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trim21-dependent ultrasmall chiral gold nanoparticles for preventing microglia senescence against Alzheimer's disease

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Science China Chemistry 2024年第4期67卷 1360-1372页

作者： Meiru Lu Changlong Hao Liguang Xu Feng Yu Jiwei Jiang Yanli Wang Jun Xu Hua Kuang Chuanlai Xu Maozhong Sun International Joint Research Laboratory for Biointerface and Biodetection State Key Laboratory of Food Science and ResourcesSchool of Food Science and TechnologyJiangnan UniversityWuxi 214122China Institute of Life Sciences Jiangsu UniversityZhenjiang 212013China Department of Neurology Beijing Tiantan HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100050China National Clinical Research Center for Neurological Diseases Beijing 100070China

Tripartite motif 21(trim21)is an E3 ubiquitin ligase that shows great promise for protein degradation through ***,ultrasmall chiral gold nanoparticles(D-or L-NPs)modified by D-or L-glutathione ligands were *** conjugated with an NLR family pyrin domain-containing protein 3(NLRP3)antibody(D-NP-a NLRP3 or L-NP-a NLRP3),DNP-a NLRP3 showed effective delivery efficiency of the antibody into microglia and prevented Aβ-mediated microglia senescence,and p16^(ink4a),a marker of senescence,in the microglia was reduced by 90.3%±7.8% while L-NP-a NLRP3 decreased by 48.01%±3.1%.Mechanistic investigations revealed that the D-NP-a NLRP3((1.5±0.3)×10^(7)M^(-1))exhibited sixteen-fold larger binding affinity to transmembrane glycoprotein SLC3A2 than L-type((9.5±2.7)×10^(5)M^(-1)),which led to a high efficiency of antibody delivery and trim21-dependent NLRP3 ***,the blood-brain barrier(BBB)-crossing ability of chiral NP-a NLRP3 as well as NLRP3 degradation was demonstrated in *** APP/PS1 Alzheimer's disease(AD)model mice experiments exhibited a reduction of 89.7%±6.8% for the NLRP3 protein and 84.2±7.5% for p16^(ink4a)following the intravenous administration of D-NP-a NLRP3 once a week for 60 ***,the levels of the AD markers Aβ and phosphorylatedTau in the brains were reduced by 86.2%±8.2% and 81.6%±9.1%;these were 2.1-fold and 1.9-fold higher than those treated with L-NP-a NLRP3,*** studies provide a method to rescue AD-like pathologies and prevent senescence.

关键词： chiral gold nanoparticles amyloid-β NLRP3 trim21 senescence Alzheimer's disease

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trim21通过与ZSWIM1相互作用调节肺腺癌细胞的增殖和迁移

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中国肺癌杂志 2024年第5期27卷 337-344页

作者：陈露璇连琼华章贵吴嘉耀曾观娣高学娟暨南大学肿瘤分子生物学教育部重点实验室生物活性药物分子与成药性优化全国重点实验室暨南大学生命与健康工程研究院广州510632 暨南大学附属广东省第二人民医院传统医学与运动伤害康复研究所广州510317

背景与目的肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)是一种致病率和死亡率都极高的癌症,尽管现代医学的治疗手段在不断进步,但患者的5年生存率仍不高,因此我们想通过探究LUAD发生发展的分子机制进而鉴定新的治疗靶标。我们前期的研究报道了Z... 详细信息

