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利用tsa/Opal技术实现肾活检石蜡切片多重免疫荧光染色

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临床与实验病理学杂志 2024年第4期40卷 442-444页

作者：王宇哈尔滨医科大学附属第二医院肾脏病理实验室哈尔滨150086

肾活检病理是肾小球疾病诊断的金标准[1],诊断的手段包括光镜、免疫荧光和电镜。三种观察方法对组织处理的要求不同,因此穿刺的肾活检标本需要人为地进行分割。这一操作容易造成某一观察项目没有肾小球的情况,此外也无法在同一肾小球中... 详细信息

肾活检病理是肾小球疾病诊断的金标准[1],诊断的手段包括光镜、免疫荧光和电镜。三种观察方法对组织处理的要求不同,因此穿刺的肾活检标本需要人为地进行分割。这一操作容易造成某一观察项目没有肾小球的情况,此外也无法在同一肾小球中同时进行光镜、免疫荧光及电镜观察。尽管在体视镜或普通光学显微镜下分割肾组织可以尽量避免没有肾小球的情况,但操作非常依赖穿刺医师的水平,且对于出现硬化或缺血肾小球的组织,即使在显微镜下辨别穿刺组织中的肾小球亦非常困难。更重要的是,对于仅表现为局灶性病变的疾病,人为分割很可能导致在一个检查项目中观察到病变,在另外的检查项目中观察不到。此外,三种观察手段的观察重点不同,免疫荧光主要观察是否存在免疫复合物及补体的沉积,光镜主要观察整体的形态学改变,电镜则主要观察超微结构异常。尽管三种观察方法是分开的,但我们需要整合三种观察内容对疾病进行整体分析,因此假如在同一肾小球中能同时获得免疫、形态学和超微结构的信息更有利于我们做出准确的诊断和开展发病机制的研究。

关键词：肾活检石蜡切片 tsa Opal 免疫荧光

香港地区tsa英语听力测试会话语篇的话轮特点及教学启示——以2022年tsa英语听力测试试题为例

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中小学英语教学与研究 2022年第10期 2-6,10页

作者：陈丽曼广东省中山市三乡镇鸦岗小学

我们的社会在很大程度上是一个会话式的社会,社会生活的许多事情都是通过会话交流实现的(Atkinson&Heritage,1984:1-2)。话轮是会话的基本结构单位(莫莉莉,1998),其理论概念由美国社会学家Sacks等于1974年提出,但他们并未对它下过完整... 详细信息

我们的社会在很大程度上是一个会话式的社会,社会生活的许多事情都是通过会话交流实现的(Atkinson&Heritage,1984:1-2)。话轮是会话的基本结构单位(莫莉莉,1998),其理论概念由美国社会学家Sacks等于1974年提出,但他们并未对它下过完整的定义(董敏,2008)。刘虹(1992)认为,话轮是指在会话过程中,说话者在任意时间内所说出的一番话,其结尾以说话者和听话者的角色互换或各方的沉默为标志。

关键词：基本结构单位英语听力测试角色互换教学启示会话过程 tsa

tsa调控水牛成纤维细胞染色质可及性的途径与机制研究

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TSA调控水牛成纤维细胞染色质可及性的途径与机制研究

作者：付家园广西大学

学位级别：硕士

供体细胞的克隆效率主要与其表观遗传修饰状态、染色质结构以及代谢特征密切相关,而组蛋白乙酰化是主要的表观遗传修饰方式之一,使用组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histone deacetylase inhibitor,HDACi）可提高供体细胞的组蛋白乙酰化水平,... 详细信息

