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畜牧兽医学报 2012年第11期43卷 1767-1772页

作者：陈轶雯李中圣白挨泉陈善真李其昌姚火春王贵平南京农业大学动物医学院南京210095 广东现代农业集团研究院有限公司广州510630 佛山科学技术学院佛山528000

为了解广东省猪群中猪输血传播病毒(ttsuvs)的感染情况,采用Nest-PCR方法对广东省7个不同地区规模化猪场抽检采集的159份育肥猪血清进行检测。结果表明,ttsuvs的2个种——ttsuv1和ttsuv2的阳性检出率分别为54.72%和35.22%,二者的共感染... 详细信息

为了解广东省猪群中猪输血传播病毒(ttsuvs)的感染情况,采用Nest-PCR方法对广东省7个不同地区规模化猪场抽检采集的159份育肥猪血清进行检测。结果表明,ttsuvs的2个种——ttsuv1和ttsuv2的阳性检出率分别为54.72%和35.22%,二者的共感染率为29.56%,说明ttsuvs在广东猪群中有较为广泛的传播。挑选Nest-PCR检测ttsuv1和ttsuv2为阳性的样品,分别在病毒保守区设计引物,扩增病毒基因,测序验证后,与其它已发表的不同属种TTVs ORF1序列进行进化树分析。结果表明猪TTVs与人、犬、猫、猴的TTVs分别处在进化树的不同分枝,具有很大差异;本次研究获得的ttsuv1ORF1序列与国内多株已发表的ttsuv1ORF1序列相似性为72%～75%;获得的ttsuv2ORF1序列与现有测序的多株ttsuv2的ORF1序列相似性为88%～97%。此研究为进一步研究ttsuvs流行状况、血清学诊断方法和临床防治技术奠定基础。

关键词： ttsuv1 ttsuv2 流行病学抗原进化分析

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广东ttsuvs流行病学调查与ttsuv2 ORF1抗原性分析

