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traf-6在人肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖能力的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第1期25卷 36-38,42页

作者：徐灿杨惠洁余爽陈楚鲍依稀重庆医科大学附属第二医院检验科重庆400016

目的探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号转导通路中关键节点蛋白在人肝癌细胞株QGY中的表达及其对QGY细胞增殖能力的影响。方法通过RT-PCR和Western blot检测人正常肝细胞株LO2和QGY细胞株中TLR信号转导通路关键节点mRNA和蛋... 详细信息

目的探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号转导通路中关键节点蛋白在人肝癌细胞株QGY中的表达及其对QGY细胞增殖能力的影响。方法通过RT-PCR和Western blot检测人正常肝细胞株LO2和QGY细胞株中TLR信号转导通路关键节点mRNA和蛋白的表达水平;采用traf-6-siRNA沉默关键节点蛋白traf-6的表达,Western blot检测沉默效果,MTT法检测traf-6基因沉默后QGY细胞的增殖情况。结果 QGY细胞与LO2细胞相比,MAL和traf-6基因表达水平明显升高(P0.05);转染siRNA后QGY细胞traf-6蛋白的表达水平明显降低(Ptraf-6在肝癌细胞中的表达水平高于在正常肝细胞中的表达水平;traf-6对肝癌细胞的增殖具有一定的促进作用,有望成为分子靶向治疗原发性肝癌新的作用靶点。

关键词： Toll样受体信号转导通路肝肿瘤 traf-6 RNA干扰细胞增殖

探讨Graves病traf-6对IL-2诱导的免疫耐受的影响

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探讨Graves病TRAF-6对IL-2诱导的免疫耐受的影响

作者：谭燕重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分IL-2调控Th17/Treg细胞平衡在Graves病发病机制中的作用目的:探讨IL-2调控Th17/Treg细胞平衡在Graves病发病机制中的作用。方法:本研究招募30名GD初诊病人(GD组),30名GD缓解期病人(eGD组)及28名正常人(NC组)。化学免疫发光法检... 详细信息

第一部分IL-2调控Th17/Treg细胞平衡在Graves病发病机制中的作用目的:探讨IL-2调控Th17/Treg细胞平衡在Graves病发病机制中的作用。方法:本研究招募30名GD初诊病人(GD组),30名GD缓解期病人(eGD组)及28名正常人(NC组)。化学免疫发光法检测甲状腺功能(FT3、FT4、TSH)和自身抗体(TRAb、TPOAb、TgAb)。提取外周血单个核细胞(PBMC),分别采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测RORγt、Foxp3、IL-2 mRNA的表达,ELISA检测血浆中IL-2、IL-17、IL-10蛋白的表达。结果:1、GD组的甲状腺功能显著高于eGD及NC组(P0.05)。2、与NC组相比,GD组中IL-2的mRNA和蛋白、Foxp3 mRNA和IL-10蛋白的表达水平均减少,而RORγt mRNA和IL-17蛋白的表达水平均增加,以上结果均有统计学差异(P0.05),IL-2蛋白分别与RORγt mRNA、IL-17蛋白、Foxp3 mRNA、IL-10蛋白之间的表达水平均不相关(P>0.05)。结论:IL-2的表达减少,导致Th17细胞分化增多,同时Treg细胞分化降低,不能有效调控Th17/Treg细胞平衡,促进GD的发生。第二部分traf-6在Graves病中的免疫耐受作用,及其具体作用机制的探究目的:探讨traf-6是否通过抑制TGF-β1介导的Smad2/3磷酸化,调控Th17/Treg细胞平衡,从而在GD的发生中发挥免疫耐受的作用。方法:本研究招募30名GD初诊病人(GD组),30名GD缓解期病人(e GD组)及28名正常人(NC组)。提取PBMC,分别采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测traf-6 m RNA的表达,Western blot检测p-Smad2、p-Smad3、traf-6蛋白的表达。ELISA检测血浆中TGF-β1蛋白的表达。结果:1、与NC组相比,GD组中TGF-β1蛋白的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。2、GD组中的traf-6 m RNA与NC组比较表达降低,差异有统计学意义(Ptraf-6蛋白表达较NC组有下降趋势(P>0.05),3、GD组中,traf-6 m RNA分别与p-Smad2蛋白、p-Smad3蛋白之间的表达水平不相关(P>0.05),traf-6蛋白与p-Smad2蛋白之间表达水平正相关(Ptraf-6蛋白与p-Smad3蛋白之间的表达水平不相关(P>0.05);GD组中p-Smad2蛋白与IL-2 m RNA之间的表达水平负相关(P0.05);GD组中p-Smad3蛋白分别与IL-2 m RNA、IL-2蛋白之间的表达水平不相关(P>0.05)。结论:traf-6在GD的发生发展过程中发挥免疫耐受的作用;traf-6的低表达,不足以抑制TGF-β1介导Smad2/3的磷酸化,导致增多的磷酸化Smad2/3下调IL-2表达,进而诱导Th17细胞的分化,同时抑制Treg细胞的分化,使得机体不能维持免疫耐受,促进GD的发生。

