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TRPM4通道对人口腔颊黏膜成纤维细胞增殖和迁移的影响

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口腔医学研究 2020年第5期36卷 490-495页

作者：王薛藤聂敏海左东川邓浩曾锦西南医科大学附属口腔医院牙周黏膜科四川泸州646000 西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室四川泸州646000 西南医科大学心血管医学研究所四川泸州646000 西南医科大学附属口腔医院正畸科四川泸州646000

目的:验证TRPM4(transient receptor potential melastatin-4)在口腔颊黏膜成纤维细胞的表达,探讨其对人口腔颊黏膜成纤维细胞迁移与增殖中的作用。方法:收集人正常颊黏膜组织进行原代细胞提取与原代培养;采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法... 详细信息

目的:验证TRPM4(transient receptor potential melastatin-4)在口腔颊黏膜成纤维细胞的表达,探讨其对人口腔颊黏膜成纤维细胞迁移与增殖中的作用。方法:收集人正常颊黏膜组织进行原代细胞提取与原代培养;采用RT-PCR和细胞免疫荧光方法检测成纤维细胞中TRPM4的表达。全细胞膜片钳记录成纤维细胞TRPM4通道的全细胞电流。MTT法和细胞划痕实验分别检测应用TRPM4通道特异性阻断剂(9-菲酚)或特异性siRNA抑制TRPM4通道的功能对成纤维细胞增殖和迁移的影响。结果:人口腔颊黏膜成纤维细胞功能性表达TRPM4。抑制TRPM4通道的功能能够明显降低成纤维细胞的增殖和迁移能力。结论:TRPM4通道参与成纤维细胞增殖以及迁移能力的调控。

关键词：颊黏膜成纤维细胞 TRPM4 细胞增殖细胞迁移

TRPM4通道对人口腔颊黏膜成纤维细胞增殖和迁移的影响

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TRPM4通道对人口腔颊黏膜成纤维细胞增殖和迁移的影响

作者：王薛藤西南医科大学

学位级别：硕士

目的:TRPM4(Transient receptor potential melastatin-4,瞬时受体通道蛋白M4)是一种单价阳离子瞬时受体电位通道,表达于大部分组织与细胞中,其正常表达参与维持人体各器官系统的健康与稳态,一旦表达异常可能对人体健康造成一定程度的... 详细信息