广东TTSuVs流行病学调查与TTSuV2 ORF1抗原性分析

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作者：陈轶雯南京农业大学

学位级别：硕士

输血传播病毒(Transfusion transmitted virus, TTV)是一种小的,无囊膜的,单股环状负链的人畜共患DNA病毒,TTV的发现是于1997年底由NiShizawa运用代表性差异分析技术(Representational difference analysis)从一名非甲一庚型肝炎病人的血清中克隆得到的病毒DNA片段,随后,人们在非灵长类以及猪、牛、羊、犬,猫、家禽等多种家养及野生动物体内也发现了TTV的感染。猪源TTV (ttsuvs)在世界范围内广泛检出,引起人们的极大关注。目前ttsuvs的诊断主要依赖DNA的检测,由于猪源TTV具有潜在的危害,因此对其抗原性进行分析是非常必要的。本实验利用基因重组技术将ttsuv2ORF2基因克隆至原核表达系统中,制备获得了具有生物学活性的重组Cap蛋白,并进行了免疫原性研究,主要研究内容如下：1、为了解广东省猪群中猪输血传播病毒(ttsuvs)的感染情况,本研究采用Nest-PCR方法对广东省7个不同地区规模化猪场抽检采集的159份育肥猪血清进行检测。结果表明,ttsuvs的两个种ttsuv1和ttsuv26(?)阳性检出率分别为54.72%和35.22%,二者的共感染率为29.56%,说明ttsuvs在广东猪群中有较为广泛的传播。挑选Nest-PCR检测ttsuv1和ttsuv2为阳性的样品,分别在病毒保守区设计引物,扩增病毒基因,并对比分析通过PCR扩增获得的ttsuvs结构蛋白编码区ORF1与NCBI上其它已发表的不同属种TTVsORF1序列的进化关系和同源性。结果表明猪TTV与人、犬、猫、猴的TTVs处在进化树的不同分枝,具有很大差异;本次研究获得的ttsuv1ORF1序列与国内多株已发表的ttsuv1ORF1序列同源性为72%-75%;获得的ttsuv2ORF1序列与现有测序的多株ttsuv2的ORF1序列同源性为88%-97%。2、以本实验室保存的ttsuv2-GDIMA1为模板设计引物,进行ORF1序列的PCR扩增、克隆及测序。通过对ttsuv2ORF1蛋白的抗原性,信号肽,跨膜区,亲疏水性和二级结构进行预测分析,将ttsuv2ORF1截短成VP1、VP2两个片段,分别将这两片段连入pET-21b载体并通过大肠杆菌系统进行表达。通过蛋白纯化,切胶回收获得高纯度的目的蛋白。以获得的高纯度ORF1-VP1与ORF1-VP2蛋白为抗原,以血清样品中经Nest-PCR检测ttsuv2呈阳性的样品进行Western Blot检测。结果显示ORF1-VP1与ORF1-VP2的表达产物均为包涵体。Western Blot结果证实,猪对ttsuv2的感染的确产生了抗ttsuv2ORF1的IgG抗体,且两段蛋白均具有抗原性。本研究对ttsuv2ORF1蛋白的生物信息学特性进行了一定的探索,有利于监测ttsuv2的进化情况,为深入研究该病毒的遗传变异和蛋白质功能奠定一定的生物学基础。3、为了分析和筛选ttsuv2ORF1抗原性较好的区域,本试验将通过大肠杆菌表达系统表达出的ttsuv2ORF1-VP1和VP2重组蛋白纯化后作为间接ELISA检测方法的抗原,与Nest-PCR共同检测213份猪血清中抗TTSu V2的IgG抗体和病毒DNA。结果显示Nest-PCR检测呈阴性的部分样本,通过血清学检测呈现出较高抗体水平;而Nest-PCR检测呈阳性的部分血清样品,其抗体水平却相对较低。ttsuv2ORF1-VP1蛋白和VP2蛋白均具有良好反应原性,实验结果预示其中可能存在中和位点。用商品化的ELISA试剂盒检测相同血清中CSFV、PRRSV、PRV、HCV的阳性率分别为84.44%、86.22%、45.33%、68.42%。本试验为进一步研究ttsuv2ORF1抗原表位奠定了基础。

关键词： ttsuv1 ttsuv2 流行病学蛋白表达抗原性分析间接ELISA检测抗原表位

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猪细环病毒1型感染与猪繁殖与呼吸综合征的相关性分析

猪细环病毒1型感染与猪繁殖与呼吸综合征的相关性分析

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第七届中国畜牧科技论坛

作者：周双海陈天慧单晶晶于红欣杨倩北京农学院动物科学技术学院

猪细环病毒1型(ttsuv1)是一种新近发现的小的DNA病毒,在猪群中普遍流行。有资料报道,ttsuv1可促进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)的致病作用、并可抑制猪繁殖与呼吸综合征(PPRS)疫苗的免疫效果。采集40头临床疑似PRRS病猪血清和40头同... 详细信息

猪细环病毒1型(ttsuv1)是一种新近发现的小的DNA病毒,在猪群中普遍流行。有资料报道,ttsuv1可促进猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)的致病作用、并可抑制猪繁殖与呼吸综合征(PPRS)疫苗的免疫效果。采集40头临床疑似PRRS病猪血清和40头同群健康猪血清,经RT-PCR检测,有31头为PRRS病猪,27头为PPRSV亚临床感染猪。用荧光定量PCR方法检测ttsuv1和PRRSV载量,结果显示,PRRS病猪血清中PRRSV载量极显著(P1)高于PRRSV亚临床感染猪;PRRS病猪血清中ttsuv1载量仅稍高于PRRSV亚临床感染猪,其差异不显著(P>0.05);PRRSV感染猪的ttsuv1载量与PRRSV载量之间无显著(P>0.05)相关性。研究结果表明,ttsuv1与PRRS发生之间可能没有相关性。

关键词： ttsuv1 PRRS 荧光定量PCR 病毒载量相关性

来源： cnki会议评论

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