背景与目的肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)是一种致病率和死亡率都极高的癌症,尽管现代医学的治疗手段在不断进步,但患者的5年生存率仍不高,因此我们想通过探究LUAD发生发展的分子机制进而鉴定新的治疗靶标。我们前期的研究报道了ZSWIM1(zinc finger SWIM-type containing 1)是一个促进LUAD细胞增殖、迁移、侵袭的新蛋白。本研究将着重探究E3泛素连接酶trim21(tripartite-motif protein 21)对ZSWIM1在LUAD细胞中促增殖、迁移功能的影响。方法利用蛋白免疫共沉淀技术(co-immunoprecipitation,Co-IP)和免疫荧光技术(immunofluorescence, IF)验证trim21和ZSWIM1之间的相互作用和共定位;利用MTT和Transwell实验检测trim21及trim21、ZSWIM1协同对LUAD增殖、迁移的影响;利用蛋白印迹实验(Westernblot,WB)检测trim21和ZSWIM1对LUAD细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)标志物表达的影响;利用Co-IP联合WB检测trim21对ZSWIM1泛素化的影响。结果 trim21与ZSWIM1存在相互作用和共定位。trim21的上调可以抑制LUAD细胞的增殖和迁移。过表达trim21能够降低ZSWIM1对LUAD细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用,并逆转ZSWIM1对E-cadherin和Vimentin表达的影响。敲低trim21则可以增强ZSWIM1对LUAD细胞增殖和迁移的促进作用。机制方面,我们发现过表达trim21可明显增强ZSWIM1的泛素化水平,下调ZSWIM1的蛋白表达量。结论 trim21通过结合并促进ZSWIM1的泛素化,进而降低ZSWIM1的蛋白表达,这抑制了ZSWIM1对LUAD细胞增殖、迁移、侵袭表型的促进作用。

关键词：肺肿瘤 trim21 ZSWIM1 增殖迁移

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trim21癌症相关突变对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

TRIM21癌症相关突变对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

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作者：李泽昊吉林大学

学位级别：硕士

乳腺癌作为全球女性中最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率持续居高不下。尽管在乳腺癌的诊断和治疗方面取得了显著进步,但乳腺癌患者的长期生存率仍然面临挑战。因此,深入研究乳腺癌的分子机制,特别是探索促进癌细胞侵袭和迁移的关... 详细信息

乳腺癌作为全球女性中最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率持续居高不下。尽管在乳腺癌的诊断和治疗方面取得了显著进步,但乳腺癌患者的长期生存率仍然面临挑战。因此,深入研究乳腺癌的分子机制,特别是探索促进癌细胞侵袭和迁移的关键因子,对于开发新的治疗策略具有重要意义。E-cadherin的下调和N-cadherin的上调是上皮-间质转化（Epithelial to mesenchymal transition,EMT）过程的重要标志。Snail作为上皮-间质转化的重要调节因子,能够改变癌细胞的特性,对于癌细胞的行为有着重要的影响。trim21通过介导Snail的泛素化和蛋白酶体降解来抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭。团队前期研究已经证实trim21 B-box结构域与EMT核心驱动因子Snail相互作用,且trim21 R64Q突变与乳腺癌MDA-MB-231、T47D细胞迁移和侵袭相关,导致trim21对Snail的泛素化降解消失,从而改变乳腺癌进程。本研究旨在发现更多的乳腺癌潜在治疗靶点,为多种类型乳腺癌的治疗提供新方向。首先,在TCGA数据库中筛选,发现trim21 B-box结构域上,除了已经研究的R64Q突变,还存在104号谷氨酸向天冬氨酸的突变（E104D）。随后,通过trim21、trim21E104D和trim21E104D-R64Q与Snail的免疫共沉淀可以观察到E104D突变和E104D-R64Q双突变均会导致trim21与Snail的相互作用消失。同时,通过共转后对Snail降解、半衰期的测定,以及针对泛素化程度的检测,证实E104D突变和E104D-R64Q双突变均会导致trim21对Snail的泛素化降解功能消失。利用慢病毒感染在乳腺癌MCF-7细胞系中构建trim21及相关突变的过表达,对EMT相关标志物进行免疫沉淀及RT-q RCR检测,显示突变导致EMT的进程无法被抑制。细胞划痕愈合实验及Transwell细胞侵袭实验显示,与携带野生型trim21的MCF-7细胞相比,携带trim21突变体的MCF-7细胞有着更强的迁移和侵袭能力。小鼠异种移植瘤实验中,携带trim21突变体的MCF-7对邻近的肌纤维显示出更强的浸润能力,且在上述实验中,MCF-7细胞中E104D突变效果优于R64Q。此外,本研究还对Snail和trim21相互作用的关键结构域进行了进一步探究,发现Snail蛋白的C端锌指结构域,是Snail与trim21结合的结合结构域,为后续进深入探究trim21和Snail的分子机制提供依据。

