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采用tunel检测人精子凋亡及其初步应用

江苏医药 2008年第1期34卷 91-91页

作者：王雪松张才田胡雪玲崔毓桂南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心南京市中医院检验科

在不育、职业性毒物接触和吸烟男性均发现精子凋亡增多。目前，国外报道的精子凋亡检测方法主要有精子染色体结构检查（SCSA）、TdT介导缺口末端原位标记法（tunel）、吖啶橙染色（AOT）、彗星实验等。我们应用二氨基联苯胺（DAB）显色T... 详细信息

在不育、职业性毒物接触和吸烟男性均发现精子凋亡增多。目前，国外报道的精子凋亡检测方法主要有精子染色体结构检查（SCSA）、TdT介导缺口末端原位标记法（tunel）、吖啶橙染色（AOT）、彗星实验等。我们应用二氨基联苯胺（DAB）显色tunel方法检测精子凋亡，探讨其在精子凋亡临床和基础研究中的应用。

关键词： tunel检测人精子凋亡 tunel方法二氨基联苯胺染色体结构原位标记法 TdT介导吖啶橙染色

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TMV-番茄互作中的系统性PCD反应

中国科学（C辑） 2008年第9期38卷 825-835页

作者：周树敏刘文娜孔令安汪矛中国农业大学生物学院北京100094

以往研究证实超敏反应(HR)中的细胞程序化死亡(PCD)是植物对病毒的有效防御手段.但目前对系统获得性抗性反应(SAR)中的PCD至今还知之甚少.通过烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)-番茄(Lycopersicon esculentum)互作系统,发现TMV... 详细信息

以往研究证实超敏反应(HR)中的细胞程序化死亡(PCD)是植物对病毒的有效防御手段.但目前对系统获得性抗性反应(SAR)中的PCD至今还知之甚少.通过烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)-番茄(Lycopersicon esculentum)互作系统,发现TMV的局部侵染能够诱导番茄非接种部位的细胞死亡,但这些部位的酶联免疫吸附实验(ELISA)中未发现有病毒;且发生死亡的细胞都表现以下的生物学及分子学特征:染色质浓缩,形成团块,并于细胞核边缘分布;细胞核的tunel检测呈阳性;DNA ladder检测出现梯状条带;线粒体和叶绿体结构破毁;液泡膜和质膜发生收缩和降解等.结果说明TMV对番茄叶片的局部性侵染,在病毒不发生扩散的情况下,能引起根尖、茎尖和非接种叶片中的系统性PCD反应,上述组织中的这种反应在发生时间与同步性上不同,且在诱发原因和表现形式上与HR-PCD和SAR存在差异.

关键词：细胞程序化死亡系统性PCD反应 tunel检测 DNA ladder TMV(tobacco mosaic virus) 番茄(Lycopersicon esculentum)

低温胁迫对日本对虾抗氧化系统和细胞凋亡的影响

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渔业科学进展 2022年第2期43卷 157-166页

作者：于振兴任宪云邵慧鑫刘萍李健水产科学国家级实验教学示范中心上海海洋大学上海201306 青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室山东青岛266071 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室山东青岛266071

日本对虾(Marsupenaeus japonicus)适宜生长温度为23℃~32℃,由于北方地区冬季温度较低,严重影响日本对虾养殖周期,因此,培育耐低温的新品种非常重要。将(14.24±1.12)g的日本对虾暴露于10℃、16℃、22℃水体中72 h,以28℃水体中的对虾... 详细信息

日本对虾(Marsupenaeus japonicus)适宜生长温度为23℃~32℃,由于北方地区冬季温度较低,严重影响日本对虾养殖周期,因此,培育耐低温的新品种非常重要。将(14.24±1.12)g的日本对虾暴露于10℃、16℃、22℃水体中72 h,以28℃水体中的对虾为对照组。结果显示,对虾鳃和肝胰腺的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽含量总体分别呈先下降后升高再降低的变化趋势,而丙二醛含量、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性一直呈上升趋势;SOD和Caspase-3基因的相对表达量分别呈先下降后升高再降低和持续升高的趋势,与各自对应的酶活变化趋势相似。tunel检测发现,随胁迫时间的延长,机体细胞凋亡率显著增加,其中,对照组、3 h 10℃组和72 h 10℃组鳃组织细胞凋亡率分别为2.03%、6.20%和26.27%,肝胰腺细胞凋亡率分别为1.06%、25.65%和42.33%。综上所述,低温胁迫降低了日本对虾的抗氧化能力,破坏了内环境原有的平衡,进而导致机体出现氧化损伤。本研究可为耐低温新品种的培育提供参考。