关键词： Graves病 IL-2 Th17细胞 Treg细胞 traf-6 免疫耐受

MST-4及traf-6在Graves病患者外周血中的表达变化及意义

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MST-4及TRAF-6在Graves病患者外周血中的表达变化及意义

作者：郭艾重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:检测Graves病(GD)患者外周血中MST-4、traf-6的mRNA及蛋白的表达水平,探讨两者是否参与了GD的发病。初步了解MST-4与traf-6在GD发病机制中的作用及意义。方法:收集30例初发的GD患者、24例GD缓解后的患者(e GD)和30例正常对照者(NC... 详细信息

目的:检测Graves病(GD)患者外周血中MST-4、traf-6的mRNA及蛋白的表达水平,探讨两者是否参与了GD的发病。初步了解MST-4与traf-6在GD发病机制中的作用及意义。方法:收集30例初发的GD患者、24例GD缓解后的患者(e GD)和30例正常对照者(NC)的外周血,化学免疫发光法检测患者血清中甲状腺功能指标和自身抗体的表达水平。分离提取外周血标本中的单个核细胞(PBMC),实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中MST-4和traf-6的mRNA表达水平;Western Blot检测细胞中MST-4和traf-6的蛋白表达水平。结果:***组的甲功指标(FT3,FT4,TSH)水平与eGD组、NC组分别比较,差异有统计学意义(P0.05);GD组、e GD组的自身抗体水平(TRAb,TGAb,TPOAb)与NC组分别比较,差异具有统计学意义,而GD组与eGD组之间差异无统计学意义。***组的MST-4、traf-6的mRNA及蛋白表达水平较NC组均降低,差异存在统计学意义(P0.05)。3.各组MST-4的mRNA及蛋白表达水平与对应的traf-6的mRNA及蛋白表达水平之间,以及与甲功指标、自身抗体之间均无明显的相关性(P>0.05),而eGD组的traf-6的mRNA表达水平与TPOAb呈正相关(r=0.4291,p=0.0364),正常组的traf-6的mRNA与TRAb呈负相关(r=-0.4085,p=0.025)。结论:在GD组中,MST-4、traf-6的mRNA及蛋白的表达水平较正常对照组降低,这提示MST-4与traf-6可能参与了GD的发病。但MST-4是否通过traf-6影响固有免疫应答,从而调控下游效应T细胞的失衡机制还有待进一步的研究。探讨MST-4与traf-6在GD中的表达情况,为进一步研究效应T细胞失衡的上游机制提供了新的视角和靶点。

关键词： Graves病固有免疫 MST-4 traf-6

traf-6真核表达载体的构建和转染牙龈上皮细胞

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牙体牙髓牙周病学杂志 2005年第6期15卷 305-308页

作者：刘青金岩吴织芬刘源邢向辉第四军医大学口腔医学院陕西西安710032

目的:构建traf-6与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,为研究其在口腔疾病发病中的作用奠定基础。方法:应用基因重组技术,将反转录PCR得到的traf-6基因,克隆入荧光真核表达载体pEGFP-N3中,用含卡那霉素LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子... 详细信息