关键词：上皮-间质转化乳腺癌泛素化突变 trim21 Snail

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E3泛素连接酶trim21介导猴痘病毒膜蛋白A18L泛素化降解的机制研究

E3泛素连接酶TRIM21介导猴痘病毒膜蛋白A18L泛素化降解的机制研究

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作者：王建吉林大学

学位级别：硕士

猴痘一直以来被视为非洲的一种罕见的人畜共患传染病,在中非和西非的部分国家会诊断出零星的猴痘病例。在过去20年间,猴痘也曾数次小规模爆发于非洲以外区域国家。但2022年多个国家相继报道了猴痘确诊病例,范围横跨美洲、欧洲、亚洲和非... 详细信息

猴痘一直以来被视为非洲的一种罕见的人畜共患传染病,在中非和西非的部分国家会诊断出零星的猴痘病例。在过去20年间,猴痘也曾数次小规模爆发于非洲以外区域国家。但2022年多个国家相继报道了猴痘确诊病例,范围横跨美洲、欧洲、亚洲和非洲,在非洲流行区域以外出现了前所未有的全球传播。随着确诊病例持续上升,猴痘已经成为了全球较为关注的公共卫生问题。猴痘病毒(Mpox virus,MPXV)是引起猴痘的病原体,研究猴痘病毒与宿主相互作用的机制具有重要的意义和临床实用价值。目前针对猴痘病毒的研究主要集中在流行病学、临床检验检测、防治等方面,对于猴痘的预防和治疗药物主要来源于针对天花病毒药物,没有针对该病毒的特异性治疗药物。所以急需重视MPXV与宿主的相互作用关系的研究,为猴痘的有效预防、研制抗病毒药物提供新的理论依据。泛素化修饰可以调控多种病毒的复制,但与猴痘病毒的关系一直未被研究。我们参考了对猴痘病毒及痘苗病毒研究的已发表成果,选出了部分在猴痘病毒生命周期中具有重要作用的膜蛋白。为了探究猴痘病毒膜蛋白同泛素-蛋白酶体系统的关系,我们首先构建了部分病毒膜蛋白的真核表达质粒。在HEK293T细胞中过表达这些质粒,同对照组相比较,使用蛋白酶体抑制剂MG132处理的细胞中病毒膜蛋白A18L的表达水平显著增加。同时,在HEK293T细胞中共转染病毒蛋白质粒和泛素沉默(Ub-KO)质粒后我们发现,同对照组相比,泛素分子沉默后病毒蛋白A18L表达水平明显增加。结合这两个实验,我们认为猴痘病毒膜蛋白A18L受泛素-蛋白酶体调控。我们的研究集中在病毒形态发生过程中发生作用的蛋白。A18L蛋白与痘苗病毒的A17L蛋白高度同源,是病毒早期阶段形态变化过程所必需的蛋白,我们对A18L蛋白做了进一步的研究。通过免疫共沉淀结合质谱分析发现多种与MPXV A18L蛋白相互作用的因子DHX9、HSPA6、CDK1、DDB1、trim21、UBL4A、AMFR以及蛋白酶体亚基等。在这些因子中只有DDB1、trim21、UBL4A、AMFR以及蛋白酶体亚基是在泛素过程中发挥作用的蛋白。通过si DDB1、si trim21介导的基因沉默以及过表达UBL4A,我们发现在si trim21介导的基因沉默细胞中A18L蛋白的表达得到了明显的恢复,UBL4A对其没有影响。相反,在si DDB1细胞中也没有看到A18L蛋白表达水平的恢复。trim21蛋白是trim家族中的一员,其作为E3泛素连接酶在抗病毒天然免疫中发挥了重要作用。trim21作为抗病毒因子与猴痘病毒的研究还未曾报道。本实验探究E3泛素连接酶trim21是否可以介导MPXV A18L蛋白泛素化使其降解。我们将trim21与A18L质粒在HEK293T细胞中共转染后,Western blot实验表明trim21以剂量依赖的方式介导A18L蛋白的下调。我们通过CRISPR-Cas9技术构建了trim21基因敲除的HEK293T细胞系。在trim21基因敲除的细胞系中单独转染A18L,结果表明trim21敲除之后可以恢复A18L蛋白的表达,进一步说明了trim21对A18L蛋白的作用。为了验证trim21和A18L是否存在相互作用,我们通过在HEK293T细胞中共转染这两种质粒,免疫共沉淀实验表明A18L与trim21存在相互作用。同时,明确了PRY和SPRY是trim21与A18L相互作用的关键结构域,我们也验证了PRY和SPRY两个结构域缺失之后对A18L泛素化的影响,结果表明,与野生型相比PRY和SPRY缺失后介导的A18L泛素程度明显减弱。为了探究trim21介导A18L的泛素化类型以及泛素化关键位点,我们通过共转染降解实验和IP实验,鉴定了trim21是通过K48泛素化类型介导A18L蛋白的下调,A18L蛋白的Lys166是trim21泛素化的关键位点。综上所述,MPXV A18L通过泛素-蛋白酶体途径降解,trim21可以介导A18L蛋白K48泛素化并促进其降解。本研究为研发针对MPXV感染的特异性新药提供了潜在靶点。