关键词：日本对虾低温胁迫总抗氧化能力细胞凋亡 tunel检测

红景天提取物提高小鼠高海拔缺氧耐受力机制的研究

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红景天提取物提高小鼠高海拔缺氧耐受力机制的研究

作者：任卫合西北民族大学

学位级别：硕士

近年来,越来越多的工作、旅游人群进入高海拔地区,但大部分迅速进入高原的人,会由于无法快速适应高原缺氧环境,而诱发机体发生氧化应激,损伤心、肺、脑等组织器官,严重者还会导致肺水肿、脑水肿等一系列疾病。红景天是传统“药食同源”... 详细信息

近年来,越来越多的工作、旅游人群进入高海拔地区,但大部分迅速进入高原的人,会由于无法快速适应高原缺氧环境,而诱发机体发生氧化应激,损伤心、肺、脑等组织器官,严重者还会导致肺水肿、脑水肿等一系列疾病。红景天是传统“药食同源”性中药材之一,研究表明其活性成分具有预防及缓解机体缺氧损伤的作用,因此该研究以红景天水提物(*** aqueous extract RCAE)为研究对象,构建6000 m(11.4%O)高原缺氧小鼠模型,从氧化应激指标、病理组织切片、肺组织细胞凋亡率、凋亡相关蛋白、Ras/Raf/Erk/Mek/Hif-1α信号通路探究RCAE对小鼠缺氧耐受力的影响及对肺组织的缺氧保护作用,为RCAE在抗缺氧机体保护的临床应用中提供更多的科学依据。主要研究结果如下:1、缺氧可降低小鼠血清、心、肺、脑组织中GSH/GSSG、SOD水平,增加LDH、MDA含量,RCAE低、中、高剂量组均可显著缓解这种变化,且中剂量组效果最佳;不同RCAE预给药时间组均可增加GSH/GSSG、SOD水平,降低LDH、MDA含量,RCAE-10组灌胃时间短且效果较佳;随着海拔的升高,氧气浓度逐渐降低,GSH/GSSG、SOD水平逐渐降低,LDH、MDA含量逐渐升高,RCAE可将6000 m海拔氧浓度下小鼠血清、肺组织中氧化应激指标水平调节至缺氧3000 m下。2、缺氧小鼠肺组织呈现结构紊乱、肺泡壁增厚、肺泡失去正常形态、炎性细胞浸润等多种病理损伤,RCAE可明显减轻这些病理变化,RCAE-H组小鼠肺组织结构完整,存在少量炎症细胞浸润,肺泡壁也无明显增厚;缺氧小鼠肺泡间隔tunel阳性细胞凋亡率为42.23%,低中高剂量组均能降低凋亡率,且呈现剂量依赖关系,高剂量组凋亡率最低;缺氧小鼠心肌纤维结构紊乱、间距增大,胞质着色不均匀,组织出现炎性浸润,RCAE处理可改善小鼠心肌纤维紊乱,使心肌细胞形态正常、结构较完整;缺氧小鼠海马组织中细胞结构破坏、神经元损失严重,神经细胞萎缩,核固缩成三角形或多边形,细胞形态变形严重,核仁消失,正常细胞很少,RCAE缓解了缺氧对神经元的损伤,细胞和神经元细胞损伤明显减轻,细胞数量增多,异常神经元结构减少,核固缩现象显著减轻,且随着剂量升高,缓解效果逐渐增大。3、缺氧使小鼠肺组织中促凋亡蛋白Bax、Caspase 3的m RNA表达量上调(p<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2 m RNA表达量下调(p<0.05),Bcl-2/Bax的比值显著降低(p<0.05),分别为NC组的1.57倍、1.44倍、0.78倍、0.49倍,蛋白表达结果与m RNA表达结果一致,RCAE降低了Caspase 3、Bax的m RNA及蛋白表达(p<0.05),升高了Bcl-2的m RNA、蛋白表达(p<0.05)及Bcl-2/Bax的比值;缺氧小鼠肺组织Ras、Raf、Erk、Mek、Hif-1α的m RNA表达量显著上调(p<0.05),分别为NC组的1.79倍、2.04倍、1.27倍、1.88倍、2.94倍,Ras、p-Mek、Hif-1α的蛋白表达结果与m RNA一致,表明缺氧激活了Ras/Raf/Erk/Mek信号通路,RCAE可抑制这些基因蛋白的表达,并下调Hif-1α的表达量,结论:高海拔地区氧气浓度低,会导致小鼠肺组织发生病理损伤,红景天提取物可以缓解缺氧对小鼠造成的肺损伤。RCAE可提高小鼠的缺氧耐受力并抑制缺氧引起的心、肺、脑组织的氧化应激,最佳剂量为中剂量(2 g/kg),最佳预给药时间为10 d,可将11.4%O(6000 m)下的氧化应激水平降为16.2%O(3000m);RCAE可降低缺氧所致小鼠心、肺、脑组织的病理损伤;RCAE可能通过提高Bcl-2、降低Bax、Caspase 3的表达以减少缺氧所致肺组织细胞凋亡,通过阻断Ras/Raf/Erk/Mek/信号通路的激活,并降低Hif-1α的表达以提高小鼠的缺氧耐受力,缓解缺氧所致肺损伤。

