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支链氨基酸对肉鸡小肠发育及tor通路相关基因表达的影响

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支链氨基酸对肉鸡小肠发育及TOR通路相关基因表达的影响

作者：常银莲中国农业科学院

学位级别：硕士

本试验通过研究日粮支链氨基酸或亮氨酸水平对肉鸡小肠发育及tor通路相关基因表达的影响,探究支链氨基酸在肉鸡肠道发育过程中的作用机制。试验一:支链氨基酸水平对肉鸡小肠及tor通路相关基因表达的影响。选取1日龄爱拔益加(AA)健康肉公... 详细信息

本试验通过研究日粮支链氨基酸或亮氨酸水平对肉鸡小肠发育及tor通路相关基因表达的影响,探究支链氨基酸在肉鸡肠道发育过程中的作用机制。试验一:支链氨基酸水平对肉鸡小肠及tor通路相关基因表达的影响。选取1日龄爱拔益加(AA)健康肉公鸡384只,随机分为4个处理,每个处理6个重复,每个重复16只。各处理分别饲喂支链氨基酸(branched-chain amino acids,BCAAs)总含量为3.04%(3.04TM)、3.93%(3.93TM)、4.82%(4.82TM)和5.71%(5.71TM)的试验日粮,各处理日粮中亮氨酸:异亮氨酸:缬氨酸比例均为1.8:1:1.2,自由采食和饮水,试验期21天。结果表明:各处理肉鸡体重及平均日增重均无显著性差异(P>0.05),但5.71TM组肉鸡平均日采食量显著低于3.04TM组(Ptor、S6K1和4E-BP1基因相对表达量随之升高,且4.82TM组显著高于3.04TM组(Ptor、S6K1和4E-BP1基因相对表达量与3.04TM组无显著差异(P>0.05)。由此可见,肉鸡日粮中适当提高BCAAs水平能够提高饲料利用率,但过高水平(5.71%)则会显著降低肉鸡平均日采食量。随日粮BCAAs水平由3.04%增至4.82%,肉鸡十二指肠和空肠粘膜绒毛高度增加,且tor通路相关基因表达上调,促进小肠绒毛的发育。当其水平达到5.71%时,肉鸡小肠绒毛高度及V/C显著降低,十二指肠和空肠粘膜tor通路相关基因表达下调,小肠绒毛发育减缓。试验二:亮氨酸水平对肉鸡小肠发育及tor通路相关基因表达的影响。选取1日龄爱拔益加(AA)健康肉公鸡384只,随机分为4个处理,每个处理6个重复,每个重复16只,分别饲喂Leu总含量为1.37%(1.37TM)、1.77%(1.77TM)、2.17%(2.17TM)和2.57%(2.57TM)的试验日粮,自由采食和饮水,试验期21天。结果表明:试验条件下的Leu水平对肉鸡生长性能无显著影响(P>0.05)。当日粮Leu含量增至2.57%时,肉鸡十二指肠、空肠、回肠相对重降低。7、10、14日龄时,肉鸡十二指肠绒毛高度表现出2.57TM组最低,1.37TM组最高的趋势,其中14日龄时,1.37TM组肉鸡十二指肠绒毛高度显著高于2.57TM组的相应值(Ptor基因表达量逐渐降低,其中1.37TM组肉鸡十二指肠粘膜tor基因表达量显著高于2.57TM组肉鸡十二指肠粘膜tor基因表达量(Ptor、S6K1基因表达量逐渐增加,且2.17TM组显著高于1.37TM组(Ptor、S6K1基因表达上调,促进小肠绒毛的发育。当Leu达到2.57%时,肉鸡

关键词：支链氨基酸亮氨酸肉鸡小肠发育 tor通路

Ridaforolimus体外单独或联合氟康唑抗念珠菌作用的研究

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菌物学报 2019年第8期38卷 1371-1378页

作者：谭静文宋金凤刘小萍高志琴杨虹杨连娟上海市皮肤病医院真菌病科

由念珠菌感染引起的侵袭性念珠菌病治疗困难、死亡率高,是临床一大难题。氟康唑是目前治疗该病的一线用药,但近年来耐药菌株逐渐增多,治疗困难。因此,开发新的有效抗真菌药物或发现可提高现有抗真菌药物活性的化合物十分必要。通过体外... 详细信息