关键词： trim21 MPXV A18L 蛋白酶体

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神经胶质瘤U251细胞中trim21和trim8之间相互作用研究

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医学分子生物学杂志 2024年第3期21卷 187-195页

作者：王琳刘雪梅李慧黄皑雪赵越超肖参高波邵宁生军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所北京市100850

目的探讨trim21和trim8在神经胶质瘤U251细胞中的相互作用机制及其生物学效应。方法在U251细胞中分别过表达和敲低trim21或trim8,通过蛋白质印迹和RT-PCR法检测两者的蛋白和mRNA表达水平。利用免疫荧光实验分析trim21和trim8的亚细胞定... 详细信息

目的探讨trim21和trim8在神经胶质瘤U251细胞中的相互作用机制及其生物学效应。方法在U251细胞中分别过表达和敲低trim21或trim8,通过蛋白质印迹和RT-PCR法检测两者的蛋白和mRNA表达水平。利用免疫荧光实验分析trim21和trim8的亚细胞定位。通过免疫共沉淀实验验证trim21和trim8之间的相互作用。应用胞内泛素化实验检测trim21和trim8的泛素化修饰。蛋白酶体抑制剂MG-132用于抑制蛋白酶体活性。利用流式细胞术检测U251细胞凋亡。结果在U251细胞中,trim21负向调控trim8蛋白水平,反之,trim8也可以负向调控trim21蛋白水平,并且都能抑制细胞凋亡。机制研究显示,U251细胞中trim21和trim8之间存在相互结合,两者相互调控是通过催化泛素化介导的泛素-蛋白酶体依赖性降解途径实现的。结论U251细胞中trim21与trim8可以通过泛素化修饰促进泛素-蛋白酶体依赖性的蛋白质降解相互负向调控,提示体内细胞正常生长分化需要trim21-trim8之间蛋白质水平的相对稳态,也即可能存在E3泛素连接酶蛋白稳态,稳态失衡可能与肿瘤的发生发展密切相关。

关键词： trim21 trim8 相互调控泛素化 E3稳态胶质瘤

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胞质TGM2依赖GTP抑制trim21介导的STAT1泛素化降解促进胃癌恶性进展

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癌症 2024年第4期43卷 150-176页

作者：张璐李清雅杨静徐鹏晖宣哲徐江浩徐泽宽南京医科大学第一附属医院普外科南京210029 江苏省肿瘤生物标志物及防治重点实验室南京医科大学肿瘤个体化医学协同创新中心江苏南京211166

背景与目的既往研究提示谷氨酰胺转胺酶2(transglutaminase 2,TGM2)是多种肿瘤的潜在治疗靶点,但其在胃癌中的作用及机制尚未明确。本研究中,我们试图揭示TGM2在胃癌中的作用和相关机制。方法分析TGM2在胃癌细胞和组织中的表达水平,并... 详细信息