关键词：红景天缺氧诱导因子氧化应激 tunel检测缺氧耐受力

肝X受体激动剂T0901317对大鼠急性肺损伤细胞凋亡作用及机制的探讨

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肝X受体激动剂T0901317对大鼠急性肺损伤细胞凋亡作用及机制的探讨

作者：吕倩怡南华大学

学位级别：硕士

目的：观察肝X受体激动剂T0901317对急性肺损伤的影响，以及大鼠肺组织内凋亡抑制因子6(Apoptosis inhibitor6,Api6)的表达情况，探讨T0901317在急性肺损伤抗凋亡作用及其可能机制。方法：将54只雄性SD大鼠按随机序列表随机分为正常对... 详细信息

目的：观察肝X受体激动剂T0901317对急性肺损伤的影响，以及大鼠肺组织内凋亡抑制因子6(Apoptosis inhibitor6,Api6)的表达情况，探讨T0901317在急性肺损伤抗凋亡作用及其可能机制。方法：将54只雄性SD大鼠按随机序列表随机分为正常对照组(NC组)、脂多糖处理组(L组)和LPS+T0901317干预组(LT组)，以脂多糖(lipopoysaccharide, LPS)诱导大鼠急性肺损伤模型，而NC组注射等量生理盐水。然后再1h、4h、8h时相点分别采取大鼠肺组织，测定动脉血气和肺组织湿/干比值(W/D weight ratio)，观察肺组织病理学变化，通过Western blot检测肺组织内Api6的表达水平，检测CD68在肺组织内的表达情况来观察巨噬细胞的存活量，脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(tunel)检测大鼠肺组织中细胞的凋亡情况。结果：与正常对照组(NC组)大鼠相比，LPS处理组(L组)大鼠肺组织各时相点W/D均显著升高(P﹤0.05)，动脉血氧分压均显著降低(P﹤0.05);肺组织病理形态学显示：间隔增宽，肺内毛细血管淤血，组织水肿，炎性细胞增多聚集，而LPS+T0901317干预组(LT组)与L组相比损伤明显减轻。用免疫组化检测CD68表达、tunel检测细胞凋亡发现：与NC组比较，L组CD68显著减少(P﹤0.05);凋亡指数(AI)显著增加(P﹤0.05);而LT组比L组相比，CD68表达明显增加(P﹤0.05)，凋亡指数明显下降(P﹤0.05)。通过Western blot检测肺Api6蛋白的表达可知：L组和LT组Api6表达均比NC组明显减少(P﹤0.05)，而LT组明显比L组表达有所增加，差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论：1、LPS所致ALI大鼠肺组织比正常肺组织相比Api6表达明显减少。 2、肝X受体激动剂T0901317通过上调肺组织Api6的表达而减轻急性肺损伤，其机制可能是Api6参与调控肺组织中巨噬细胞的凋亡。

关键词：急性肺损伤肝X受体 T0901317 凋亡抑制因子6 tunel检测 CD68

甘蓝型油菜细胞质雄性不育系SaNa-1A败育机制初探及育性相关microRNA的挖掘

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甘蓝型油菜细胞质雄性不育系SaNa-1A败育机制初探及育性相关micro...