目的:TRPM4(Transient receptor potential melastatin-4,瞬时受体通道蛋白M4)是一种单价阳离子瞬时受体电位通道,表达于大部分组织与细胞中,其正常表达参与维持人体各器官系统的健康与稳态,一旦表达异常可能对人体健康造成一定程度的危害。人口腔颊黏膜及牙龈的主要成分细胞为成纤维细胞,参与人口腔颊黏膜及牙龈的创伤与修复,对维持人口腔的正常形态至关重要。成人口腔黏膜的成纤维细胞增殖率一般较低,但在创伤愈合时其增殖率升高,此时的成纤维细胞中肌动蛋白含量增加,具有收缩功能,可促进创伤的修复过程,这在口腔黏膜的创伤修复中发挥着关键作用。众所周知,收缩必然有钙信号的参与,TRPM4是否参与在此过程中的钙信号调控及其调控机制尚需进一步研究。本研究将首先通过细胞实验探索TRPM4在人口腔颊黏膜成纤维细胞中是否表达,接下来通过抑制TRPM4的表达或关闭其离子通道明确TRPM4对人口腔颊黏膜成纤维细胞迁移与增殖的影响。方法:(1)细胞培养与鉴定:于西南医科大学附属医院口腔颌面外科手术室收集因颊部黏液腺囊肿或欲进行正颌手术而就诊的患者的正常颊黏膜组织(取得患者及家属知情同意),在无菌超净台上进行原代成纤维细胞分离与原代培养。利用角蛋白抗体与波形蛋白抗体进行细胞免疫荧光实验,确定所培养出的细胞系为颊黏膜成纤维细胞;(2)TRPM4表达检测:采用实时逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)和细胞免疫荧光方法检测成纤维细胞中TRPM4的表达情况;进一步用全细胞膜片钳记录颊黏膜成纤维细胞TRPM4通道的全细胞电流,验证TRPM4在颊黏膜成纤维细胞的表达;(3)FAM-siRNA转染实验:分三组实验:A组为正常对照组;B组为使用特异性的siRNA瞬时转染沉默成纤维细胞中TRPM4基因的表达,即为实验组。通过RT-PCR与膜片钳技术检测siRNA的转染效率及沉默效果;C组则利用TRPM4特异阻断剂(9-菲酚)抑制细胞中TRPM4功能作为阳性对照组。(4)细胞增殖与迁移实验:A、B、C三组细胞均行细胞迁移(划痕实验)和增殖情况(MTT法)检测。对数生长期的成纤维细胞行划痕24 h后观察三组细胞的划痕变化的差异;利用MTT法观察三组细胞24 h后的增殖情况。结果:细胞免疫荧光实验的细胞鉴定结果显示该细胞系的角蛋白抗体染色阴性,波形蛋白抗体染色为阳性,该细胞系表达波形蛋白而不表达角蛋白,该细胞系为人颊黏膜成纤维细胞;细胞免疫荧光实验与RT-PCR实验结果分别从蛋白和mRNA水平检测到人口腔颊黏膜成纤维细胞表达TRPM4;膜片钳实验记录到TRPM4经典全细胞电流在上述细胞中的存在;特异性siRNA转染后进行RT-PCR实验,结果显示siRNA转染效率较高,TRPM4显著低表达;细胞迁移实验结果显示24 h后A组(对照组)细胞间的划痕明显较B组(siRAN转染组)与C组(9-菲酚组)更窄,即抑制TRPM4后颊黏膜成纤维细胞的迁移能力明显减弱;MTT实验结果显示第1 d A组(对照组)细胞的增殖率明显高于B组(siRAN转染组)与C组(9-菲酚组),即抑制TRPM4后颊黏膜成纤维细胞的增殖能力明显减弱。结论:人颊黏膜成纤维细胞功能性表达TRPM4通道;抑制TRPM4通道的表达和功能后,可在体外抑制细胞的增殖能力与迁移能力;TRPM4通道参与成纤维细胞增殖以及迁移能力的调控。

关键词：人颊黏膜成纤维细胞 TRPM4 细胞增殖细胞迁移

TRPM4抑制剂9-phe抑制血小板聚集和血栓形成的药理作用研究

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TRPM4抑制剂9-phe抑制血小板聚集和血栓形成的药理作用研究

作者：田晓旭郑州大学

学位级别：硕士

背景近年来,随着社会经济的发展及人口老龄化和城镇化进程的加剧,中国心血管病危险因素流行趋势明显,导致心血管病的发病人数持续增加。中国心血管病患病率处于持续上升阶段,其中冠心病患病人数超过1000万,中国城乡居民冠心病死亡率继... 详细信息

