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青蒿素防治细菌脓毒症的实验研究

青蒿素防治细菌脓毒症的实验研究

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作者：王俊第三军医大学

学位级别：硕士

目的:脓毒症是由严重细菌感染引起的全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),是严重烧伤、创伤和感染的常见并发症,进一步发展可导致脓毒症性休克(septic shock)、多器官功能障碍综合症(multiple organ dysf... 详细信息

目的:脓毒症是由严重细菌感染引起的全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),是严重烧伤、创伤和感染的常见并发症,进一步发展可导致脓毒症性休克(septic shock)、多器官功能障碍综合症(multiple organ dysfuction syndrome, MODS),病死率高达50%-60%,至今尚无有效的治疗手段。革兰阴性菌细胞外膜成分脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin)和存在于革兰阴性、阳性细菌的基因组DNA 被认为是导致细菌脓毒症发生的主要致炎因子。有关细菌脓毒症拮抗措施的研究较多,但均未取得突破性进展,因此寻找有效防治脓毒症的药物和方法具有重要意义。在中国,青蒿提取物用来治疗疟疾相关发热已有两千多年的历史。1972 年我国科研人员最早从植物黄花蒿中分离得到其含倍半萜内酯结构的活性单体青蒿素(artemisinin),其衍生物包括二氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚及青蒿琥酯。除传统的抗恶性疟作用外,青蒿类物质还具有其它方面的作用,如抗肿瘤、抗血吸虫及调节免疫系统等作用。本课题旨在明确青蒿素防治细菌脓毒症的作用及机制,为青蒿素的老药新用提供实验依据。方法:①体外培养小鼠RAW264.7 细胞,观察青蒿素对CpG DNA、LPS 和热灭活大肠杆菌诱导RAW264.7 细胞释放tnf-α和IL-6 的抑制作用,并明确其量效和时效关系;②建立小鼠脓毒症模型,观察青蒿素对CpG DNA、LPS 和热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用;③流式细胞术观察青蒿素对CpG DNA 结合RAW264.7 细胞表面及内化的影响;④RT-PCR 检测青蒿素对CpG DNA、LPS 和热灭活大肠杆菌刺激RAW264.7 细胞TLR9 和TLR4 mRNA 表达的影响。⑤电泳迁移率改变分析(EMSA)方法观察青蒿素对CpG DNA、LPS 和热灭活大肠杆菌诱导RAW264.7 细胞NF-κB 活化的抑制作用。结果:①青蒿素显著抑制CpG DNA、LPS、热灭活大肠杆菌诱导的tnf-α和IL-6释放,并呈明显的量效和时效关系;②50、100、200 mg/kg 青蒿素显著降低CpG DNA、LPS、热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡率,青蒿素联合抗生素氨苄青霉素对活大肠杆菌攻击的小鼠具有协同保护作用;③青蒿素对CpG DNA 与RAW264.7 细胞表面结合及内化无明显影响;④青蒿素对CpG DNA、LPS 或热灭活大肠杆菌诱导RAW264.7

关键词：青蒿素脓毒症 CpG DNA LPS 热灭活大肠杆菌氨苄青霉素 tnf-α内化 TLR9 NF-κB

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