背景与目的既往研究提示谷氨酰胺转胺酶2(transglutaminase 2,TGM2)是多种肿瘤的潜在治疗靶点,但其在胃癌中的作用及机制尚未明确。本研究中,我们试图揭示TGM2在胃癌中的作用和相关机制。方法分析TGM2在胃癌细胞和组织中的表达水平,并通过一系列体内外实验分析TGM2在胃癌中的功能,包括蛋白质印迹、免疫组化、CCK8、集落形成实验、transwell实验、异种移植瘤模型和转移瘤模型。通过基因富集分析、定量PCR和蛋白质印迹筛选TGM2在胃癌中潜在的作用靶标。通过功能损益实验和挽救实验验证TGM2对STAT1的调控作用。通过免疫共沉淀、质谱分析、定量PCR和蛋白质印迹筛选STAT1互作蛋白,并阐明其调控机制。最后,通过突变TGM2和使用TGM2的酶活性调节剂(ZM39923和A23187)以明确TGM2通过何种酶活性促进胃癌恶性进展,并阐明其潜在机制。结果研究结果表明TGM2在胃癌组织中高表达,与病理分级密切相关,其高表达预示患者不良预后。TGM2过表达/敲低能够促进/抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。而敲低/过表达STAT1能够逆转TGM2在胃癌细胞中的作用。进一步分析提示TGM2通过抑制STAT1泛素化/降解促进胃癌恶性进展。trim21被鉴定为胃癌中STAT1的E3泛素连接酶。TGM2通过与GTP结合的酶活性促进trim21和STAT1解离。A23187能够抑制TGM2对STAT1的作用,并在体外和体内实验中逆转TGM2的促肿瘤作用。结论本研究揭示了在胃癌中TGM2调控STAT1的作用和机制,提示TGM2可作为胃癌治疗的潜在靶点,了解TGM2与GTP结合的酶活性有助于开发靶向药物,优化现有治疗策略。

关键词： TGM2 STAT1 trim21 泛素化降解胃癌

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Cytosolic TGM2 promotes malignant progression in gastric cancer by suppressing the trim21-mediated ubiquitination/degradation of STAT1 in a GTP binding-dependent modality

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Cancer Communications 2023年第1期43卷 123-149页

作者： Lu Zhang Qingya Li Jing Yang Penghui Xu Zhe Xuan Jianghao Xu Zekuan Xu Department of General Surgery The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical UniversityNanjingJiangsu 210029P.R.China Jiangsu Key Lab of Cancer Biomarkers Prevention and TreatmentCollaborative Innovation Center for Personalized Cancer MedicineNanjing Medical UniversityNanjingJiangsu 211166P.R.China

Background:Previous studies have revealed the critical role of transglutaminase 2(TGM2)as a potential therapeutic target in cancers,but the oncogenic roles and underlying mechanisms of TGM2 in gastric cancer(GC)are not fully *** this study,we examined the role and potential mechanism of TGM2 in ***:Western blotting,immunohistochemistry,CCK8,colony formation and transwell assays were used to measure TGM2 expression in the GC cells and tissues and to examine the in vitro role of TGM2 in *** and in vivo metastasis experiments were performed to examine the in vivo role of TGM2 in *** set enrichment analysis,quantitative PCR and western blotting were conducted to screen for potential TGM2 targets involved in ***/loss-offunction and rescue experiments were conducted to detect the biological roles of STAT1 in GC cells in the context of ***-immunoprecipitation,mass spectrometry,quantitative PCR and western blotting were conducted to identify STAT1-interacting proteins and elucidate their regulatory *** in TGM2 and two molecules(ZM39923 and A23187)were used to identify the enzymatic activity of TGM2 involved in the malignant progression of GC and elucidate the underlying ***:In this study,we demonstrated elevated TGM2 expression in the GC tissues,which closely related to pathological grade,and predicted poor survival in patients with ***2 overexpression or knockdown promoted(and inhibited)cell proliferation,migration,and invasion,which were reversed by STAT1 knockdown or *** studies showed that TGM2 promoted GC progression by inhibiting STAT1 ubiquitination/***,tripartite motif-containing protein 21(trim21)was identified as a ubiquitin E3 ligase of STAT1 in ***2 maintained STAT1 stability by facilitating the dissociation of trim21 and STAT1 with GTP-binding enzymatic activity.A23187 abolished the role of TGM2 in STAT1 and reversed the pro-tumor role of TGM2 in vitro and