背景近年来,随着社会经济的发展及人口老龄化和城镇化进程的加剧,中国心血管病危险因素流行趋势明显,导致心血管病的发病人数持续增加。中国心血管病患病率处于持续上升阶段,其中冠心病患病人数超过1000万,中国城乡居民冠心病死亡率继续保持上升趋势,我国每年因冠心病死亡人数超过100万。由心血管疾病所产生的社会经济负担日渐加重,因此加强心血管疾病的防治研究工作刻不容缓。在动脉粥样硬化的基础上,血小板异常激活引起的血管内血栓形成是冠心病发生发展的重要病理基础。因此,抑制血小板的激活是治疗冠心病的主要手段。根据作用靶点的不同,临床常用的抗血小板药物主要分为四类:（1）环氧合酶-1（cox-1）抑制剂;（2）二磷酸腺苷（ADP）受体抑制剂;（3）血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa拮抗剂;（4）磷酸二酯酶抑制剂。血小板药物疗效肯定,但临床应用中仍存在诸多问题,如出血风险和药物抵抗等。这些临床问题的存在,需要我们进一步深入探索血小板活化过程中可能存在的分子机制。瞬时电位受体（transient receptor potential,TRP）蛋白超家族根据氨基酸序列的同源性分为七个亚家族。TRPM4属于瞬时电位受体M亚家族（trpm）成员,是TRP家族中的一种特殊蛋白。RPM4是一种Ca2+激活的非选择性阳离子通道蛋白,可通透一价阳离子,如Na+和K+,可被细胞内Ca2+浓度升高所激活,受电压、蛋白激酶A、PKC和PIP2等调节。TRPM4广泛表达于多个器官,直接参与许多生物学过程,包括细胞去极化、心脏节律产生和免疫应答。TRPM4高表达于浦肯野纤维细胞和心室肌细胞中,TRPM4突变参与导致进行性家族性心脏传导阻滞和心功能不全。9-phenanthrol（9-phe）可抑制TRPM4通道,且9-phe特别靶向TRPM4通道。在肾脏HEK-293细胞中、脑动脉平滑肌细胞、心脏浦肯野细胞和逼尿肌平滑肌细胞等细胞中,TRPM4样电流可被9-phe抑制。使用TRPM4抑制剂9-phenanthrol能够抑制早期后除极性心律失常,表明TRPM4与心律失常相关。TRPM4与高血压相关,TRPM4基因敲除小鼠表现为高血压,抑制TRPM4导致嗜铬细胞过度分泌儿茶酚胺类物质。TRPM4可影响多种免疫细胞的功能,如通过调节Ca2+信号影响T细胞功能和骨髓来源的肥大细胞的活化,参与单核细胞和巨噬细胞的活化过程。这些研究提示TRPM4参与多种心血管疾病的发生,然而,血小板是否表达TRPM4参与血小板活化,以及TRPM4特异性抑制剂9-phe是否具有抑制血小板的活化和血栓形成的作用,则未见报道。目的明确瞬时电位受体TRPM4在人血小板中的表达,探索瞬时电位受体TRPM4抑制剂9-phe对血小板活化和血栓形成的作用和可能的作用机制,为临床提供新的抗血小板的作用靶点,为冠心病的预防和治疗提供新的治疗策略。方法1.TRPM4在人和小鼠血小板中表达的研究我们利用PCR方法和Western Blot方法证实人和小鼠血小板中TRPM4的表达。2.TRPM4抑制剂9-Phe对血小板功能影响的评估2.1血小板聚集取正常人静脉血,分离得到富含血小板血浆（Platelet Rich Plasma,PRP）和洗涤血小板（Washed Platelet,WP）。将PRP或WP与不同浓度的TRPM4抑制剂9-phenanthrol（9-phe）在室温孵育后,明确 9-phe对ADP、Collagen和thrombin诱导的血小板聚集率的影响。2.2血小板铺展使用对照溶剂和9-phe（100 μM）对WP进行预处理,检测不同时间点9-phe对血小板在纤维蛋白原上的铺展的影响。2.3血小板回缩将使用对照溶剂和9-phe（200μM）预处理过的PRP分别加入聚集管中,检测不同时间点9-phe对血小板回缩的影响。3.小鼠肠系膜血栓模型静脉注射9-phe分离小鼠的血小板,在肠系膜动脉处行三氯化铁损伤血栓形成实验,检测9-phe对动脉血栓形成的影响。4.统计学方法本文数据均用Mean±SEM来表示,使用软件Graphpad Prism 8.0对数据处理分析,使用不成对的t检验分析两组之间的差异。当P＜0.05,认为差异有统计学意义。结果反转录PCR和蛋白免疫印迹实验结果显示在mRNA水平和蛋白质水平上,TRPM4表达于人和小鼠血小板上。在0-100 μM范围内,TRPM4抑制剂9-phe浓度依赖性地抑制ADP、胶原和凝血酶引起的血小板聚集。在血小板铺展实验中,200μM的9-phe显著抑制血小板在纤维蛋白原表面的铺展。在回缩实验中,100μM的9-phe明显抑制PRP的回缩。在小鼠肠系膜血栓模型中,9-phe给药组小鼠血栓形成显著减少,且其抗血栓效果与阳性药cangrelor类似。结论1.TRPM4表达在血小板上。2.TRPM4抑制剂9-phe浓度依赖性地抑制血小板聚集。3.TRPM4抑制剂9-phe静脉注射有

关键词： TRPM4 血小板活化 9-phe 聚集肠系膜血栓模型

TRPM4通过钙离子-钙蛋白酶调控FAK-PI3K/AKT/mTOR通路抑制结直肠癌转移

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TRPM4通过钙离子-钙蛋白酶调控FAK-PI3K/AKT/mTOR通路抑制结直肠...