由念珠菌感染引起的侵袭性念珠菌病治疗困难、死亡率高,是临床一大难题。氟康唑是目前治疗该病的一线用药,但近年来耐药菌株逐渐增多,治疗困难。因此,开发新的有效抗真菌药物或发现可提高现有抗真菌药物活性的化合物十分必要。通过体外抗真菌药物敏感性试验,我们发现tor通路抑制剂ridaforolimus具有抗念珠菌作用。随后我们通过纸片法及微量液基稀释法评价该化合物单独或与氟康唑联合对念珠菌的抗菌效果。结果表明ridaforolimus对念珠菌有杀伤作用,在与氟康唑联合时增强了氟康唑的抗念珠菌能力,逆转了白念珠菌对氟康唑的耐药,并将氟康唑由抑菌剂转化为杀菌剂。本研究为ridaforolimus作为新型抗真菌药及氟康唑增敏剂提供了一定理论基础。

关键词： tor通路增效氟康唑念珠菌

莪术二酮对增生性瘢痕成纤维细胞的作用及机制探讨

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中草药 2018年第8期49卷 1854-1859页

作者：张浩林川周建敏陈如俊温州市人民医院整形外科浙江温州325000 解放军第118医院烧伤科浙江温州325000

目的探讨莪术二酮调节增生性瘢痕成纤维细胞增殖、转化、胶原分泌的作用及机制。方法采用人源增生性瘢痕成纤维(HSF)细胞进行培养,加入不同浓度的莪术二酮进行干预。MTT法检测细胞增殖抑制率,ELISA法检测细胞上清中I型胶原蛋白(COL-I)、... 详细信息

目的探讨莪术二酮调节增生性瘢痕成纤维细胞增殖、转化、胶原分泌的作用及机制。方法采用人源增生性瘢痕成纤维(HSF)细胞进行培养,加入不同浓度的莪术二酮进行干预。MTT法检测细胞增殖抑制率,ELISA法检测细胞上清中I型胶原蛋白(COL-I)、III型胶原蛋白(COL-III)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及基质金属蛋白酶1(MMP-1)水平,免疫组化法分析细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,Western blotting法检测细胞内PI3K/Akt/m tor通路及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路相关分子表达情况。结果莪术二酮可有效抑制HSF细胞增殖;与对照组比较,不同浓度莪术二酮可明显减少细胞TIMP-1、COL-I及COL-III的分泌(Ptor、Smad3的磷酸化及TGF-β1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达(Ptor及TGF-β1/Smads信号传导通路,同时抑制HSF细胞增殖、转化,减少胶原分泌,促进胶原酶解,继而有效改善增生性瘢痕的发生与发展。

关键词：莪术二酮增生性瘢痕成纤维细胞 PI3K/Akt/m tor通路 TGF-β1/Smads通路

健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

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北京中医药大学学报 2016年第11期39卷 902-908页

作者：张晓军刘健万磊黄传兵安徽中医药大学中医临床学院安徽230038 安徽中医药大学第一附属医院

目的观察健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管PI3K/AKT/m tor信号通路及缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)、滑膜微血管密度(MVD)、内皮抑素(ES)的影响。方法 50只大鼠随机均分成5组:正常对照组,模型对照组,甲... 详细信息

目的观察健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管PI3K/AKT/m tor信号通路及缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)、滑膜微血管密度(MVD)、内皮抑素(ES)的影响。方法 50只大鼠随机均分成5组:正常对照组,模型对照组,甲氨蝶呤组,雷公藤多苷片组,健脾化湿通络方组。除正常对照组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模成功后,各治疗组给予相应药物灌胃,连续30 d。采用免疫组化法检测滑膜血管MVD表达,酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、HIF-1α、VEGF-A表达,免疫印迹法检测滑膜血管PI3K、AKT、p-AKT、m tor、ES蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,滑膜组织MVD计数升高,血清IL-6、VEGF、HIF-1α和滑膜血管PI3K、AKT、p-AKT、m tor、ES表达显著升高,IL-10降低(Ptor、ES降低,血清IL-10升高。结论健脾化湿通络方通过调节PI3K/AKT/m tor通路、HIF-1α及ES表达改善滑膜血管新生。

关键词：健脾化湿通络方佐剂关节炎血管新生 PI3K/AKT/m tor通路大鼠

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乳腺癌分子靶向治疗的现状与展望

中国实用外科杂志 2015年第7期35卷 790-793页

作者：徐璐曾雪张志强李鹏金美子滕月娥中国医科大学附属第一医院肿瘤内科辽宁沈阳110001 辽宁省人民医院肿瘤内科辽宁沈阳110016 河南省肿瘤医院肿瘤内科河南郑州450003 辽宁省肿瘤医院肿瘤内科辽宁沈阳110042