关键词： TGM2 STAT1 trim21 ubiquitination degradation gastric cancer

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trim21可抑制肝癌细胞的侵袭能力:基于泛素化途径降解β-catenin

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南方医科大学学报 2022年第1期42卷 55-62页

作者：张志红朱真如盛海龙孙景苑曹传辉南方医科大学南方医院放疗科广东广州510515

目的探讨trim21基因在肝癌侵袭表型中的作用及机制。方法利用siRNA敲低肝癌细胞MHCC 97H,HCC LM3中的trim21、β-catenin基因,将肝癌细胞分为对照组:转染对照siRNA;trim21敲低组:转染sitrim21 RNA;CTNNB1敲低组:转染siCTNNB1 RNA;双敲低... 详细信息

目的探讨trim21基因在肝癌侵袭表型中的作用及机制。方法利用siRNA敲低肝癌细胞MHCC 97H,HCC LM3中的trim21、β-catenin基因,将肝癌细胞分为对照组:转染对照siRNA;trim21敲低组:转染sitrim21 RNA;CTNNB1敲低组:转染siCTNNB1 RNA;双敲低组:共转染sitrim21 RNA及siCTNNB1 RNA。利用Western blotting验证敲除效率及相关通路的激活或抑制情况。通过Transwell侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭性。通过尾静脉注射敲低trim21的HCC LM3细胞构建裸鼠肺转移模型以观测其肺转移能力。在HEK 293细胞中过表达trim21,将HEK 293细胞分为对照组:加入转染试剂;过表达组:转染flagtrim21。并利用Co-IP检测trim21蛋白与β-catenin的相互作用及泛素化水平。生信分析TCGA数据库中CTNNB1^(high)trim21^(high)和CTNNB1^(high)trim21^(low)两种亚型肝癌的预后。结果敲低trim21可以显著增强肝癌细胞MHCC 97H和HCC LM3的侵袭能力(Ptrim21可通过泛素化蛋白酶体途径降解β-catenin以减少其入核,进而降低肝癌细胞的的侵袭性(Ptrim21表达水平降低使肝癌细胞中Wnt信号通路激活,最终使CTNNB1^(high)trim21^(high)亚型肝癌患者的生存预后明显优于CTNNB1^(high)trim21^(low)亚型肝癌患者(Ptrim21能通过泛素化途径降解β-catenin来抑制肝癌细胞的侵袭性,这可能导致了CTNNB1^(high)trim21^(low)肝癌患者预后较差。

关键词：肝癌侵袭性 trim21 β-catenin 泛素化预后

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trim21通过TLR9/NF-κB通路参与SLE发病的作用

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中国皮肤性病学杂志 2023年第8期37卷 884-892页

作者：王锐付萍昆明医科大学第二附属医院风湿免疫科云南昆明650101 云南省第三人民医院云南昆明650011

目的探索trim21在SLE发病中的作用。方法选取昆明医科大学第二附属医院风湿免疫科2020年10月—2020年12月间的35例SLE患者(缓解期17例、活动期18例)及健康对照18例。用qPCR检测受试者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体(TLR)9、E3泛... 详细信息

