检索结果-南通市图书馆

Cellular & Molecular Immunology 2022年第10期19卷 1168-1184页

作者： Xuyuan Wang Li Jiang Guangwen Wang Wenjun Shi Yuzhen Hu Bo Wang Xianying Zeng Guobin Tian Guohua Deng Jianzhong Shi Liling Liu Chengjun Li Hualan Chen College of Veterinary Medicine Gansu Agricultural UniversityLanzhou730070China Guangdong Laboratory for Lingnan Modern Agriculture Guangzhou510642China State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Veterinary Research InstituteChinese Academy of Agricultural SciencesHarbin150069China

As a major component of the viral ribonucleoprotein(vRNP)complex in influenza A virus(IAV),nucleoprotein(NP)interacts with isoforms of importinαfamily members,leading to the import of itself and vRNP complex into the nucleus,a process pivotal in the replication cycle of *** this study,we found that BinCARD1,an isoform of Bcl10-interacting protein with CARD(BinCARD),was leveraged by IAV for efficient viral ***1 promoted the nuclear import of the vRNP complex and newly synthesized NP and thus enhanced vRNP complex ***,we found that BinCARD1 interacted with NP to promote NP binding to importinα7,an adaptor in the host nuclear import ***,we also found that BinCARD1 promoted RIG-I-mediated innate immune signaling by mediating Lys63-linked polyubiquitination of traf3,and that TBK1 appeared to degrade *** showed that BinCARD1 was polyubiquitinated at residue K103 through a Lys63 linkage,which was recognized by the TBK1-p62 axis for autophagic ***,our data demonstrate that IAV leverages BinCARD1 as an important host factor that promotes viral replication,and two mechanisms in the host defense system are triggered—innate immune signaling and autophagic degradation—to mitigate the promoting effect of BinCARD1 on the life cycle of IAV.

关键词： Influenza A virus BinCARD1 traf3 TBK1 p62

Profiling of miRNAs in porcine Sertoli cells

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

Journal of Animal Science and Biotechnology 2021年第1期12卷 236-249页

作者： Xiaoxu Chen Yi Zheng Xueliang Li Qiang Gao Tongying Feng Pengfei Zhang Mingzhi Liao Xiu’e Tian Hongzhao Lu Wenxian Zeng College of Biological Science and Engineering Shaanxi University of TechnologyHanzhong 723001China Key Laboratory of Animal Genetics Breeding and Reproduction of the Ministry of AgricultureCollege of Animal Science and TechnologyNorthwest A&F UniversityYangling 712100ShaanxiChina College of Life Science Northwest A&F UniversityYangling 712100ShaanxiChina.

Background: Sertoli cells(SCs) create a specialized environment to support and dictate ***(miRNAs), a kind of ~ 22 nt small noncoding RNAs, have been reported to be highly abundant in mouse SCs and play critical roles in spermatogenesis. However, the miRNAs of porcine SCs remain largely ***: We isolated porcine SCs and conducted small RNA sequencing. By comparing miRNAs in germ cells, we systematically analyzed the miRNA expression pattern of porcine SCs. We screened the highly enriched SC miRNAs and predicted their functions by Gene Ontology analysis. The dual luciferase assay was used to elucidate the regulation of tumor necrosis factor receptor(TNFR)-associated factor 3(traf3) by ***: The analysis showed that 18 miRNAs were highly expressed in SCs and 15 miRNAs were highly expressed in germ cells. These miRNAs were predicted to mediate SC and germ cell functions. In addition, ssc-miR-149 played critical roles in SCs by targeting ***: Our findings provide novel insights into the miRNA expression pattern and their regulatory roles of porcine SCs.