乳腺癌是全世界女性最常见的恶性肿瘤,其病死率已位居女性恶性肿瘤首位。尽管乳腺癌治疗方法众多,靶向治疗仍然是主要治疗手段之一。通常按照作用机制不同,靶向药物可被分成两大类,一类是靶向肿瘤细胞的药物,如：抗人表皮生长因子受体2... 详细信息

乳腺癌是全世界女性最常见的恶性肿瘤,其病死率已位居女性恶性肿瘤首位。尽管乳腺癌治疗方法众多,靶向治疗仍然是主要治疗手段之一。通常按照作用机制不同,靶向药物可被分成两大类,一类是靶向肿瘤细胞的药物,如：抗人表皮生长因子受体2（HER2）靶向药物、PI3K/AKT/m tor抑制剂、CDK4/6抑制剂和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）抑制剂等;另一类是靶向肿瘤微环境的药物,如抗血管新生的靶向药物等。大量临床数据已经证实,

关键词：乳腺癌靶向治疗曲妥珠单抗血管新生 m tor通路

食管鳞癌Eca109细胞中PI3K/AKT/mtor信号通路对LSD1的调控作用

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郑州大学学报（医学版） 2017年第5期52卷 531-535页

作者：凡丞鲁照明张幸丽田菲白一汝赵琦彭柯峥刘宏民侯桂琴郑州大学药学院郑州450001

目的:探讨食管鳞癌Eca109细胞中PI3K/AKT/m tor信号通路对LSD1的调控作用。方法:用不同浓度的PI3K/Akt/m tor信号通路抑制剂LY294002(0.5、1.0、5.0、10.0、20.0和50.0μmol/L)、RAD001(0.05、0.50、5.00、10.00、20.00和50.00μmol/L)分别处理Eca109细胞24、48 h,采用CCK-8实验检测细胞增殖;然后分别用0、10、20μmol/L LY294002或RAD001处理Eca109细胞24 h或20μmol/L LY294002或RAD001处理不同时间(0~72 h),采用Western blot检测PI3K/Akt/m tor信号通路因子、LSD1及组蛋白H3K4me2表达的变化。结果:LY294002、RAD001处理后,食管鳞癌细胞增殖受抑,且随浓度的增加,抑制作用有增强的趋势(Ptor、Rictor、p-Akt(Ser473)以及组蛋白H3K4me2的表达;而RAD001抑制了Raptor、Rictor、p-p70S6K表达,增加p-Akt(Ser473)的表达,并且下调LSD1表达,上调组蛋白H3K4me2的表达(Ptor信号通路对LSD1存在调控作用。

关键词：食管鳞癌 PI3K/AKT/m tor通路 LSD1 H3K4me2

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白念珠菌中的自噬研究进展

中国真菌学杂志 2017年第3期12卷 175-179页

作者：张金宇秦玉璘张璐璐王晓娟姜远英韩冰曹永兵第二军医大学药学院药理学新药研究中心上海200433 上海市闵行区中心医院上海201100

自噬影响着真核细胞的适应性、分化和发育,在白念珠菌中自噬影响着白念珠菌的代谢和毒力等,也可以减缓应激反应带来的损伤,增强菌体存活能力。但过度的自噬可能导致自噬性细胞死亡。该文根据近期研究进展,从白念珠菌中与自噬相关的Cvt(C... 详细信息

自噬影响着真核细胞的适应性、分化和发育,在白念珠菌中自噬影响着白念珠菌的代谢和毒力等,也可以减缓应激反应带来的损伤,增强菌体存活能力。但过度的自噬可能导致自噬性细胞死亡。该文根据近期研究进展,从白念珠菌中与自噬相关的Cvt(Cytoplasm to vacuole trafficking pathway)通路、tor(target of rapamycin)通路和自噬在应激中的作用等几个方面,对白念珠菌中的自噬进行综述。

关键词：白念珠菌自噬 Cvt通路 tor通路应激刺激氮饥饿

莱茵衣藻中响应高光的转录因子GATAX功能探究

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莱茵衣藻中响应高光的转录因子GATAX功能探究

作者：伏伟涵西北大学

学位级别：硕士

光合生物经常经历极端的光条件,过多的光吸收会导致光合器官发生氧化损伤。莱茵衣藻作为古老的光合生物,在生长发育过程中进化出了精细的抵御强光的机制,其中转录调控网络通过协调基因的激活或抑制来帮助细胞适应强光,维持正常生长。本... 详细信息

