生物控制与利用国家重点实验室

臀纹粉蚧属有多个种类是重要的农业害虫,大洋臀纹粉蚧(Planococcus minor(Maskell))和南洋臀纹粉蚧(Planococcus lilacius Cockerell)是我国有重要检疫意义的有害生物。这两种臀纹粉蚧经常从进口泰国和东南亚水果口岸检疫中截获,但形态... 详细信息

臀纹粉蚧属有多个种类是重要的农业害虫,大洋臀纹粉蚧(Planococcus minor(Maskell))和南洋臀纹粉蚧(Planococcus lilacius Cockerell)是我国有重要检疫意义的有害生物。这两种臀纹粉蚧经常从进口泰国和东南亚水果口岸检疫中截获,但形态学方法很难进行准确鉴定。本研究首次利用mtDNA COI基因设计了两条特异性探针,应用taqman实时荧光pcr方法对大洋臀纹粉蚧和南洋臀纹粉蚧进行了快速准确鉴定。

关键词：大洋臀纹粉蚧南洋臀纹粉蚧 taqman实时荧光pcr MGB探针

taqman—实时荧光pcr快速检测副溶血性弧菌

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现代预防医学 2008年第22期35卷 4444-4445+4449页

作者：叶盛樊学军裴晓方李永儒邱晋四川大学华西公共卫生学院四川检验检疫局国际旅行卫生保健中心四川省抗菌素工业研究所

[目的]建立taqman-实时荧光pcr快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)的方法,用于食物中毒快速诊断和食品中VP的污染状况调查。[方法]根据GenBank公布的VP tdh基因序列,设计引物和探针,建立taqman-实时荧光pcr快速检测体系,... 详细信息

[目的]建立taqman-实时荧光pcr快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)的方法,用于食物中毒快速诊断和食品中VP的污染状况调查。[方法]根据GenBank公布的VP tdh基因序列,设计引物和探针,建立taqman-实时荧光pcr快速检测体系,应用于食品中VP检测。[结果]taqman-实时荧光pcr快速检测体系灵敏度为1.3×104cfu/ml(33 cfu/pcr反应体系),特异性好,无交叉反应。[结论]taqman-实时荧光pcr检测体系灵敏度高,特异性强,能提高VP的检出率和准确性,可应用于VP食品污染状况调查和食物中毒的快速诊断。

关键词：副溶血性弧菌 taqman实时荧光pcr 快速检测

鹦鹉热衣原体taqman实时荧光pcr检测方法的建立

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鹦鹉热衣原体Taqman实时荧光PCR检测方法的建立

作者：王建忠南京农业大学

学位级别：硕士

鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci, Cps)属于衣原体科,嗜性衣原体属,生物学特性介于细菌与病毒之间,具有严格的胞内寄生性,革兰氏染色呈阴性。鹦鹉热衣原体病是由Cps引起的一种人畜共患病,在猪、牛、羊和马等牧畜主要表现为流产,死产,... 详细信息

鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci, Cps)属于衣原体科,嗜性衣原体属,生物学特性介于细菌与病毒之间,具有严格的胞内寄生性,革兰氏染色呈阴性。鹦鹉热衣原体病是由Cps引起的一种人畜共患病,在猪、牛、羊和马等牧畜主要表现为流产,死产,食欲废绝,咳嗽,腹泻等症状;鸽子、火鸡等禽类表现为肺炎、呼吸困难、精神沉郁、死亡等病症;在人则以鸟疫和Reiter综合征为主。鹦鹉热衣原体具有宿主广泛,传播途径复杂等特点,在全球许多国家和地区都有发现,并且随着动物的流动,宠物鸟饲养的增多,鹦鹉热衣原体病不仅没有得到有效控制,反而呈现逐年上升趋势。国内外有关感染Cps病例的报道也是日渐增多。感染鹦鹉热衣原体引起的症状与感染其他衣原体引起的症状差异并不是十分明显,在临床上,快速、准确地诊断该病比较困难。因此建立一套快速准确的诊断方法十分必要。taqman实时荧光pcr技术是一项比较新的技术,具有快速、灵敏、准确、以及定量等特点,其在Cps预防控制、快速检测与诊断方面都具有重要意义。根据GenBank上已公布的衣原体16S-23S rRNA和MOMP基因序列分别设计Y1和Y2、Y3taqman实时荧光pcr与C1和C2检测用常规pcr。根据以上两个目的基因分别设计X1和X2测序用常规pcr。以鹦鹉热衣原体阳性核酸与水为对照进行试验,结果显示：Y1和Y2检测曲线优于Y3检测曲线。经反应条件与体系优化,对鹦鹉热衣原体与猪鼻支原体、肺炎支原体、鸡滑液囊支原体、鸡毒支原体等4支原体,以及大肠埃希氏菌、痢疾志贺氏菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、霍乱弧菌、副溶血型弧菌、单增李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、甲型溶血型链球菌、阪崎氏肠杆菌等11种细菌进行对比扩增试验,发现两套taqman实时荧光pcr具有良好的特异性;双链DNA灵敏度检测结果显示：Y1和Y2实时荧光pcr的检测下限分别是7个拷贝和2个拷贝的双链DNA,比检测用常规pcr灵敏度分别高130倍和5000倍。衣原体基因组灵敏度检测结果显示：Y1和Y2实时荧光pcr比检测用常规pcr灵敏度均高1000倍。由此证明两套taqman实时荧光pcr灵敏度比常规pcr高。X1和X2测序用常规pcr扩增三株taqman实时荧光定量pcr检测呈阳性的鹦鹉热衣原体,产物经DNA测序比对,结果显示该三个样品是鹦鹉热衣原体。此结果证明建立的Y1和Y2taqman实时荧光pcr检测方法具有快速、高效、特异和灵敏的特点,可用于鹦鹉热衣原体样品的检测。

关键词：鹦鹉热衣原体 taqman实时荧光pcr pcr 检测

NDM-1基因taqman实时荧光pcr检测方法的建立

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食品安全质量检测学报 2011年第3期2卷 -页

作者：吴兴海张云霞姜英辉邓明俊孟怡雷质文蒋丹山东出入境检验检疫局青岛266002 辽宁出入境检验检疫局技术中心大连116000

研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光pcr快速检测鉴定方法。研究根据NDM-1序列,设计并合成了pcr检测引物(ND-T-F和ND-T-R)和探针(ND-T-PROBE),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了实时荧光pcr检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA... 详细信息

研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光pcr快速检测鉴定方法。研究根据NDM-1序列,设计并合成了pcr检测引物(ND-T-F和ND-T-R)和探针(ND-T-PROBE),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了实时荧光pcr检测。结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模板都出现了很强的特异信号,而其他对照病菌均未出现特异荧光信号,证明这套引物及探针具有NDM-1基因检测的特异性。灵敏度测定结果,此体系可检出10fg/μL质粒DNA模板。研究表明,taqman实时荧光pcr方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法。

关键词： NDM-1 taqman实时荧光pcr 检测

喀斯特炭疽菌taqman探针实时荧光pcr检测方法的建立

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贵州农业科学 2017年第2期45卷 5-9页

作者：孙涛孔德英滕少娜邓朝晖重庆出入境检验检疫局重庆400020 国家中药材物种鉴定及质量安全检测重点实验室重庆400020

为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用taqman探针实时荧光定量pcr技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌taqman探针实时荧光pcr检测方法。结果表明... 详细信息

为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用taqman探针实时荧光定量pcr技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌taqman探针实时荧光pcr检测方法。结果表明:建立方法的特异性较强、灵敏度较高、重复性稳定性较好,最低检测限为0.2pg DNA/反应,标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.998。该方法操作简便,可用于进出境口岸喀斯特炭疽菌的检疫。

关键词：喀斯特炭疽菌检疫鉴定 taqman实时荧光pcr