目的:构建traf-6与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,为研究其在口腔疾病发病中的作用奠定基础。方法:应用基因重组技术,将反转录PCR得到的traf-6基因,克隆入荧光真核表达载体pEGFP-N3中,用含卡那霉素LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子经HindⅢ和KpnⅠ双酶切分析、PCR鉴定。重组质粒酶切鉴定正确后,以脂质体转染牙龈上皮细胞。分别由间接免疫荧光和免疫组织化学检测目的蛋白的表达。结果:获得的traf-6基因重组真核表达质粒,经间接免疫荧光和免疫组化检测,traf-6成功转染上皮细胞。结论:成功克隆traf-6基因,构建了融合有traf-6基因的真核表达质粒,对其在体外进行了表达,并转染牙龈上皮细胞,为进一步的研究奠定了基础。

关键词： traf-6 绿色荧光蛋白遗传载体牙龈上皮细胞

复方芪芎颗粒对佐剂型关节炎大鼠滑膜组织MyD88、traf-6、IRAK-1的影响

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华南国防医学杂志 2019年第4期33卷 232-237页

作者：陈利锋陈建华卢绮萍陈芳杨晨曦朱诗聪中部战区总医院中西医结合科湖北武汉430070 武汉科技大学医学院中部战区总医院普通外科湖北武汉430070 中部战区总医院医学实验科湖北武汉430070 湖北中医药大学研究生院

目的探究复方芪芎颗粒对佐剂型关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠滑膜组织中骨髓分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor 6,traf-6)及白细胞介素1受体相关激酶(interleukin 1 receptor associated kinase,IRAK-1)蛋白表达及信号传导机制的影响。方法随机将60只大鼠分为正常组、模型组、复方芪芎颗粒小剂量组、复方芪芎颗粒中剂量组、复方芪芎颗粒大剂量组、雷公藤组,每组各10只。除正常组外,其余5组按弗氏完全佐剂标准注射,将实验大鼠进行造模。造模成功后,复方芪芎颗粒大、中、小剂量组和雷公藤组分别给予不同剂量复方芪芎颗粒或雷公藤灌胃给药。对比大鼠造模前、给药前、药物干预2周后、4周后大鼠致炎侧后足直径变化,评价各关节炎大鼠的炎症指数(arthritis index,AI)。采用蛋白印迹(westem blot)法检测大鼠滑膜组织中MyD88、traf-6及IRAK-1蛋白的表达水平。结果给药前各造模大鼠致炎侧后足的直径及其肿胀度均大于正常组(F=68.090,P=0.000),表明造模成功。与模型组比较,给药2、4周后复方芪芎颗粒小、中、大剂量组和雷公藤组大鼠致炎侧后足直径均有下降(P均traf-6及IRAK-1蛋白的表达均低于模型组(Ptraf-6及IRAK-1蛋白表达均降低(P均traf-6及IRAK-1蛋白表达密切相关。

关键词：类风湿性关节炎复方芪芎颗粒 MyD88 traf-6 IRAK-1

益气活血复方对内皮细胞TLR4及其下游MyD88、traf-6、TRAM、TRIF mRNA表达的影响

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中西医结合心脑血管病杂志 2010年第3期8卷 300-302页

作者：姜华张艳王辰辽宁中医药大学辽宁中医药大学附属医院

目的研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(traf-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化子... 详细信息

目的研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(traf-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只。以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7d。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用Real ti me PCR方法测定TLR4、MyD88、traf-6、TRAM及TRIF mRNA的表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、traf-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,Ptraf-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用。

关键词：益气活血复方含药血清内皮细胞 Toll样受相关分子 MyD88 traf-6 TRAM TRIF 动脉粥样硬化

血清MCP-1、traf-6水平在脓毒症严重程度和急性肾损伤评估的作用

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新疆医科大学学报 2023年第4期46卷 485-489页

作者：郭峻氚陈东郭仁楠肖东刘艳新疆维吾尔自治区人民医院重症医学科乌鲁木齐830000

目的探讨血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(traf-6)水平在脓毒症严重程度和急性肾损伤评估中的作用。方法回顾性分析2021年6月至2022年6月在新疆维吾尔自治区人民医院重症医学科接受治疗的110例脓毒症患者的... 详细信息