光合生物经常经历极端的光条件,过多的光吸收会导致光合器官发生氧化损伤。莱茵衣藻作为古老的光合生物,在生长发育过程中进化出了精细的抵御强光的机制,其中转录调控网络通过协调基因的激活或抑制来帮助细胞适应强光,维持正常生长。本研究发现了衣藻中一个响应高光的GATA家族转录因子GATAX,通过对转录组测序结果分析验证,找到了GATAX下游靶基因NY,NY类蛋白具有NYX1型锌指结构,并且在酵母细胞中参与雷帕霉素靶蛋白（Target of rapamycin,tor）信号通路。在真核生物中,tor激酶可以整合多种逆境信号,参与调控蛋白质合成、细胞自噬、脂质合成以及碳氮代谢等过程,从而促进细胞的生长。与其他物种相比,目前我们对藻类中tor信号网络的了解还很有限,尤其对其促进光合细胞生长的分子机制知之甚少。我们通过对转录因子GATAX功能的深入探究,初步得出了衣藻中GATAX通过影响NY的表达,参与调控tor通路的结论。主要研究结果如下:（1）将低光、高光15分钟和高光30分钟处理后的野生型衣藻进行转录组测序,筛选出短时间高光处理后有明显上调的转录因子GATAX、A、B、C、D。从DNA水平、转录水平、表型三方面对突变体gatax、a、b、c-1、c-2、d进行鉴定。结果显示除了A基因的突变不影响其表达,C基因在c-2中低表达,其余基因在相应突变体中均不表达。高光表型观察显示,与野生型相比,a突变体表现为高光较敏感表型,而gatax、b、c-1、c-2、d突变体表现为高光致死表型。其中gatax除了有明显高光表型之外,在正常生长条件下还形成了Palmelloid结构,该结构的形成伴随着胞外多糖的分泌以及细胞内淀粉含量的增加。我们重点对GATAX的功能展开探究。（2）构建带GATAX自身启动子的回补载体,通过电转化的方法将重组质粒转化至gatax突变体中。待生长十天左右,挑选长势良好的20株单克隆藻株进行DNA水平、转录水平、表型的鉴定,筛选出5株转录本和表型都得到回复的转基因阳性株。（3）将野生型（gr-）、突变体（gatax）、回补株（gatax C）进行转录组测序,寻找在突变体和野生型中差异表达的,并且在回补株中得到部分或全部回复的基因。通过GO富集、KEGG富集对符合标准的2029个基因进行初步分析,发现在gatax突变体中转录本下调的基因主要涉及了蛋白质合成、核糖体生物发生以及叶绿体转运相关过程,上调的基因参与了细胞自噬以及一些代谢途径。在这些基因中,转录本差异最显著的是NY,该基因在衣藻中未被研究过。通过半定量（Semi-q PCR）和实时定量PCR（Real time-q PCR）对可能的GATAX直接或间接靶基因进行验证,验证结果与RNA-seq结果基本一致。（4）GATAX和NY有相似的表达模式,亚细胞定位观察到这两个蛋白都定位在细胞核中;通过EMSA（Electrophoretic Mobility Shift Assay）验证了转录因子GATAX结合在NY启动子GATA结合基序处;酵母双杂交实验证明了GATAX与NY蛋白之间存在相互作用,同时NY与tor信号通路的关键元件亲免蛋白FKB12也存在互作。（5）通过对gatax突变体和NY过表达株表型精确分析,以及对RNA-seq结果验证,初步得出了GATAX通过影响NY的表达,参与调控tor通路的结论。（6）寻找GATAX和NY在拟南芥中的同源基因,购买相应突变体,并筛选出纯合突变体atgatam、atgatan、atnym、atnyn;表型观察发现纯合单突atgatam、atgatan、atnym、atnyn与野生型生长表型没有显著差异;将拟南芥atgatam、atgatan纯合突变体进行杂交,获得了基因型为aabb的纯合双突atgatamatgatan。以上结果为研究GATAX与NY在拟南芥中同源基因的功能提供了材料基础。综上所述,本研究发现了莱茵衣藻中一个从未报道过的,能响应高光的转录因子GATAX,并且找到了该转录因子的下游靶基因NY。通过对GATAX功能的进一步探究,初步得出了GATAX通过影响NY的表达,参与调控tor信号通路的结论。

关键词：高光胁迫莱茵衣藻转录调控 tor通路细胞生长

MP和EP混合对雌果蝇亲代和子代繁殖力的影响

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MP和EP混合对雌果蝇亲代和子代繁殖力的影响

作者：薛佩琴陕西师范大学

学位级别：硕士

对羟基苯甲酸酯类具有无色无味,广谱抗菌,pH稳定,成本低廉和相对安全等特点,目前被广泛应用到化妆品、食品和药品等,因此其暴露于环境越来越多,目前已在水体、土壤、灰尘、空气中检测到对羟基苯甲酸酯类。它已被鉴定为内分泌干扰物质(ED... 详细信息