作者：陈佳欣浙江大学

学位级别：硕士

背景:结直肠癌是临床上常见的消化系统恶性肿瘤,具有高发病率和高死亡率。多数患者在确诊时疾病已发展至中晚期且出现转移,因此寻找抑制肿瘤转移的靶点显得至关重要。由于启动子区域甲基化程度升高,细胞膜蛋白瞬时受体电位M通道家族成员... 详细信息

背景:结直肠癌是临床上常见的消化系统恶性肿瘤,具有高发病率和高死亡率。多数患者在确诊时疾病已发展至中晚期且出现转移,因此寻找抑制肿瘤转移的靶点显得至关重要。由于启动子区域甲基化程度升高,细胞膜蛋白瞬时受体电位M通道家族成员 TRPM4(Transient Receptor Potential Cation Channel Subfamily M Member 4)在结直肠癌组织中表达较正常肠粘膜显著下降或沉默,且转染TRPM4的肠癌细胞株胞浆中钙离子浓度显著升高。基因的甲基化修饰与钙离子信号通路在肿瘤的发生、发展及侵袭、转移等过程中发挥重要作用,但TRPM4是否可以作为甲基化调控的抑癌基因并通过调控钙离子信号通路影响结直肠癌的发展和转移尚未见报道。目的:探讨甲基化调控基因TRPM4在结直肠癌中的生物学作用和分子机制,重点研究TRPM4是否可以通过钙离子信号调控结直肠癌细胞内相关下游信号通路来影响肿瘤转移,为基于TRPM4的结直肠癌诊断和治疗提供科学依据。方法:通过甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)检测TRPM4基因启动子区域甲基化程度;通过半定量RT-PCR(Real-time PCR)和免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测正常肠粘膜和结直肠癌组织中TRPM4的表达变化;通过质粒转染获得稳定表达TRPM4的肠癌细胞株,体外观察TRPM4对肠癌细胞增殖、迁移、细胞骨架和钙稳态等的影响,并建立肿瘤裸鼠皮下种植模型体内观察TRPM4对结直肠癌生长的影响;通过Western Blot检测相关通路蛋白的表达变化,探究TRPM4可能调控的下游信号通路。结果:TRPM4在大多数肠癌细胞系和结直肠癌组织中表达降低甚至沉默,且在这些异常表达的肿瘤细胞及组织中检测到TRPM4基因启动子区域的高度甲基化。TRPM4蛋白表达和肿瘤分期(pTRPM4高表达的患者术后生存率明显高于低表达者。肠癌细胞株转染TRPM4后,通过体内外实验发现TRPM4能显著抑制肿瘤细胞的增殖、迁移,并引起细胞骨架重构。流式细胞术和Western Blot结果显示TRPM4显著促进钙离子内流并激活钙蛋白酶(calpain),介导焦点粘附激酶FAK(Focal Adherin Kinase)的蛋白水解并抑制其磷酸化,从而抑制下游PI3K/AKT/mTOR(Phosphatidylinositol 3-kinase/Protein Kinase B/Mammalian Target of Rapamycin)通路来抑制肿瘤细胞的转移,同时,TRPM4可造成多种迁移相关蛋白的表达改变。这些抑制作用可被钙蛋白酶抑制剂解除。结论:TRPM4是一个甲基化调控的结直肠癌抑癌基因,TRPM4蛋白表达可显著抑制肿瘤细胞的生长、侵袭迁移并引起细胞骨架重构。TRPM4通过激活钙离子-钙蛋白酶信号抑制FAK-PI3K/AKT/mTOR通路,从而抑制肿瘤转移。因此,TRPM4有希望作为一种肿瘤标志物和潜在治疗靶点应用于结直肠癌的诊断和转移治疗。

关键词： TRPM4 肿瘤抑癌基因钙离子转移 PI3K/AKT/mTOR通路

TRPM4通道抑制剂9-Phenanthrol在模拟心内直视术下对幼犬心肌的保护作用

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TRPM4通道抑制剂9-Phenanthrol在模拟心内直视术下对幼犬心肌的保...

