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金黄色葡萄球菌coa基因实时荧光PCR的建立及应用研究

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中国卫生检验杂志 2017年第1期27卷 94-96,100页

作者：黄丰光乐燕红黄建城张秀莲河源市疾病预防控制中心广东河源517000

目的建立金黄色葡萄球菌coa基因taq Man-MGB探针实时荧光PCR,并在食品安全风险监测中应用。方法根据金黄色葡萄球菌coa基因序列设计引物与taq Man-MGB探针,建立并优化实时荧光PCR反应体系,并在食品安全风险监测中应用,同步进行传统细菌... 详细信息

目的建立金黄色葡萄球菌coa基因taq Man-MGB探针实时荧光PCR,并在食品安全风险监测中应用。方法根据金黄色葡萄球菌coa基因序列设计引物与taq Man-MGB探针,建立并优化实时荧光PCR反应体系,并在食品安全风险监测中应用,同步进行传统细菌分离,比较2种检测方法的符合性。结果建立金黄色葡萄球菌coa基因taq Man-MGB探针实时荧光PCR仅需42 min可完成检测,与表皮葡萄球菌、链球菌等非目标细菌无交叉反应,对重组质粒的灵敏度达5 copy/μl;对200份食品安全风险监测标本进行快速筛查,检测出15份阳性,传统方法也从相应样本中分离出15株金黄色葡萄球菌。结论针对金黄色葡萄球菌coa基因建立的taq Man-MGB探针实时荧光PCR,可提高食品检测速度和灵敏度。

关键词：金黄色葡萄球菌实时荧光PCR taq Man探针食品安全风险监测凝固酶基因

多重荧光定量PCR法检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌

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中国食品卫生杂志 2016年第4期28卷 440-444页

作者：胡兴娟沈飚余辉周秀锦张静邵宏宏舟山出入境检验检疫局浙江舟山316021 浙江海洋学院浙江舟山316021

目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该... 详细信息

目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该体系检测海产品中的副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌。结果副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌可得到特异性扩增,而共存于海产品中的其他细菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系对副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的最低检测限分别为72、40、80 cfu/ml。对舟山采集的150份样品进行检测,检出32份副溶血性弧菌、11份沙门菌、5份单增李斯特菌,与国标法检测结果一致。结论本研究建立的基于taq Man探针的多重荧光定量PCR检测方法可以特异、灵敏、简单快速地实现对海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的检测。

关键词：海产品副溶血性弧菌沙门菌单增李斯特菌 taq Man探针多重荧光PCR 食源性致病菌

实时荧光PCR检测Nam Dinh病毒方法的建立及初步应用

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中国媒介生物学及控制杂志 2015年第5期26卷 447-450页

作者：梁克峰刘渠王德全周健明金玉娟陈应坚李静媚甘莉萍杨慧广东药学院广州510310 深圳市龙岗区疾病预防控制中心

目的建立一种快速、特异检测Nam Dinh病毒（NDi V）的实时荧光PCR方法。方法根据Gen Bank和本实验室分离的NDi V进行序列比对,找出保守序列（Rd Rp）并设计特异引物和taq Man-MGB探针,通过调整引物、探针浓度,优化其反应条件,对方法做... 详细信息

目的建立一种快速、特异检测Nam Dinh病毒（NDi V）的实时荧光PCR方法。方法根据Gen Bank和本实验室分离的NDi V进行序列比对,找出保守序列（Rd Rp）并设计特异引物和taq Man-MGB探针,通过调整引物、探针浓度,优化其反应条件,对方法做灵敏度、特异性、稳定性实验,以评价反应体系。结果 NDi V的taq Man-MGB实时荧光PCR检测方法用时短,灵敏度高,最低检测下限为0.1 PFU。与登革热1-4血清型病毒、流行性乙型脑炎、人呼吸道合胞病毒、轮状病毒、星状病毒、腺病毒无交叉反应,特异性良好;将4份核酸含量不同的标准样品重复检测5次,平均Ct值变异系数范围为1.67%-3.68%,稳定性较高。通过监测,龙岗区蚊虫携带NDi V概率为18.00%。结论NDi V的taq Man-MGB实时荧光PCR方法是一种快速、特异、灵敏、稳定性好的方法,可应用于流行病学环境监测,提高病毒的快速检测能力。

关键词： Nam Dinh病毒实时荧光定量PCR taq Man-MGB探针应用

HMGB1基因SNP位点实时荧光PCR检测方法的建立

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中国热带医学 2016年第10期16卷 957-960页

作者：刘胜牙朱玉兰甄胜西谢聪贤刘健平深圳国际旅行卫生保健中心广东深圳518033 深圳市检验检疫科学研究院广东深圳518010 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518055

目的建立基于taq Man探针实时荧光PCR技术的高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)检测方法。方法收集2014年4月在深圳口岸医院体检的健康人群样本20份,选... 详细信息

目的建立基于taq Man探针实时荧光PCR技术的高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)检测方法。方法收集2014年4月在深圳口岸医院体检的健康人群样本20份,选择HMGB1基因上的2个SNP位点设计常规PCR和实时荧光PCR扩增引物和taq Man探针,采用基因测序和实时荧光PCR方法对样本进行SNP分型。结果实时荧光PCR方法SNP分型结果显示,在20份样本中的HMGB1基因rs1412125位点检测到TT基因型11例,CC基因型1例,TC基因型8例;HMGB1基因rs3742305位点检测到GG基因型15例,GC基因型5例,未发现CC基因型。这一结果与基因测序方法结论完全一致。结论基于taq Man探针技术的实时荧光PCR方法进行HMGB1基因SNP分型简单、快速、高效,可用于人群大规模样本的SNP筛查,具有广泛应用的价值。