目的探索trim21在SLE发病中的作用。方法选取昆明医科大学第二附属医院风湿免疫科2020年10月—2020年12月间的35例SLE患者(缓解期17例、活动期18例)及健康对照18例。用qPCR检测受试者外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体(TLR)9、E3泛素连接酶trim21、NF-κB和干扰素调节因子8(IRF8)的mRNA表达量,ELISA实验检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-17A的水平;利用基因重组技术构建trim21下调表达的重组质粒载体,用慢病毒包装(sh-trim21)分别感染THP-1/Jurkat细胞,筛选出稳定细胞系作为研究组,空载质粒转染的THP-1/Jurkat细胞作为对照(NC组),用TLR9激动剂刺激两组细胞,用qRT-PCR分别检测刺激前后细胞中IκBα和p65蛋白、NF-κB mRNA和IRF8 mRNA表达水平;ELISA实验检测上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-17A的表达;用细胞因子IFN-γ/TNF-α分别处理两组细胞,刺激后8 h和24 h后检测细胞内trim21 mRNA表达水平。结果缓解期、活动期SLE患者PBMC中TLR9、trim21和NF-κB表达量明显高于健康对照组(P0.05);trim21 mRNA表达量在抗trim21和抗ds-DNA抗体阳性与阴性组之间差异无统计学意义;SLE组trim21 mRNA表达量与白细胞计数呈正相关;在抗trim21抗体阳性SLE组,trim21 mRNA表达量与血清中IFN-γ、TNF-α的水平呈正相关。未给予TLR9激动剂刺激时,在THP-1/Jurkat细胞中,sh-trim21组与NC组比较,IκBα降解增多,核内p65增多,NF-κB mRNA和IRF8 mRNA表达水平升高(Ptrim21组与NC组比较,IκBα及核内p65变化不明显,NF-κB mRNA转录水平没有显著性增强,而IRF8 mRNA水平较刺激前明显增高,且sh-trim21组明显高于NC组。用IFN-γ、TNF-α处理THP-1/Jurkat细胞8 h和24 h后,sh-trim21及NC组trim21的表达较刺激前均显著上调(Ptrim21参与SLE发病过程;在生理状态下,trim21可抑制NF-κB活化,降低其下游细胞因子水平;IFN-γ、TNF-α可诱导trim21表达,即使在trim21被敲低的状况下;trim21可能通过IRF8参与SLE发病过程。

关键词：系统性红斑狼疮 trim21 核因子-κB Toll样受体9 干扰素

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YWHAZ Binds to trim21 but Is Not Involved in trim21-stimulated Osteosarcoma Cell Proliferation

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Biomedical and Environmental Sciences 2018年第3期31卷 186-196页

作者： ZENG Qing Zhong LIU Wan Ting LU Jun Lei LIU Xiao Hui ZHANG Yun Fang LIU Lang Xia GAO Xue Juan Key Laboratory of Functional Protein Research of Guangdong Higher Education Institutes Institute of Life and Health EngineeringJinan University Center of Kidney Disease Huadu District People's HospitalSouthern Medical University

Objective Osteosarcoma is the most common type of malignant bone tumor in children and adolescents. The role of E3 ligases in tumorigenesis is currently a focus in tumor research. In the present study, we investigated the role of the E3 ligase tripartite motif 21（trim21） in osteosarcoma cell *** 3-（4, 5-dimethylthiazol-2-yl）-2, 5-diphenyltetrazolium bromide（MTT） assays were used to assess osteosarcoma cell viability. U2-OS cells stably carrying a recombinant lentivirus expressing tetracycline-regulated trim21 were screened. Co-immunoprecipitation was coupled with LCMS/MS analysis to identify novel interacting partners of trim21. Co-immunoprecipitation and bimolecular fluorescence complementation（BIFC） were performed to validate the interactions between trim21 and its novel partner YWHAZ. A trim21-ΔRING construct was generated to test the effects of trim21 ligase activity on *** trim21 positively regulated osteosarcoma cell proliferation. Overexpression of trim21 enhanced osteosarcoma cell tolerance toward various stresses. YWHAZ protein was identified as a novel interacting partner of trim21 and its expression levels were negatively regulated by trim21. The RING domain of trim21 was required for trim21 negative regulation of YWHAZ expression. However,overexpression of YWHAZ did not affect positive regulation of osteosarcoma cell proliferation by *** Our results further clarify the molecular mechanisms underlying the pathogenesis of osteosarcoma.

关键词： trim21 YWHAZ Osteosarcoma Proliferation

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