供体细胞的克隆效率主要与其表观遗传修饰状态、染色质结构以及代谢特征密切相关,而组蛋白乙酰化是主要的表观遗传修饰方式之一,使用组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Histone deacetylase inhibitor,HDACi）可提高供体细胞的组蛋白乙酰化水平,是提高体细胞克隆效率的有效途径。前期的研究工作发现,使用tsa（一种HDACi）处理供体细胞,可以提高后续水牛克隆胚胎的发育率,但其具体的作用机制尚不清楚。因此,本研究拟通过探讨tsa对供体细胞（水牛胎儿成纤维细胞,Buffalo fetal fibroblasts,BFFs）代谢途径、组蛋白乙酰化修饰和染色质结构的影响,以及三者之间的相互关系,阐明tsa调控细胞染色质的途径与机制。研究取得以下结果:***对BFFs葡萄糖代谢途径的影响。BFFs经tsa培养处理后48h,电镜下观察到线粒体形态由内嵴清晰的长棒状萎缩为圆形,Seahorse细胞能量代谢仪检测显示BFFs的耗氧速率（oxygen consumption rates,OCR）,产酸速率（extracellular acidification rates,ECAR）均增加,细胞代谢旺盛且向糖酵解途径偏移。进一步分析研究发现,BFFs在tsa处理后3h细胞内糖酵解关键酶PDK1和LDHA表达开始上调;处理后12 h LDHA的表达显著升高,细胞内乳酸含量显著增加;处理后24 h PDK1的表达显著升高;处理后48 h线粒体膜电位显著降低,但线粒体的DNA拷贝数在各检测点无显著变化。由此表明,tsa主要通过上调糖酵解关键酶PDK1和LDHA表达而增强细胞的糖酵解代谢途径。***对组蛋白乙酰化修饰水平和染色质可及性的影响。tsa处理后3 h,HDACs活性显著下降,H3K9ac修饰水平显著上调;tsa处理后24 h,HP1α表达水平显著下调;tsa处理后36 h,染色质可及性增加。然而,tsa处理对细胞的HATs活性无显著影响。由此表明,tsa主要通过抑制HDACs活性,上调H3K9ac修饰水平而增加细胞的染色质可及性。***通过糖酵解调控染色质可及性。当用PDK1的抑制剂MP7（250n M）和LDHA的抑制剂GSK2837808A（5μM）培养处理BFFs时,糖酵解关键基因PDK1、LDHA被抑制,细胞内HP1α表达升高,H3K9ac修饰水平降低。添加两种抑制剂或其中的一种,均导致细胞内的ATP含量上升,乳酸含量下降,HDACs活性显著上调,H3K9ac修饰水平显著下调,HP1α表达水平极显著上调,染色质可及性降低。添加tsa也不能扭转上述变化,表明tsa主要是通过糖酵解途径发挥染色质可及性的调控作用。以上结果表明:***首先上调H3K9ac修饰水平,随后糖酵解关键酶PDK1和LDH的表达上调,细胞代谢偏向糖酵解代谢途径,最后导致细胞染色质可及性增加。2.抑制细胞的糖酵解途径,乳酸产量下降,H3K9ac修饰水平下调,tsa的作用消失,表明tsa主要通过调控糖酵解途径发挥染色质可及性的调控作用。

关键词： tsa 水牛成纤维细胞代谢途径染色质可及性

Effects of trichostatin A(tsa)on growth and gene expression in HeLa cells

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The Chinese-German Journal of Clinical Oncology 2008年第5期7卷 304-308页

作者： Guangyong Qin Huasheng Fang Yuxiao Li Fengqiu Zhang School of Physical Science ＆ Technology Zhengzhou University Zhengzhou 450052 China

Objective： To investigate the expressions of p53, RB1, Fas, c-fos, Ras, EGFR mRNA in human cervical cancer （HeLa） cell in response to the trichostatin A （tsa）. Methods： We took count of HeLa cells in different incubation times with tsa （0.2μm/L）. The result indicated that HeLa cells changed evidently when HeLa cells were incubated for 36 h. Then, we investigated the genes expression （mRNA levels） of HeLa cells after treatment for 36 h using SYBR green real-time PCR. Results： We demonstrated that trichostatin A （tsa） could make human cervical cancer （HeLa） cell morphological change and induce HeLa cell apoptosis. Furthermore, the data suggest that tsa-induced down-regulation of p53, RB1, Fas, but upregulated c-fos gene expression after treatment for 36 h, and Ras, EGFR did not show obvious response to tsa treatments. Conclusion： tsa has different effects on gene expression.

关键词： tsa HeLa cell real-time PCR gene expression

tsa对花生不同抗旱品种的根响应干旱的影响

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植物生理学报 2019年第6期55卷 821-828页

作者：张志黄莹琳王金祥胡博李玲华南师范大学生命科学学院广东省植物发育生物工程重点实验室广州510631 华南农业大学资源与环境学院华南农业大学根系生物学研究中心广州510640

研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A (tsa)对不同抗旱品种花生‘粤油-7’和‘汕优-523’根系响应干旱的影响。结果表明,与对照相比, 1μmol·L-1 tsa处理的花生根系在干旱下POD和SOD酶活力增加,抗旱相关基因AhNCED1、AhAREB1和AhDHN... 详细信息

研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A (tsa)对不同抗旱品种花生‘粤油-7’和‘汕优-523’根系响应干旱的影响。结果表明,与对照相比, 1μmol·L-1 tsa处理的花生根系在干旱下POD和SOD酶活力增加,抗旱相关基因AhNCED1、AhAREB1和AhDHN2的表达上升,并改变组蛋白H3ac、H3K9ac、H3K14ac的表达程度;与敏旱品种‘汕优-523’相比, tsa处理下,抗旱品种‘粤油-7’根分生区和伸长区的细胞长度增加,总根长和根表面积较大、保水能力较强、POD酶活力较高。花生2个品种的根系在响应干旱时生理反应存在的差异,可能与根内组蛋白乙酰化水平和抗旱相关基因的表达变化相关。

关键词： tsa 花生根响应干旱组蛋白乙酰化

一种回热型tsa空分纯化再生系统的节能效果分析

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工程热物理学报 2014年第2期35卷 209-212页

作者：张学军陆军亮邱利民张小斌王晓蕾浙江大学制冷与低温研究所浙江杭州310027

为了提高纯化系统的能源利用率,降低空分纯化系统的能耗,本文提出一种在传统双吸附器系统中增设回热器以回收再生阶段排出氮气中部分热量的纯化流程,并以公开的实际制氧厂工况为例进行了节能效果分析。计算表明,采用带回热器的tsa空分... 详细信息