关键词： MicroRNAs Pig Sertoli cell Spermatogenesis traf3

Suppression of innate antiviral response by severe acute respiratory syndrome coronavirus M protein is mediated through the first transmembrane domain

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Cellular & Molecular Immunology 2014年第2期11卷 141-149页

作者： Kam-Leung Siu Chi-Ping Chan Kin-Hang Kok Patrick Chiu-Yat Woo Dong-Yan Jin Department of Biochemistry The University of Hong Kong Pokfulam Hong Kong Department of Microbiology The University of Hong KongPokfulam Hong Kong

Coronaviruses have developed various measures to evade innate immunity, We have previously shown that severe acute respiratory syndrome （SARS） coronavirus M protein suppresses type I interferon （IFN） production by impeding the formation of functional traf3-containing complex. In this study, we demonstrate that the IFN-antagonizing activity is specific to SARS coronavirus M protein and is mediated through its first transmembrane domain （TM 1） located at the N terminus. M protein from human coronavirus HKU 1 does not inhibit IFN production. Whereas N-linked glycosylation of SARS coronavirus M protein has no influence on IFN antagonism, TM1 is indispensable for the suppression of IFN production. TM 1 targets SARS coronavirus M protein and heterologous proteins to the Golgi apparatus, yet Golgi localization is required but not sufficient for IFN antagonism. Mechanistically, TM 1 is capable of binding with RIG-I, traf3, TBK1 and IKK~, and preventing the interaction of traf3 with its downstream effectors. Our work defines the molecular architecture of SARS coronavirus M orotein reouired for suooression of innate antiviral re^nnn^e.

关键词： human coronavirus HKU1 innate antiviral response SARS coronavirus traf3 type I interferons

FKBP8负调控RNA病毒早期诱导的Ⅰ型IFN信号通路

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

免疫学杂志 2020年第1期36卷 17-22页

作者：徐杉杉李圣纳侯雯许亮国江西师范大学生命科学学院

目的进一步探究VISA介导的抗病毒信号通路。方法利用免疫共沉淀、免疫印迹、双荧光素报告、qPCR等实验技术检测FKBP8在RLRs信号通路中的作用。结果我们的实验证实FKBP8与VISA、traf3都存在互作,且FKBP8显著地抑制RNA病毒早期诱导的干扰... 详细信息

目的进一步探究VISA介导的抗病毒信号通路。方法利用免疫共沉淀、免疫印迹、双荧光素报告、qPCR等实验技术检测FKBP8在RLRs信号通路中的作用。结果我们的实验证实FKBP8与VISA、traf3都存在互作,且FKBP8显著地抑制RNA病毒早期诱导的干扰素启动子IFN-β和核调节因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的活性,并增强病毒的复制。进一步的研究表明FKBP8通过作用于VISA和TBK1而负调控RLR-VISA信号转导;此外,FKBP8通过干扰VISA-traf3的结合而负调节病毒诱导的信号通路。结论FKBP8是RLR抗病毒先天免疫信号通路中的负调控因子。

关键词： VISA FKBP8 traf3 Ⅰ型干扰素

miR-29b-3p促进MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞系的进展研究

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-29b-3p促进MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞系的进展研究

作者：张宝华南理工大学

学位级别：硕士

乳腺癌是女性当中常见的恶性肿瘤,同样也是全球最常见的三种癌症之一。近年来,尽管对癌症研究取得了巨大的进步,但乳腺癌仍然是影响女性健康的一个重大健康问题。三阴性乳腺癌约占所有乳腺癌病例的10-20%,具体表现为一种雌激素受体、孕... 详细信息