作者：刘琪迩扬州大学

学位级别：硕士

细胞质雄性不育是油菜杂种优势利用的最有效的方式之一。目前对油菜细胞质雄性不育的研究主要包括不育基因的来源、结构特征、作用机理以及育性恢复基因的分子机制等。本研究使用的材料是从白芥和甘蓝型油菜体细胞杂种后代中选育出稳定... 详细信息

细胞质雄性不育是油菜杂种优势利用的最有效的方式之一。目前对油菜细胞质雄性不育的研究主要包括不育基因的来源、结构特征、作用机理以及育性恢复基因的分子机制等。本研究使用的材料是从白芥和甘蓝型油菜体细胞杂种后代中选育出稳定的不育系SaNa-1A以及对应保持系SaNa-1B,并对其败育机制进行了细胞学、分子水平的研究,同时也通过小RNA测序筛选出一些可能与育性相关的小RNA,探究其在调控雄性不育中的作用。其结果如下:(1)通过对新型甘蓝型油菜不育系和保持系花器官形态比较发现,不育系花器官明显较小,且雄蕊发育不良,花粉囊内无成熟花粉粒。花药半薄切片比较观察发现,单核时期不育系小孢子内容物消失仅剩下细胞核,绒毡层液泡化严重并与药室内壁分离,最终绒毡层包裹着小孢子并与其一起在不开裂的药室内降解退化,推测其败育发生原因可能是绒毡层没有正常降解所致。进一步比较两个材料超微结构发现,从花粉母细胞时期开始不育系的花粉母细胞内一些细胞器膜结构出现异常,细胞核与核仁都要小于保持系,并且细胞内出现较多的液泡;四分体时期至单核后期小孢子外虽有孢粉素的积累但内部核仁等结构逐渐消失,内容物降解,液泡化严重,绒毡层在单核期才出现降解现象。另外在对花药中H202进行亚细胞定位检测其分布情况时发现,在花粉母细胞时期不育系花药表皮细胞的细胞壁外侧,细胞间隙之间都检测到了大量H202积累。根据以上超微结构观察结果推测不育系在花粉母细胞时期就出现了异常,绒毡层的降解出现延迟,没有及时为小孢子提供营养,小孢子发育异常,最终败育。(2)细胞凋亡检测(tunel)实验检测花药绒毡层细胞凋亡结果显示,正常的花药在四分体时期,绒毡层细胞会发生PCD,并在单核期达到峰值。而在不育系绒毡层细胞内未发生显著PCD现象,但却在四分体结构内检测到PCD信号,直至单核期绒毡层才出现少量PCD。以上结果说明,不育系花药绒毡层凋亡发生延迟,没有正常降解。(3)利用高通量测序技术鉴定了甘蓝型油菜CMS相关的miRNA,发现了 25个显著差异表达的miRNA。靶基因的功能进行预测发现,大部分靶基因为一些转录因子,如ARF转录因子、AP2转录因子、MYB转录因子等。对9个差异表达miRNA和挑选的靶基因在不同发育时期的表达模式进行定量检测,结果与小RNA测序基本一致,并且靶基因也显示出与miRNA负相关的表达模式。利用5' RACE技术证实了与CMS相关的两个新的miRNA(miRn67、miRn160)靶基因切割位点。最后提出了一个关于新型甘蓝型油菜CMS育性相关的miRNA假设调控模型。

关键词：甘蓝型油菜 CMS 败育机制 tunel检测 microRNA测序 5' RACE

蒙古黄芪根中“枯皮”及“空心”发育过程中的细胞程序性死亡及其不同组织次生代谢产物分布

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蒙古黄芪根中“枯皮”及“空心”发育过程中的细胞程序性死亡及其...