对羟基苯甲酸酯类具有无色无味,广谱抗菌,pH稳定,成本低廉和相对安全等特点,目前被广泛应用到化妆品、食品和药品等,因此其暴露于环境越来越多,目前已在水体、土壤、灰尘、空气中检测到对羟基苯甲酸酯类。它已被鉴定为内分泌干扰物质(EDCs),具有雌激素和抗雄激素效应,影响生物体的发育、繁殖等。课题组之前的研究多以单酯对果蝇的影响,而本研究将对羟基苯甲酸甲酯(MP)和乙酯(EP)混合,果蝇连续三代暴露于MP+EP浓度组30Omg·L-1、70Omg·L-1、1000 mg·L-1和对照组,在生理水平上检测F1和F2果蝇羽化前发育周期、蛹化率、羽化率以及亲代和子代的繁殖力,在分子水平上检测F0、F1、F2未交配(Fn-0,n为代数、交配1 d(Fn-1)、3 d(Fn-3)和5 d(Fn-5)雌果蝇胰岛素/胰岛素样生长因子信号转导(ⅡS)通路和雷帕霉素靶标(tor)通路相关基因dilp3、Foxo、AKH和S6K表达量,其中dilp3是Ⅱ通路的上游基因,Foxo是ⅡS通路的下游负调控基因,Foxo高表达会减弱ⅡS通路,使产卵量增加,AKH活化tor通路,而S6K是tor通路的下游基因。本研究得到的主要结论如下:(1)F1果蝇,100Omg·L-l MP+EP显著延长果蝇羽化前发育周期,而F2发育周期却比F1短,说明随着代数的增加,酯类的毒性降低,果蝇连续暴露MP+EP,其毒性并不是一直积累在体内,可能通过代谢途径把对羟基苯甲酸酯类排出,进而降低其毒性。(2)果蝇连续三代暴露MP+EP,F0果蝇的毒性最大导致其产卵量减少,并且产生某种记忆使F1和F2果蝇少摄入酯类,引起雌激素效应,导致产卵量增多。300 mg·L-1 F2的产卵量比对照组F2多,700 mg L-1和1000 mg·L-1的产卵量比对照组F2少,说明果蝇长期暴露300 mg L-1促进其产卵,700 mg L-1和1000 mg·L-1具有一定的毒性,导致其产卵量减少。(3)dilp3在F1中,30Omg·L·-1 F1-0、F1-3、F1-5的表达量均高于对照组,在F2中,700 mg·L-1和1000 mg L-1的表达量均比对照组低,说明300 mg·L-1促进了dilp3的表达,而700 mg·L-1和1000 mg·L-1对果蝇都有一定的毒性作用,会抑制dilp3的表达。(4)Foxo在300 mg·L-1浓度组F2-3和F2-5的表达量分别比F1-3和F1-5高,说明连续暴露于300 mg·L-1 MP+EP组,引起Foxo高表达。700 mg·L-1组F1-1和F2-5表达量分别低于F0-1和F1-5,而1000 mg·L-1组F1-1、F1-3、F2-5表达量均比F0-1、F0-3、F1-5低,说明果蝇长期暴露7000mg·L-1和1000 mg·L-1浓度组,导致Foxo表达受到抑制。(5)S6K在700 mg·L-1和1000 mg·L-1浓度组F2-1、F2-3和F2-5均呈现下调趋势,说明700 mg·L-1和1000 mg·L-1对果蝇S6K基因表达影响最大。(6)AKH在300 mg·L-1/F0-5、F1-0、F1-3、F1-5、F2-0和F2-5的表达量均比对照组高,说明300 mg·L-1促进AKH表达,而700 mg·L-1和1000 mg·L-1均比对照组低,呈下调趋势,说明700mgiL-1和100Omg·L-1抑制果蝇AKH的表达。综上所述,果蝇长期暴露于300mg·L·-1MP+EP表现出雌激素效应,使其产卵量增多,Foxo、AKH和S6K基因高表达,而果蝇长期暴露于700 mg L-1和1000 mg·L-1 MP+EP表现出一定的毒性,使其发育周期延长,产卵量比对照组少,dilp3、Foxo、AKH和S6K基因低表达,说明果蝇暴露于MP+EP,影响其生长、生殖、基因表达、紊乱ⅡS通路和tor通路的调控,对羟基苯甲酸酯类的生殖毒性还需进一步深入探讨。

关键词： MP和EP混合黑腹果蝇繁殖力 ⅡS通路 tor通路