乳腺癌是女性当中常见的恶性肿瘤,同样也是全球最常见的三种癌症之一。近年来,尽管对癌症研究取得了巨大的进步,但乳腺癌仍然是影响女性健康的一个重大健康问题。三阴性乳腺癌约占所有乳腺癌病例的10-20%,具体表现为一种雌激素受体、孕酮受体以及人表皮生长因子受体-2均为阴性的乳腺癌,由于缺乏相应的治疗靶点,相比于其他亚型,三阴性乳腺癌发病率高,治疗后的局部复发率、远端转移率较非三阴性乳腺癌高,预后差,因此迫切需要了解乳腺癌发展的机制,寻找到有效的诊断和预后指标及治疗靶点,对改善三阴性乳腺癌的治疗将具有重要意义。miRNA,一种长度大约为19-22nt的单链小分子非编码RNA,占人类基因的3%,调节着约30%的蛋白质编码基因。据报道,miRNA表达水平的异常往往与各种疾病的进展存在着密切关系。miR-29b-3p的表达异常在很多疾病中被发现,但是其在三阴性乳腺癌中的表达以及作用机制尚未有研究报道。研究目的:1、检测三阴性乳腺癌细胞系以及正常乳腺上皮细胞系中miR-29b-3p的表达水平。2、探索miR-29b-3p在三阴性乳腺癌发生发展过程中的作用3、生物信息学预测并鉴定miR-29b-3p的潜在靶基因。4、探索miR-29b-3p对三阴性乳腺癌的作用机制。研究方法:1、提取人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A以及三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231总RNA,通过实时荧光定量PCR检测miR-29b-3p的表达水平情况。2、合成miR-29b-3p mimics以及miR-29b-3p inhibitor并转染,进行功能获得性以及功能缺失性研究。CCK8实验检测转染后对三阴性乳腺癌细胞的细胞活力;细胞克隆形成实验检测转染之后的细胞增殖能力;细胞划痕实验以及Transwell实验检测转染之后细胞的迁移和侵袭能力;Hoechst实验、Tunel实验以及Annexin V-FITC/PI实验检测转染之后细胞的凋亡情况;免疫荧光实验检测转染后对细胞骨架的影响。3、利用生物信息学网站Targetscan以及miRDB预测miR-29b-3p的潜在作用靶点,并使用双荧光素酶报告基因实验加以验证。4、Western blot实验检测miR-29b-3p作用的机制。研究结果:1、miR-29b-3p在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中过表达。三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中miR-29b-3p的表达水平较正常乳腺上皮细胞系MCF-10A高,具有统计学上的显著性差异(P3p inhibitor抑制MDA-MB-231细胞活力以及增殖能力。CCK8实验结果表明,miR-29b-3p inhibitor转染后,细胞的细胞活力较阴性对照组明显降低,且具有显著性差异(P3p mimics能显著促进细胞增殖而miR-29b-3p inhibitor却显示出抑制效果。3、miR-29b-3p促进MDA-MB-231细胞迁移和侵袭。细胞划痕实验以及Transwell实验表明,转染miR-29b-3p inhibitor之后,与阴性对照组对比,细胞的迁移以及侵袭能力都受到了抑制(P3p inhibitor诱导MDA-MB-231细胞凋亡。转染后,与阴性对照组相比较,Hoechst染色实验显示miR-29b-3p inhibitor诱导MDA-MB-231细胞产生凋亡小体;并且在Annexin V-FITC/PI以及Tunel实验当中显示,miR-29b-3p inhibitor使MDA-MB-231细胞凋亡数明显比阴性对照组多,并且检测到Cleaved PARP的产生,说明miR-29b-3p inhibitor可以诱导MDA-MB-231细胞凋亡。5、miR-29b-3p inhibitor影响MDA-MB-231细胞细胞骨架的形成。免疫荧光实验,对细胞骨架中的重要组成成分,α-Tubulin,进行观察,结果显示miR-29b-3p inhibitor使细胞骨架皱缩,而阴性对照组当中细胞骨架完好,说明miR-29b-3p inhibitor影响MDA-MB-231细胞细胞骨架的形成。6、miR-29b-3p靶向traf3。通过构建psi-CHECK2/traf3 3’-UTR wt以及psi-CHECK2/traf3 3’-UTR mt载体,分别与NC,miR-29b-3p mimics,miR-29b-3p inhibitor共转染,随后进行双荧光素酶报告基因实验,结果显示,在psi-CHECK2/traf3 3’-UTR wt中,与阴性对照组相比,miR-29b-3p能与traf3基因3’UTR结合,从而抑制