作者：韩晓静安徽中医药大学

学位级别：硕士

[目的]黄芪为著名的常用中药。山西浑源为黄芪传统道地产区,采用仿野生栽培,生长年限长,品质优良。“枯皮”和“空心”结构是高年限道地药材黄芪有别于速生芪的重要性状特征。为揭示“枯皮”和“空心”结构的形成及其对主要次生代谢产... 详细信息

[目的]黄芪为著名的常用中药。山西浑源为黄芪传统道地产区,采用仿野生栽培,生长年限长,品质优良。“枯皮”和“空心”结构是高年限道地药材黄芪有别于速生芪的重要性状特征。为揭示“枯皮”和“空心”结构的形成及其对主要次生代谢产物分布的影响,尚需要阐明以下3个问题:（1）蒙古黄芪根中“枯皮”的发育是否为细胞程序性死亡（PCD）事件;（2）蒙古黄芪根中“空心”的发育是否为细胞程序性死亡（PCD）事件;（3）蒙古黄芪根中次生结构不同组织中次生代谢产物的分布及“枯皮”和“空心”结构的形成对根的不同组织中次生代谢产物的分布有无影响。阐述上述问题,有助于揭示黄芪道地药材“辨状论质”的科学内涵。[方法]本文运用石蜡切片、半薄切片、超薄切片,结合光学显微镜以及透射电子显微镜技术观察蒙古黄芪根中“枯皮”和“空心”的发育及形成过程中超微结构特征;利用DAPI染色与TUENL原位末端标记技术,在荧光显微镜下观察细胞DNA片段化,结合DNA提取及琼脂糖凝胶电泳法,以判定“枯皮”与“空心”结构的细胞程序性死亡（PCD）。在组织学观察的基础上,利用冰冻切片、激光显微切割与UPLC-Q/TOF-MS联用技术,探明蒙古黄芪根中次生结构和“枯皮”及“空心”的形成对根的不同组织中次生代谢产物分布的影响。[结果]（1）蒙古黄芪根中“枯皮”的发生:“枯皮”的发育起源于次生韧皮部靠近周皮处的薄壁细胞恢复分生能力,产生新的周皮,随后发育成落皮层,是动态变化的过程。根据发育特点,将“枯皮”的发育过程分为最初期,落皮层形成早期,落皮层形成期及落皮层成熟期四个阶段。落皮层在发育过程中表现出PCD特征,如线粒体和内质网的降解,液泡融合,液泡膜破裂,液泡中存在被吞噬的细胞器和絮状结构,细胞质降解,细胞核畸形,核仁降解。DAPI染色及tunel检测结果表明,在落皮层形成前期及落皮层形成期,细胞核呈tunel阳性,成熟时DAPI和tunel均为阴性。DNA结果显示DNA降解呈拖尾状。“枯皮”的发生为植物生长过程中的PCD事件。（2）蒙古黄芪根中“空心”的发生:高年限蒙古黄芪根的次生木质部中产生了木栓环结构,形成木间木栓。宏观性状观察:蒙古黄芪根的横切面表面有黑点出现,纵剖发现黑点逐渐扩大,根中的枯朽部位往根头处伸展。石蜡和半薄切片结果显示,黑点的产生是由于导管被某种物质填充。“空心”起源于导管周围恢复分生能力的薄壁细胞。随后,木栓形成层径向分裂,形成木栓形成层,木栓形成层向内分化成木栓层,产生环状结构,即木间木栓。木间木栓的发育也是一个PCD事件。超微结构特征表现为细胞壁边缘有囊泡的产生,线粒体及高尔基体降解,膜系统紊乱,细胞质致密及细胞核畸形,细胞壁呈现不同程度的膨胀。细胞核的降解通常发生在木间木栓形成早期和木间木栓形成期,细胞核呈tunel阳性;而在木间木栓成熟期,DAPI染色和tunel检测均呈阴性。凝胶电泳显示DNA呈弥散状。（3）蒙古黄芪根的次生结构中不同组织的次生代谢产物研究结果显示:周皮共检测出15种化合物,皂苷类化合物有9种,黄酮类化合物4种;次生韧皮部测得17个化合物,11个黄酮类化合物,皂苷类化合物仅有3个;次生木质部共有18个化合物被识别,其中黄酮类化合物12个,皂苷类化合物3个。可见周皮较次生韧皮部及次生木质部的皂苷类化合物更为丰富,黄酮类化合物在次生韧皮部及次生木质部分布丰富且均匀,推测黄酮类化合物主要存在在薄壁细胞内。蒙古黄芪根中“枯皮”和“空心”结构的不同组织研究结果显示,“枯皮”共识别出25个化合物,其中黄酮类化合物6种,皂苷类化合物15种;“空心”结构共检测出28个化合物,包括黄酮类化合物10种,皂苷类化合物15种。“枯皮”中新产生的周皮或“空心”中木间木栓环出现的部位,皂苷类化合物分布明显增加,分别为13和15个,较其他的组织丰富;黄酮类化合物在死亡的细胞中并未表现出明显的减少。[结论]（1）蒙古黄芪根中“枯皮”是落皮层结构,“空心”是根中次生木质部产生了异常结构,即木间木栓。两者的发生发育均为细胞程序性死亡（PCD）事件,表现为细胞核畸形,核仁消失及细胞内各种细胞器的降解,DNA片段化等典型的植物PCD特征。（2）黄芪根中“枯皮”和“空心”的形成导致了皂苷类成分的增多,黄酮类成分种类的增加,即黄芪“枯皮”和“空心”的出现影响了根中皂苷类与黄酮类成分的配比。