为了提高纯化系统的能源利用率,降低空分纯化系统的能耗,本文提出一种在传统双吸附器系统中增设回热器以回收再生阶段排出氮气中部分热量的纯化流程,并以公开的实际制氧厂工况为例进行了节能效果分析。计算表明,采用带回热器的tsa空分纯化再生系统后,最大可使污氮气再生电加热量减少56.0%。

关键词：纯化 tsa 回热器

tsa促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达

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遗传 2011年第7期33卷 749-756页

作者：孔庆然朱江黄波郇延军王峰石永乾刘仲凤武美玲刘忠华东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。tsa(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙... 详细信息

不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。tsa(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时tsa能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了tsa处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,tsa同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论tsa处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。

关键词： tsa 体细胞核移植胚胎发育外源基因表达猪

转录组分析组蛋白去乙酰化酶抑制剂tsa对毛白杨悬浮细胞表达谱的影响

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北京林业大学学报 2018年第9期40卷 1-14页

作者：张永卓刘雅琳陆海李慧北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

组蛋白去乙酰化酶HDAC具有调节细胞增殖、诱导细胞分化、凋亡的作用,是近年生物学研究热点之一,而在木本植物方面的作用却鲜有报道。【目的】本实验用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,tsa)对杨树悬浮细胞进行处理,通... 详细信息

组蛋白去乙酰化酶HDAC具有调节细胞增殖、诱导细胞分化、凋亡的作用,是近年生物学研究热点之一,而在木本植物方面的作用却鲜有报道。【目的】本实验用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,tsa)对杨树悬浮细胞进行处理,通过改变细胞的组蛋白乙酰化水平,来探讨其对基因表达谱变化的影响。【方法】用0.5μmol/L的tsa处理悬浮细胞,10 d后收集材料用于RNA-Seq分析,比较经过tsa处理与对照组的悬浮细胞之间转录组表达差异情况。【结果】通过显微镜观察发现,对照组细胞呈均匀椭圆形,而经过tsa处理后的细胞出现圆形及长条形细胞。通过转录组分析得到4 465个差异表达基因(DEGs),其中2 363个基因上调,2 102个基因下调。差异表达基因主要富集在细胞周期、苯丙素生物合成、细胞壁结构成分和乙酰化相关等途径。【结论】通过分析tsa处理和对照组的悬浮细胞基因表达差异,发现tsa通过影响组蛋白乙酰化水平直接或间接影响细胞生长、细胞壁组分和细胞周期的相关基因,为认识组蛋白乙酰化对植物生长发育的影响提供依据。

关键词：转录组悬浮细胞 tsa 毛白杨组蛋白去乙酰化

P2RX7介导的细胞焦亡和凋亡参与tsa缓解的烟草烟雾暴露所致的小鼠子宫损伤过程

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中国药理学通报 2020年第6期36卷 778-783页

作者：丛艳飞丁晶晶李芳王莉莉中国医科大学附属盛京医院实验研究中心辽宁省环境与代谢疾病动物模型研究与应用重点实验室辽宁本溪117000

目的探索P2RX7介导的细胞焦亡和凋亡是否参与了曲古抑菌素A(trichostatin A,tsa)缓解的烟草烟雾(cigarette smoke,CS)暴露所致的雌性小鼠子宫损伤过程。方法通过烟草烟雾(cigarette smoke,CS)暴露30 d方法制备CS暴露小鼠模型,CS暴露的... 详细信息

目的探索P2RX7介导的细胞焦亡和凋亡是否参与了曲古抑菌素A(trichostatin A,tsa)缓解的烟草烟雾(cigarette smoke,CS)暴露所致的雌性小鼠子宫损伤过程。方法通过烟草烟雾(cigarette smoke,CS)暴露30 d方法制备CS暴露小鼠模型,CS暴露的同时给予tsa进行治疗;HE染色观察CS暴露后小鼠子宫组织形态学变化;Western blot技术检测小鼠子宫肌层P2RX7,细胞焦亡相关蛋白(IL-1β、ASC、NLRP3和cleaved caspase-1)和细胞凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3和cleaved caspase-9)的表达水平;Real time-PCR技术检测Hdac 1,P2rx7,Il-1β和Asc的mRNA转录活性。结果HE染色结果显示,CS暴露后小鼠子宫肌层明显变薄,间质细胞和腺体数量明显减少;Western blot结果显示,tsa明显抑制了CS暴露诱导的小鼠子宫组织P2RX7、细胞焦亡和凋亡相关蛋白的表达;Real time-PCR结果显示,tsa抑制了CS暴露诱导的小鼠子宫组织中Hdac1,P2rx7和Asc的mRNA转录活性升高。结论P2RX7介导的细胞焦亡和凋亡参与了tsa缓解的CS暴露所致的小鼠子宫损伤过程。

关键词：烟草烟雾暴露细胞焦亡细胞凋亡子宫 P2RX7 tsa