作者：王中亮桂林医学院

学位级别：硕士

目的:观察瞬时受体电位M4型（transient receptor potential melastatin 4,TRPM4）通道抑制剂9-Phenanthrol在模拟心内直视下对幼犬心肌的保护作用。方法:选取18只种类相同,年龄小于8周,体重相近且健康的幼犬作为研究对象,随机分为9-Phe... 详细信息

目的:观察瞬时受体电位M4型（transient receptor potential melastatin 4,TRPM4）通道抑制剂9-Phenanthrol在模拟心内直视下对幼犬心肌的保护作用。方法:选取18只种类相同,年龄小于8周,体重相近且健康的幼犬作为研究对象,随机分为9-Phenanthrol组（n=9）和对照组（n=9）。对照组在体外循环建立前20分钟给予生理盐水,9-Phenanthrol组体外循环建立前20分钟给予TRPM4通道抑制剂9-Phenanthrol。然后,应用ELISA测定并分别对比两组幼犬在主动脉阻断后30分钟（T1）及60分钟（T2）、主动脉开放后1小时（T3）及2小时（T4）时刻的血清肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase isoenzyme MB,CK-MB）以及肌钙蛋白I（cardiac troponin I,cTn-I）水平的变化,并应用免疫组化和HE染色分析TRPM4在各时刻相同部位心肌组织的表达情况及心肌组织变性程度。结果:于T1、T2、T3、T4时刻,对照组和9-Phenanthrol组幼犬血清CK-MB及cTn-I呈升高趋势,而9-Phenanthrol组血清各指标明显低于对照组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比,9-Phenanthrol组幼犬心肌组织破坏较轻;9-Phenanthrol组幼犬心肌组织中TRPM4蛋白的表达比对照组中表达有所减弱。结论:TRPM4通道抑制剂9-Phenanthrol在模拟心内直视术中的应用可对缺血再灌注导致的心肌损伤起到一定程度的保护作用,对未来应用于临床实验具有一定的价值。

关键词： 9-Phenanthrol TRPM4 心内直视术心肌保护幼犬

9-菲酚抑制TRPM4的表达与大鼠膝滑膜炎的发生关系

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第9期 0001-0004页

作者：李翱翔姜静静魏人前广州医科大学附属第六医院·清远市人民医院骨科二区广东清远511500

通过大鼠膝关节腔内注射9-菲酚来抑制滑膜细胞中TRPM4通道蛋白的表达,了解TRPM4在膝关节滑膜炎发生发展的作用。方法建立大鼠骨关节炎滑膜增生模型,关节腔内分别加入注射生理盐水和9-菲酚,HE染色观察滑膜炎严重程度。利用RT-PCR、Weste... 详细信息

通过大鼠膝关节腔内注射9-菲酚来抑制滑膜细胞中TRPM4通道蛋白的表达,了解TRPM4在膝关节滑膜炎发生发展的作用。方法建立大鼠骨关节炎滑膜增生模型,关节腔内分别加入注射生理盐水和9-菲酚,HE染色观察滑膜炎严重程度。利用RT-PCR、Western-blot测定各组中IL-1、IL-6水平的表达。结果在大鼠膝关节中,TRPM4通道蛋白随滑膜炎严重程度的增加其表达增多。加入9-菲酚后,膝关节滑膜炎减轻,IL-1、IL-6 表达明显减少。差别有统计学意义(P0.05)。结论加入抑制剂9-菲酚后,大鼠TRPM4的通道关闭,膝关节滑膜炎症减轻,表明TRPM4的表达对滑膜炎的发生起促进作用。9-菲酚可抑制TRPM4的表达来减少膝关节滑膜炎的发生。