关键词： miR-29b-3p traf3 三阴性乳腺癌迁移侵袭

NEDD4在CD40信号通路中的作用及其机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

NEDD4在CD40信号通路中的作用及其机制研究

作者：方迪峰中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

NEDD4(Neuronal precursor cell Expressed Developmentally Downregulated 4,神经前体细胞表达的发育下调基因4)蛋白质属于含HECT(Homologous to E6-AP C-Terminus)结构域的泛素E3酶,从酵母到人类高度保守,结构上主要包括N末端的C2结构域,2–4个WW结构域和C末端的HECT结构域,其底物往往含有PY模序(包括LPxY和PPxY)。NEDD4已报道底物包括PTEN、Rap2A、Cbl-b、Gag和NEaC等,生物学功能涉及T细胞成熟、神经发育、病毒出芽释放和膜受体的降解与内化等。本实验室前期工作应用质谱技术鉴定A20细胞中CD40信号复合物的新组分,其中包括NEDD4,而目前未有报道称NEDD4直接参与CD40相关通路的调控。因此,本课题研究了NEDD4在CD40引起的下游通路激活过程中所起的作用以及机制。在HEK293和A20细胞中,通过免疫共沉淀的方法发现NEDD4能与CD40通路的重要介导子traf3发生相互作用,但与traf2之间不存在相互作用,同时NEDD4能明显促进traf3的泛素化,而对traf2的泛素化则没有影响,提示NEDD4可能是traf3的泛素E3酶。通过比较对照细胞和过表达NEDD4的A20细胞,对照细胞和NEDD4瞬时干涉的A20细胞以及对照细胞和NEDD4基因敲除的na?ve B淋巴细胞,发现NEDD4在一定程度上影响CD40信号通路下游蛋白质p38的激活。由于NEDD4基因全身敲除的小鼠胚胎致死,为了能得到NEDD4基因敲除的B淋巴细胞,我们通过胎肝移植的方法重建受体小鼠的免疫系统,成功得到了胎肝嵌合体。分离嵌合体小鼠的na?ve B淋巴细胞,通过PI染色和CFSE染色测定细胞的死亡和增殖,发现NEDD4对细胞的存活和增殖没有影响。用CD43(Ly-48)MicroBeads负选na?ve B淋巴细胞时发现,NEDD4基因敲除的脾脏淋巴细胞中CD43阴性的细胞含量明显增加。提示NEDD4在B细胞的发育及激活过程中可能发挥一定作用。综上所述,本研究结果提示NEDD4通过影响traf3的泛素化参与CD40介导的p38的激活。

关键词： NEDD4 CD40 traf3 泛素化

B细胞刺激因子受体（BAFF-R）的基因克隆、表达与功能研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

B细胞刺激因子受体（BAFF-R）的基因克隆、表达与功能研究

作者：田侠河北大学

学位级别：硕士

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)能调节B细胞的存活、增殖、发育和分化。但是BLyS过量表达会促进B细胞的恶性增殖，导致自身免疫性疾病的发生。BAFF-R是BLyS的专一受体，对于BLyS介导的B细胞存活和成熟是必要的。BAFF-R胞外区与BLyS配体相结合... 详细信息