关键词： taq Man探针实时荧光PCR 单核苷酸多态性高迁移率族蛋白1基因

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山东地方绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs反应体系的优化

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草食家畜 2005年第2期 17-19页

作者：尚友国宋美玲王建民山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

本文探讨了影响山东地方绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs扩增的因素,实验结果表明:抗凝剂、模板的浓度、纯度、Mg2+的浓度、引物的浓度、变性温度、taq聚合酶、退火温度等因素对扩增结果的影响,为此我们对影响扩增结果的各个因素和反应程序... 详细信息

本文探讨了影响山东地方绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs扩增的因素,实验结果表明:抗凝剂、模板的浓度、纯度、Mg2+的浓度、引物的浓度、变性温度、taq聚合酶、退火温度等因素对扩增结果的影响,为此我们对影响扩增结果的各个因素和反应程序进行了研究和浓度梯度的对比试验,建立了绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs的最佳反应体系和反应程序。

关键词： MHC 基因绵羊山东 PCR-RFLPs 优化最佳反应体系反应程序 Mg^2+ 变性温度退火温度对比试验浓度梯度抗凝剂聚合酶 taq

《魔兽世界》安其拉神庙副本Boss攻略（上）

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大众软件 2006年第10期 167-169页

作者： kane 北京

一、副本总览作为目前难度最高的副本，坐落于安其拉废墟之侧的安其拉神庙（The Tample of Ahn＇Qiraj，以下简称为taq）已经令无数公会在此折戟沉沙，考虑到这里各个Boss的特殊性（比如3号Boss沙尔图拉就是一个战士不能Tand的Boss），... 详细信息

一、副本总览作为目前难度最高的副本，坐落于安其拉废墟之侧的安其拉神庙（The Tample of Ahn＇Qiraj，以下简称为taq）已经令无数公会在此折戟沉沙，考虑到这里各个Boss的特殊性（比如3号Boss沙尔图拉就是一个战士不能Tand的Boss），一个标准的taq团队，至少需要六七名战士，15名左右的治疗者（牧师，德鲁伊，萨满或圣骑士）。

关键词： Boss 《魔兽世界》副本攻略 taq 战士

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沙拉松考试焦虑量表试用报告

健康心理学杂志 2000年第4期8卷 458-460页

作者：刘广珠山东省青岛化工学院心理学教研室

目的　考察沙拉松考试焦虑量表在学生中的试用情况。方法　以 4所大学和 8所中学的 757名学生作为被试 ,在期末考试结束后以班为单位集体填写问卷。结果　量表折半信度 ,以 Spearman- Brown公式求得 r′=0 .91 ;内部一致性求得 Cronbac... 详细信息

目的　考察沙拉松考试焦虑量表在学生中的试用情况。方法　以 4所大学和 8所中学的 757名学生作为被试 ,在期末考试结束后以班为单位集体填写问卷。结果　量表折半信度 ,以 Spearman- Brown公式求得 r′=0 .91 ;内部一致性求得 Cronbach的α系数为 0 .71 ;91个项目的因素分析得到认知、生理和行为方面的五个因素 ,分别命名为对考试的担忧与不安、由考试引起的生理反应、注意集中困难、意识状态不清晰、联想和记忆能力下降。

关键词：考试焦虑量表信度效度 taq TAI

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一种快速低廉的PCR探针标记方法

中国农学通报 2007年第9期23卷 82-84页

作者：许本波谢伶俐柴友荣李加纳田志宏长江大学生命科学学院湖北荆州434025 西南大学农学与生物科技学院重庆400716

【研究目的】探针标记技术是分子生物学和基因工程研究中常用实验技术,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的DNA探针标记方法;【方法】利用普通的taq酶进行PCR探针标记,电泳和Southern杂交检测探针标记结果;【结果】电泳检测发现... 详细信息

【研究目的】探针标记技术是分子生物学和基因工程研究中常用实验技术,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的DNA探针标记方法;【方法】利用普通的taq酶进行PCR探针标记,电泳和Southern杂交检测探针标记结果;【结果】电泳检测发现标记产物在电泳时相对非标记的对照表现明显滞后,表明探针标记成功;电泳条带清晰明亮,表明探针标记效率高;Southern杂交条带清晰,说明该方法标记的探针可用于Southern等分子杂交实验;【结论】利用普通的taq酶进行PCR探针标记,是一种低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。

关键词： DNA探针标记 taq DNA PCR标记

新课标生物实验常规试剂盒介绍——普通PCR试剂盒

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教学仪器与实验 2012年第2期28卷 36-36页

本试剂盒根据PCR反应原理，精确地提供PCR反应所需的全部试剂（包括taq DNA聚合酶、缓冲液、MgCl2、dNTPs、引物Ⅰ、引物Ⅱ、

关键词： PCR试剂盒生物实验 PCR反应 DNA聚合酶 MgCl2 taq 缓冲液引物