关键词： 9-菲酚滑膜炎 TRPM4

TRPM4通道蛋白的表达与小鼠骨关节炎发生的作用研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第12期 0159-0162页

作者：李翱翔姜静静魏人前广州医科大学附属第六医院·清远市人民医院骨科二区广东清远511500

通过9-Phenanthrol抑制TRPM4通道的表达,来观察其是否参与了小鼠膝关节炎的发生。方法建造骨关节炎小鼠模型,分为2组,每组12只,一组加入TRPM4的抑制剂9-Phenanthrol,一组加入生理盐水,另外一组正常组12只小鼠作为对照。收集各组小鼠膝... 详细信息

通过9-Phenanthrol抑制TRPM4通道的表达,来观察其是否参与了小鼠膝关节炎的发生。方法建造骨关节炎小鼠模型,分为2组,每组12只,一组加入TRPM4的抑制剂9-Phenanthrol,一组加入生理盐水,另外一组正常组12只小鼠作为对照。收集各组小鼠膝关节软骨,切片,番红O染色,OARSI评分系统评价软骨破坏程度。RT-PCR和western-blot检测各组中TRPM4、IL-1、IL-6基因水平、蛋白水平的表达,tunnel染色明确各组软骨细胞凋亡水平的变化。结果提示:与正常小鼠膝关节软骨相比,关节炎组中关节软骨破坏加重,TRPM4蛋白表达增加,软骨细胞凋亡增多;与生理盐水组相比,抑制剂组的软骨破坏相对轻,IL-1、IL-6的表达减少,软骨细胞凋亡数目减少,关节软骨的破坏程度减轻。结论软骨细胞中TRPM4参与了关节炎的发生,抑制其表达可降低小鼠关节炎的破坏程度。

关键词： 9-Phenanthrol 骨关节炎 IL-1 IL-6 TRPM4

TRPM4通道抑制剂9-菲酚对OA软骨细胞作用的研究

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TRPM4通道抑制剂9-菲酚对OA软骨细胞作用的研究

作者：刘笑君山西医科大学

学位级别：硕士

目的:1、研究TRPM4（transient receptor potential M4）信号通道抑制剂—9-菲酚（9-Phenanthrenol）能否影响骨关节炎的进展,通过对软骨细胞的肥大分化的抑制及减少软骨组织的降解,实现缓解骨关节炎的目的;2、研究9-菲酚对软骨细胞凋... 详细信息

目的:1、研究TRPM4（transient receptor potential M4）信号通道抑制剂—9-菲酚（9-Phenanthrenol）能否影响骨关节炎的进展,通过对软骨细胞的肥大分化的抑制及减少软骨组织的降解,实现缓解骨关节炎的目的;2、研究9-菲酚对软骨细胞凋亡的影响,为能否治疗骨关节炎提供实验依据。方法:1、选取行膝关节置换手术截下的骨关节炎（OA）患者的胫骨平台关节软骨,提取软骨细胞进行培养2、软骨细胞均分为6组,一组不加药作为对照组,其余分别加入不同量的9-菲酚使其浓度分别为5×10-6mol/l、l×10-5 mol/l、2×10-5mol/l、4×10-5 mol/l、8×10-5 mol/l。3、于9-菲酚干预1天培养后细胞进行RT-qPCR检测,检测指标为软骨细胞肥大指标MMP-13、Runx-2及软骨代谢相关指标Aggrecan、COL II;4、于9-菲酚干预1天培养后采用TUNEL染色荧光显微镜检测及Annexin V和7-AAD标记流式细胞仪检测9-菲酚对OA软骨细胞凋亡的影响情况。结果:1、9-菲酚通过抑制TRPM4离子通道对OA软骨细胞肥大分化和代谢影响的RT-qPCR结果:9-菲酚组在8×10-5 mol/l浓度时软骨细胞AGG较空白对照组表达水平显著降低（P＜0.05）,其余浓度下均有下降趋势。同时9-菲酚组在8×10-5 mol/l浓度时软骨细胞COLII相对照组显著增高（P＜0.05）且除5×10-6mol/l组其它组较对照组均有上升趋势,故无法判断9-菲酚对软骨细胞代谢的影响;而软骨细胞肥大指标Runx-2、MMP13的mRNA较对照组表达水平有升高趋势,可见在mRNA水平上,9-菲酚可能促进软骨细胞肥大。2、9-菲酚对OA软骨细胞凋亡的影响:TUNEL染色荧光显微镜检测软骨细胞凋亡率发现,9-菲酚浓度为2×10-5mol/l组较对照组凋亡率明显下降（P＜0.05）,其它浓度组与对照组比较均无统计学意义,但均有凋亡率下降的趋势。Annexin V和7-AAD标记流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率发现,9-菲酚浓度为1×10-5mol/l、2×10-5mol/l、4×10-5mol/l时较对照组凋亡率均有所下降（P＜0.05）,而在另外两组有下降趋势。结论:1、9-菲酚能促进OA软骨细胞的肥大分化。2、9-菲酚能抑制OA软骨细胞的凋亡,在OA治疗方面具有积极意义。