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)能调节B细胞的存活、增殖、发育和分化。但是BLyS过量表达会促进B细胞的恶性增殖，导致自身免疫性疾病的发生。BAFF-R是BLyS的专一受体，对于BLyS介导的B细胞存活和成熟是必要的。BAFF-R胞外区与BLyS配体相结合，然后在细胞内特异地与下游接头分子traf3相结合，最终激活非经典的NF-κB信号转导途径，从而调节B细胞的一系列功能。而且外源BLyS受体具有清除体内过量BLyS的潜力，所以BAFF-R的功能以及信号转导途径已经成为国内外研究的热点。本论文对BAFF-R的功能进行了以下两方面的研究：1．钓取了BAFF-R的胞外区cDNA序列，将BAFF-R胞外区以GST融合蛋白的形式进行表达;并且对表达宿主菌和诱导温度进行了优化;然后用Western-Blotting鉴定了所表达蛋白是目的蛋白;随后用亲和层析的方法纯化了BAFF-R胞外区蛋白，其纯度在85％以上;最后用MTT的方法检测到BAFF-R胞外区蛋白对BLyS促RA-MOS细胞的增殖有抑制作用。2．钓取了BAFF-R胞内区和traf3-C(traf3 C端稳定区)的cDNA序列，然后利用酵母双杂交的方法研究BAFF-R胞内区和traf3相互作用的分子结合域。将BAFF-R胞内区构建到BD质粒上，将traf3-C构建到AD质粒上，两者共转酵母后有强烈的相互作用。然后构建了11个traf3的突变体，分别在traf3的N端和C端进行缺失突变，随后与BAFF-R胞内区共转酵母。研究结果表明：BAFF-R胞内区N端382—400位氨基酸的螺旋结构区、中间428—463位氨基酸以及C端543—560位18个氨基酸对于traf3与BAFF-R胞内区的结合至关重要。本论文对于BAFF-R功能进行了初步的研究和探讨，BAFF-R胞外区蛋白的获得具有治疗自身免疫性疾病的前景;胞内区与traf3相互作用分子结合域的确定对于探讨下游信号转导机制具有重要的意义。

关键词： BAFF-R 蛋白表达 traf3 分子结合域

卵形鲳鲹TLR21、TLR22及相关基因的克隆与表达分析

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

卵形鲳鲹TLR21、TLR22及相关基因的克隆与表达分析

作者：徐腾广西大学

学位级别：硕士

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)作为一类重要的模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs),主要负责识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs),启动先天免疫系统抵御病原微生物的入侵。TLRs除了启动先天免疫外,还可调节适应性免疫,是连接先天免疫和适应性免疫的桥梁。TLR21和TLR22是TLRs家族的重要成员,主要存在于鸟类、两栖类或鱼类中;traf3和IRAK1是TLRs信号转导通路中的重要分子,在TLRs信号转导级联反应中具有重要作用。卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是我国南方重要的海水养殖经济鱼类,随着养殖规模的不断扩大,病害不时发生,给卵形鲳鲹养殖业带来巨大经济损失。