关键词：蒙古黄芪 PCD tunel检测超微结构激光显微切割 UPLC-Q/TOF-MS

口服髓鞘素对实验性变态反应性脑脊髓炎的防治作用及口服耐受机理研究

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口服髓鞘素对实验性变态反应性脑脊髓炎的防治作用及口服耐受机理...

作者：陈慧芳河北医科大学

学位级别：硕士

目的：多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)属中枢神经系统(Central nervous system，CNS)自身免疫性疾病，在世界范围内的发病率呈逐年上升趋势，为青壮年致残的主要神经系统疾患之一，已对人类的健康和劳动力资源构成了严重的威胁。... 详细信息

目的：多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)属中枢神经系统(Central nervous system，CNS)自身免疫性疾病，在世界范围内的发病率呈逐年上升趋势，为青壮年致残的主要神经系统疾患之一，已对人类的健康和劳动力资源构成了严重的威胁。目前临床上尚无针对本病的理想疗法。实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)是T细胞介导的CNS脱髓鞘疾病，是研究人类脱髓鞘疾病MS的理想动物模型，二者在致敏抗原、临床表现、组织病理改变和发病机理等方面均类似。通过动物模型口服抗原诱导免疫耐受是目前治疗EAE乃至MS的研究热点，尽管其机制尚不十分明确，但已受到国内外学者越来越多的关注。本研究在建立大鼠EAE模型基础上，以所提取的髓鞘素做为自身口服抗原，用于诱导免疫耐受。并从分子水平上分析口服组和EAE对照组在病程不同阶段(发病早期、高峰期及恢复期)对外周免疫器官中细胞因子mRNA的表达特征，研究细胞因子与EAE发病及口服耐受的关系;同时在EAE病程不同阶段检测外周免疫器官及CNS内细胞凋亡的变化情况，进而探讨免疫耐受的机制，为EAE、MS的防治提供依据。方法：本研究共分三部分。第一部分为髓鞘素的提取与鉴定，采用不连续梯度离心的方法从牛脊髓白质中提取中文摘要髓鞘素，通过SDSPAGE分子量蛋白电泳检测其主要成分，并通过致敏豚鼠的方法检测其抗原活性，结果显示，髓鞘素的主要成分为大分子量髓鞘碱性蛋白（Myelin basicProtein，MBP人并具有较强的致 EAE生物学活性;第二部分为EAE动物模型的建立及评价，通过四足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆／完全福氏佐剂（GPSCHCFA人后足路背面真皮内注时百日咳疫苗的方式免疫大鼠，成功地诱导出EAE模型;第三部分为口服髓鞘素对EAE的防治作用及口服耐受扒理研究，以所提取的髓鞘素做为自身抗原，于免疫前7、5、2大、免疫日及免疫后2、5、7大给大鼠口服，剂量为 5 mg／只·次，总量为 3 5 mg／只。免疫日定为第 0大。观察动物发病情况并分别于免疫后第 9、13、23天取材。取动物外周淋巳结及脾，用反转录－聚合酶链反应（RTPCR）半定量法检测外周淋巴结中细胞因子 mRNA的表达情况，同时应用流式细胞仪吓CM）分析 DNA倍体、进行常规HE染色及原位细胞凋亡检测等方法观察外周免疫器官中细胞凋亡情况：并对＊＊S进厅常规＊E染色、原位细胞凋亡检测，研究CNS中细胞凋亡情况。所得各项结果分别同对照组比较，并进行统计学处理。结果：1．动物发病情况对照组大鼠最早于免疫后第 9天开始发病，平均发病时间为免疫后第 10刁士 1石天，口服组发病时间较对照组推迟，平均发病时间为兔疫后第11．8士2．4天。口服组症状级别为 2．0士 l．76级，对照组 3．4土1．引级，k0刀5：口服组发病率为刀％，对照组90％，P＞0刀5;病理学检查，口服组＊＊S中单个核细胞浸润的数目和范围较对照组明显减少。中文摘要 ***半定量分析口服组与对照组均表达炎性细胞因子肿瘤坏死因子－a（Tmow necrosls factor－a， TNF－a）TnRNA;同对照组相＊，口服组 TNFa TnxvA 的表达明显减少;两组均表达抗炎性细胞因子转化生长因子－p（Transforming gTowth factor－D，TGF－p）mRNA，同对照组相比，口服组TGF－p nutvA的表达增加。各组内部，TNFQ TmtNA的表达随症状的加重而增加，TGF pmRNA的表达随症状的加重而下降。 3．流式细胞仪检测结果口服组与对照组脾和淋巴