目的探讨血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(traf-6)水平在脓毒症严重程度和急性肾损伤评估中的作用。方法回顾性分析2021年6月至2022年6月在新疆维吾尔自治区人民医院重症医学科接受治疗的110例脓毒症患者的病例资料,依据脓毒症相关急性肾损伤发生情况分为发生组(50例)、未发生组(60例)。统计分析两组患者基线资料、血清MCP-1、traf-6水平,并分析脓毒症患者血清MCP-1、traf-6水平与序贯多器官功能障碍(SOFA)评分、急性生理和慢性健康Ⅱ(APACHEⅡ)评分的相关性,多因素Logistic回归分析脓毒症相关急性肾损伤影响因素。结果110例患者中,脓毒症相关急性肾损伤发生50例,未发生60例,发生率为45.45%。发生组患者的高血压、肺部感染比例均高于未发生组(P0.05)。发生组患者的血清MCP-1、traf-6水平均高于未发生组(Ptraf-6水平与SOFA评分、APACHEⅡ评分均呈显著的正相关关系(Ptraf-6(P0.05)。结论血清MCP-1、traf-6水平和脓毒症严重程度和关系密切,可作为急性肾损伤的诊断参考指标。

关键词：脓毒症严重程度急性肾损伤 MCP-1 traf-6

慢性氟砷联合染毒对大鼠骨骼中traf-6介导的NF-κB途径相关蛋白表达的影响

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慢性氟砷联合染毒对大鼠骨骼中TRAF-6介导的NF-κB途径相关蛋白表...

中国毒理学会第十次全国毒理学大会

作者：聂婵胡君伟王冰洁李浩杨兴洪峰贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室

目的探讨traf-6介导的NF-κB途径在氟砷联合染毒大鼠骨骼毒性信号通路OPG/RANK/RANKL中的调控作用。材料和方法以清洁级Wistar大鼠为研究对象,随机分成16组,分别为对照组(FAs)、低氟组(FAs)、中氟组(FAs)、高氟组(FAs)、低砷组(FAs)、... 详细信息

目的探讨traf-6介导的NF-κB途径在氟砷联合染毒大鼠骨骼毒性信号通路OPG/RANK/RANKL中的调控作用。材料和方法以清洁级Wistar大鼠为研究对象,随机分成16组,分别为对照组(FAs)、低氟组(FAs)、中氟组(FAs)、高氟组(FAs)、低砷组(FAs)、中砷组(FAs)、高砷组(FAs)、低氟低砷组(FAs)、低氟中砷组(FAs)、低氟高砷组(FAs)、中氟低砷组(FAs)、中氟中砷组(FAs)、中氟高砷组(FAs)、高氟低砷组(FAs)、高氟中砷组(FAs)、高氟高砷组(FAs),每组12只,雌雄各半。以不同浓度的NaF(5、10、20 mg/kg)和NaAsO(2.5、5、10mg/kg)溶液灌胃染毒6个月。实验结束后,收集大鼠骨骼样本,检测骨密度、骨氟(Bone Fluorine,BF)、骨砷(Bone Arsenic,BAs)含量及光镜下观察骨组织病理学形态改变。酶联免疫吸附法检测各组大鼠骨组织RANKL、RANK、traf-6、NF-κB、NFAT-c1蛋白含量。实时荧光定量PCR检测traf-6、NF-κB、NFAT-c1 mRNA表达情况。结果慢性氟中毒大鼠骨氟含量随染氟剂量的增加而逐渐增加,骨砷在染砷组明显高于F0As0。慢性氟中毒大鼠骨密度随染氟剂量增加而降低,骨组织呈骨质疏松表现;砷染毒组大鼠骨密度及骨组织病理学检测与对照组无明显差异。氟与RANKL、RANK、traf-6、NF-κB、NFAT-c1表达呈正相关关系(Ptraf-6、NF-κB、NFAT-c1表达呈负相关关系(Ptraf-6、NF-κB、NFAT-c1的表达存在交互作用(Ptraf-6介导的NF-κB途径中相关基因及蛋白的表达。氟砷联合染毒主要表现为氟的主效应,砷参与了氟致大鼠骨骼毒性作用。氟砷联合暴露对骨骼毒性的交互作用表现为拮抗作用。

关键词：氟砷骨 traf-6 NF-κB

来源： cnki会议评论

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大鼠实验性根尖周炎traf-6的表达研究

大鼠实验性根尖周炎TRAF-6的表达研究