鉴于TLR21、TLR22、traf3和IRAK1在免疫中具有重要功能,本研究采用RACE-PCR和RT-PCR技术克隆了卵形鲳鲹TLR21(TrTLR21)、TrTLR22、Trtraf3和TrIRAK1基因;应用生物信息学分析上述基因的序列特征和蛋白结构;采用荧光定量PCR技术分析上述基因在健康卵形鲳鲹组织中的分布;检测溶藻弧菌、LPS或PolyI:C刺激后上述基因在鳃、脾脏、头肾和肝脏中的免疫应答规律。主要研究成果如下:***21、TrTLR22、Trtraf3 和 TrIRAK1 基因 cDNA全长分别为3184bp、3454bp、2818bp和2564bp。其中,TrTLR21和TrTLR22开放阅读框分别为2931 bp和2880 bp,推定编码976和959个氨基酸。TrTLR21和TrTLR22蛋白均具有信号肽和富含亮氨酸重复基序(leucine-rich repeat,LRR)的胞外结构域、跨膜域和胞内结构域(Toll/IL-1 reporter,TIR),符合TLRs的典型特征,TrTLR21和TrTLR22的LRR基序数目不同,TrTLR21具有4个LRR-TYP基序和14个LRR基序,而TrTLR22有3个LRR-TYP基序,有13个LRR基序和1个LRR-CT基序。氨基酸同源性和系统进化树分析,TrTLR21和TrTLR22氨基酸序列与其它鱼类的氨基酸序列同源性分别在53.1%-81.8%和41.3%-82%之间,均与黄尾鲫(Seriola Lalandi)聚为一枝。TrIRAK1和Trtraf3开放阅读框分别为2247 bp和1788 bp,分别推定编码748和595个氨基酸。TrIRAK1蛋白含有死亡结构域(death domain,DD)和丝氨酸/苏氨酸激酶结构域(Serine/Threonine protein kinases catalytic domain,S-TKc);Trtraf3蛋白具有环指结构域(RING domain)、锌指结构(zinc fingers)、卷曲螺旋结构(coiled-coil region,CCR)和MATH结构域。TrIRAK1和Trtraf3氨基酸序列与其他鱼类氨基酸序列同源性分别在44.7%-76.1%和74.7%-93.9%之间。系统发育树显示TrIRAK1与红笛鲷(Lutjanus sanguineus)亲缘关系最近,Trtraf3和高体鲫(Seriola dumerili)聚为一枝。结果表明,TrTLR21、TrTLR22、Trtraf3和TrIRAK1在物种进化过程中高度保守。***21、TrTLR22、Trtraf3和TrIRAK1在健康卵形鲳鲹的组织中呈组成型表达,但在不同的组织中表达水平具有明显差异。TrTLR21在脾脏中表达量最高,其次为头肾、皮肤、心脏、肠和鳃,在肌肉的表达量最低;TrTLR22在头肾中表达量最高,其次为脾脏、鳃和肠,在心脏的表达最低;TrIRAK1在鳃中表达量最高,其次为皮肤、脑、脾脏、肝脏和头肾,在肌肉的表达最低;Trtraf3在脾脏中表达量最高,其次为肝脏和头肾,在肌肉的表达最低。3.溶藻弧菌、LPS 和 Poly1:C 刺激后,TrTLR21、TrTLR22、Trtraf3和TrIRAK1的表达水平在脾脏、头肾等免疫器官中均呈上调现象,但在不同组织中和不同时间点上调水平存在差异。LPS刺激后,TrTLR21、TrTLR22和TrIRAK1在脾脏中表达水平分别在24 h、6 h和24 h达到峰值,而Trtraf3在鳃中的表达水平在24 h达到峰值。溶藻弧菌刺激后,TrTLR21、TrTLR22和Trtraf3在脾脏表达水平分别在24 h、6 h和12 h达到峰值;TrIRAK1在肝脏中表达水平在12 h达到峰值。polyI:C刺激后,TrTLR21、TrTLR22和TrIR