关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎髓鞘素口服耐受细胞因子 RT-PCR 细胞凋亡 HE染色流式细胞仪分析 tunel检测

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烟草花柱引导组织细胞程序性死亡动态研究

烟草花柱引导组织细胞程序性死亡动态研究

作者：陈妍西北大学

学位级别：硕士

花柱(style)作为雌蕊的一部分,是雌性生殖器官中重要的结构。花柱具有开放型(open type)和闭合型(closed type)两种类型。它连接柱头、子房,为花粉管生长的主要场所。花柱在雌蕊-花粉管相互作用这一过程中的作用获得的关注较少。在闭合... 详细信息

花柱(style)作为雌蕊的一部分,是雌性生殖器官中重要的结构。花柱具有开放型(open type)和闭合型(closed type)两种类型。它连接柱头、子房,为花粉管生长的主要场所。花柱在雌蕊-花粉管相互作用这一过程中的作用获得的关注较少。在闭合型花柱中,花粉管生长的主要场所为引导组织(transmitting tissue)。引导组织的存在对花粉管具有重要作用,分别为支持、营养并引导花粉管生长方向。目前,已经有研究证明引导组织细胞死亡为细胞程序性死亡(PCD),但是由于引导组织一直以来获得较少的关注,其细胞死亡的方式、PCD时序性以及与花粉管生长之间的时间、空间上的关系并不是十分明确。我们使用半薄切片、组织染色、tunel原位检测以及超薄切片技术,对未授粉和授粉烟草(Nicotiana tabacum Linn.)花柱内引导组织在烟草花期内的变化进行了观察。以阐明未授粉及授粉花柱内引导组织的死亡方式、特点以及二者的区别。并对授粉后引导组织PCD时与花粉管生长的时空变化关系进行分析,为探明引导组织与花粉管之间的关系提供依据。结果发现：(1)在未授粉花柱内,在花期内引导组织随着开花天数的增加细胞开始死亡,其死亡的方式为发育型PCD,但细胞壁并不降解。与花内其他组织的死亡一样,为衰老的过程。花期结束时,花柱(包括引导组织)与花部器官一起脱落。(2)在授粉花柱内,引导组织存在两种细胞死亡方式,一种方式与未授粉花柱内类似;另一种是一种快速的PCD过程。虽然细胞死亡方式不同,但是在细胞死亡的末期,其细胞壁会发生降解。这一特点也是与未授粉引导组织细胞PCD的不同。(3)花柱内引导组织结构的快速变化发生在花粉管生长过后,这可能是这些生长过后的花粉管所引起的。目前对于花粉管引起引导组织快速PCD之中所存在的调控机制不甚了解,尚需进一步探究。

关键词：烟草引导组织授粉及不授粉细胞程序性死亡形态学变化细胞核动态 tunel检测超微结构