关键词：骨关节炎软骨细胞 TRPM4 9-菲酚细胞肥大凋亡

TRPM4在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

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TRPM4在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

作者：王富生中南大学

学位级别：硕士

目的：TRPM4是细胞膜上的一种非选择性阳离子通道,在胰腺、心脏、前列腺、胎盘、脾脏、肺、肾脏、骨骼肌、免疫细胞、胸腺、血管、小肠及结肠中广泛表达,TRPM4可以被细胞内钙离子浓度增高激活,引起细胞膜去极化和钙离子内流,藉此参与细... 详细信息

目的：TRPM4是细胞膜上的一种非选择性阳离子通道,在胰腺、心脏、前列腺、胎盘、脾脏、肺、肾脏、骨骼肌、免疫细胞、胸腺、血管、小肠及结肠中广泛表达,TRPM4可以被细胞内钙离子浓度增高激活,引起细胞膜去极化和钙离子内流,藉此参与细胞的各项生命活动。为了阐明TRPM4在人类原发性肝细胞癌形成过程中的作用,本实验检测TRPM4在原发性肝细胞癌样本组织中的表达并分析其临床意义,初步阐述TRPM4在原发性肝细胞癌形成过程中的作用。方法：搜集中南大学湘雅二医院肝胆胰外科自2008年到2010年6月行肝叶切除术的56例患者的病理资料和临床资料,该56例患者术后病理检查均确诊为原发性肝细胞癌,采用免疫组织化学的方法检测TRPM4在原发性肝细胞癌中的表达情况,结合阳性表达率及染色强度及对各指标的表达情况进行分析其与临床病例特征（如肿瘤的数目、肿块大小、分化程度、有无门静脉侵犯）之间的关系,并采用RT-qPCR进一步验证免疫组织化学的实验结果。实验结果： 1.免疫组织化学实验结果：56例原发性肝细胞癌的非癌组织中,TRPM4高表达的44例（78.6%）,在其相对应的癌组织中TRPM4高表达的有31例（55.4%）。 2. RT-qPCR实验结果：TRPM4的信使RNA （mRNA）的定量在肝硬化组织和中高分化肝细胞癌组织中较高,分别为慢性肝炎组织的38.2倍和36.5倍,而在低分化肝细胞癌组织中较低,为慢性肝炎组织的1.3倍。 3.临床病理评估：TRPM4的高表达与临床病理特征中的肝细胞癌分化程度（P=0.004）两者之间存在显著性的相关。结论：（1）TRPM4在原发性肝细胞癌的非癌组织和癌组织中均有不同程度的表达;（2）TRPM4的高表达与肝癌临床病理特征中的肿瘤细胞分化程度两者之间存在显著性的相关。因此我们的研究结果表明：TRPM4可能在原发性肝细胞癌的发生过程中起到了一定作用。

关键词：原发性肝细胞癌 TRPM4 肿瘤发生