关键词：卵形鲳鲹 TLR21 TLR22 traf3 IRAK1 表达分析

基于增强子-靶基因映射图谱的胰腺癌遗传易感性研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于增强子-靶基因映射图谱的胰腺癌遗传易感性研究

作者：王璐华中科技大学

学位级别：硕士

目的:全基因组关联研究(Genome-Wide Association Study,GWAS)作为研究复杂疾病遗传易感性的重要方法,已发现多个胰腺癌遗传易感性位点。然而这些易感性位点大部分位于非编码区,难以定位到真正的功能性遗传变异及其靶基因。本研究旨在... 详细信息

目的:全基因组关联研究(Genome-Wide Association Study,GWAS)作为研究复杂疾病遗传易感性的重要方法,已发现多个胰腺癌遗传易感性位点。然而这些易感性位点大部分位于非编码区,难以定位到真正的功能性遗传变异及其靶基因。本研究旨在鉴定全基因组范围内胰腺癌增强子及其靶基因,以便发现功能性遗传变异并开展人群验证和功能实验,从而为胰腺癌遗传易感性的机制解读提供线索。方法:在ENCODE数据库下载染色质转座酶可及性测序(Assay for Transposase Accessible Chromatin with high-throughput sequencing,ATAC-seq)数据、染色质免疫共沉淀测序(Chromatin Immunoprecipitation and high-throughput sequencing,Ch IP-seq)数据和高通量染色质三维构象捕获(High-Through Chromosome Conformation Capture,Hi-C)数据等多种组学数据。采用接触活性模型(Activity-by-Contact Model,ABC model)系统整合以上组学数据,并计算用于定量评估增强子调控效应的模型评分。依据该评分来识别基因组中的增强子及其靶基因,从而建立全基因组胰腺癌增强子-靶基因映射图谱。基于上述图谱中增强子的位置信息识别位于增强子区域的遗传变异,从而获得遗传变异-靶基因映射对。针对增强子遗传变异,采用染色质状态富集分析和转录因子富集分析等功能注释以探究图谱中增强子遗传变异的调控潜能;进行胰腺癌GWAS区域富集分析以探究图谱中增强子遗传变异与胰腺癌易感性的关联。针对靶基因进行一系列功能注释,从而探究图谱中靶基因的潜在生物学功能。为探究图谱中增强子遗传变异与胰腺癌易感性的关联,下载了欧洲人群的基因型和表型数据,数据源自胰腺癌病例对照联盟项目。经基因型填补和质量控制后纳入了4 149例胰腺癌病例和3 785例对照。通过logistic回归进行增强子遗传变异与胰腺癌易感性的关联分析,将关联分析结果P值小于0.05的遗传变异筛选为胰腺癌易感性相关的增强子遗传变异,其中调控作用最强(即调控效应评分最高)的遗传变异为rs2075771。以该位点作为本研究的目的位点来开展进一步研究。在中国独立人群中开展胰腺癌病例对照研究(658例胰腺癌病例和1 087例对照),以进一步验证rs2075771与胰腺癌易感性的关联。针对目的位点rs2075771及靶基因traf3,开展染色质活性区域信号峰、染色质相互作用分析、转录因子预测、共表达分析和差异表达分析等生物信息学数据分析来探索其潜在的生物学功能,并通过一系列功能实验进行验证。为验证rs2075771的调控功能,开展报告基因实验来探究rs2075771对增强子活性状态的影响情况,进行敲降RUNX1的报告基因与逆转录实时定量PCR实验以确定rs2075771对traf3的调控效应是否由转录因子RUNX1介导的。针对靶基因traf3,进行CCK-8细胞增殖实验和克隆形成实验来探索靶基因在胰腺癌中的生物学功能。结果:本研究建立了全基因组尺度上的胰腺癌增强子-靶基因映射图谱。该图谱中含有15 977个活性增强子,9 216个靶基因,共计33 962个增强子-靶基因映射对。针对该图谱中位于增强子的遗传变异进行功能注释,发现这些增强子遗传变异富集在松弛、活跃的染色质区域、转录因子结合区域以及胰腺癌GWAS区域,表明该图谱鉴定的增强子遗传变异具有一定的调控潜能;针对该图谱中的靶基因进行功能注释,发现靶基因富集在癌症相关通路,表明图谱鉴定的靶基因可能具有肿瘤分子生物学功能。结合该图谱和欧洲人群的病例对照研究,识别了2 587个胰腺癌易感性相关遗传变异。这些遗传变异中,rs2075771所处的增强子元件调控作用最强,其靶基因为traf3。进一步在中国独立人群中进行验证,发现与[T]等位基因相比,rs2075771每增加一个[C]等位基因,其胰腺癌风险上升21%(OR=1.21,95%CI=1.05-1.40,P=9.24×10)。我们针对rs2075771的调控功能进行了实验验证:报告基因实验表明rs2075771的风险等位基因[C]显著降低了基因转录活性,敲降RUNX1的报告基因实验和逆转录实时定量PCR实验表明rs2075771[C]等位基因降低靶基因转录活性是由转录因子RUNX1介导的。针对靶基因traf3的生物学功能进行了实验验证:CCK-8细胞增殖实验和克隆形成实验表明traf3的表达增加可以导致胰腺癌细胞增殖能力显著下降。结论:本研究基于多种表观基因组学数据建立了全基因组尺度上的胰腺癌增强子-靶基因映射图谱,以评分的方式定量评估了基因组

关键词：肿瘤分子流行病学胰腺癌遗传易感性增强子 traf3

EB病毒编码的LMP1蛋白通过糖酵解途径影响NK/T细胞淋巴瘤增殖的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

EB病毒编码的LMP1蛋白通过糖酵解途径影响NK/T细胞淋巴瘤增殖的机...

作者：吴博文郑州大学

学位级别：硕士

背景目的NK/T 细胞淋巴瘤(Natural Killer T-Cell Lymphoma,NKTCL)在东亚和拉丁美洲的发病率相对于其他国家较为频繁,在欧美国家较为少见,具体发病原因与地区的关系尚不明确。NKTCL大多数的患者时常伴有EB病毒的感染,所以EB病毒与NKTCL... 详细信息

背景目的NK/T 细胞淋巴瘤(Natural Killer T-Cell Lymphoma,NKTCL)在东亚和拉丁美洲的发病率相对于其他国家较为频繁,在欧美国家较为少见,具体发病原因与地区的关系尚不明确。NKTCL大多数的患者时常伴有EB病毒的感染,所以EB病毒与NKTCL的发生和发展的关系十分密切。目前对于NKTCL的发病机制和原理尚不是特别明确,因此缺乏有效的治疗方案。对于NKTCL来说常规的治疗方法已处于瓶颈状态,免疫治疗最近几年发展的如火如荼已在多种恶性肿瘤中发挥重要的作用。当然针对NKTCL的免疫治疗也在研究中,并且取得了不错的进展,但是免疫检查点的选择仍然值得继续进行研究。细胞的代谢过程在肿瘤发生发展的过程中起着非常重要的作用。所以该研究主要探讨EB病毒编码的致癌蛋白潜伏膜蛋白1(LMP1)对NKTCL在糖酵解代谢中的作用及其作用机制进行了研究。方法1通过代谢组学筛选和鉴定EB病毒阳性NK淋巴瘤细胞(LMP1+)(NKL、NK92)、EB病毒阴性NK淋巴瘤细胞(LMP1-)(YTS、KAI3、SNK6)及正常NK细胞组间差异代谢物和代谢通路,并通过测定代谢物葡糖糖摄取率和乳酸生成率来进行验证。2糖酵解的活性对EB病毒阳性NK淋巴瘤细胞(LMP1+)(NKL、NK92)的细胞增殖、凋亡、药物敏感性的影响。CCK-8实验分别测定NKL和NK92加入糖酵解抑制剂(实验组)和未加糖酵解抑制剂仅加入DMSO(对照组)的细胞OD值,通过OD值在24小时、48小时和72小时的变化描绘出细胞的增殖曲线。采用流式细胞术分别测定实验组(加入糖酵解抑制剂)和对照组细胞的凋亡比例。采用CCK-8实验测定各组细胞OD值并计算吉西他滨(Gem)IC50值,比较各组细胞药物敏感性。3鉴定与LMP1相互结合的候选蛋白分子,筛选对信号通路活性有潜在影响的相互作用蛋白分子。结果1研究提示EB病毒阳性淋巴瘤细胞(NKL、NK92)的糖酵解水平较EB病毒阴性淋巴瘤细胞(YTS、KAI3、SNK6)及正常NK细胞明显升高。其葡萄糖摄取速率、乳酸生成速率均高于EB病毒阴性淋巴瘤细胞和正常NK细胞并且EB病毒阳性NK/T细胞淋巴瘤细胞株吉西他滨(Gem)药物敏感性低于EB病毒阴性NK/T细胞淋巴瘤细胞株。2在EB病毒阳性NK淋巴瘤细胞株(YT、SNK6)培养基内加入糖酵解抑制剂后,肿瘤细胞的增殖能力明显减弱(P3免疫共沉淀联合蛋白质谱分析鉴定了 EB病毒阳性肿瘤细胞(LMP1+)中与LMP1相互作用的蛋白分子,这其中包括traf3、RPL4等可能对下游信号通路产生重要影响的关键蛋白分子。结论1 EB病毒阳性NK/T淋巴瘤细胞糖酵解活性高于EB病毒阴性NK/T淋巴瘤细胞。2抑制糖酵解活性后,NK/T淋巴瘤细胞的增殖能力下降、凋亡增加、药物敏感性增加。3 EB病毒编码的LMP1蛋白可能通过与traf3等分子的结合,影响下游信号通路,进而调控肿瘤细胞的糖酵解。

关键词： NK/T细胞淋巴瘤 LMP1 traf3 糖酵解