检索结果-南通市图书馆

中华肿瘤防治杂志 2020年第20期27卷 1622-1628页

作者：杨旺盛陆振刚杨铎定西市人民医院胸外科甘肃定西743000

目的 miR-27b-3p在抑制肺癌细胞的增殖中发挥抑癌基因作用,而跨膜Bax抑制剂的母体6(transmembrane Bax inhibitor motif-containing 6,tmbim6)作为抗凋亡蛋白发挥促癌作用。miR-27b-3p是否调控tmbim6参与了肺癌细胞凋亡有待进一步探讨... 详细信息

目的 miR-27b-3p在抑制肺癌细胞的增殖中发挥抑癌基因作用,而跨膜Bax抑制剂的母体6(transmembrane Bax inhibitor motif-containing 6,tmbim6)作为抗凋亡蛋白发挥促癌作用。miR-27b-3p是否调控tmbim6参与了肺癌细胞凋亡有待进一步探讨。本研究探讨miR-27b-3p靶向调控tmbim6对非小细胞癌A549细胞的生物学行为的影响。方法细胞实验:以不同肺癌细胞株A549、H1975、H1650和人正常肺上皮细胞BEAS-2B为研究对象;RT-qPCR检测miR-27b-3p表达,双荧光素酶实验检测miR-27b-3p和tmbim6的靶向关系;脂质体法向A549细胞转染miR-27b-3p mimics和mimics NC后,平板克隆和MTT法检测A549增殖能力,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测对凋亡的影响。动物实验:采用皮下移植方法建立60只A549裸鼠移植瘤模型,瘤内定点注射miR-27b-3p agomir或者agomir NC,3周后统一处死各处理组裸鼠,测量肿瘤质量,并采用TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡的情况;蛋白质印迹法检测各组细胞和组织中tmbim6、calpain-2、caspase-12和Bcl-xL蛋白表达。结果细胞实验:miR-27b-3p表达水平在A549(1.44±0.07)、H1975(2.82±0.08)、H1650(4.04±0.11)和Beas2B细胞(14.44±0.20)中差异有统计学意义,F=2 180.00,P650中miR-27b-3p表达水平降低,均P650细胞,均Ptmbim6野生型3′UTR中,miR-27b-3p mimics组荧光素酶的活力值(0.52±0.07)低于mimics NC组(0.98±0.04),差异有统计学意义,t=15.97,Ptmbim6是miR-27b-3p的直接靶点。与mimics NC和空白对照组相比,miR-27b-3p mimics转染组细胞的增殖率下降,P64)mg〕相比,miR-27b-3p agomir组剥离肿瘤的质量〔(398.70±7.54)mg〕减少,F=1 095.00,P67.01±3.48)%〕高于agomir NC〔(12.33±1.36)%〕和空白对照组〔(15.97±0.98)%〕,F=188.40,Ptmbim6和Bcl-xL表达均降低,均Ptmbim6表达,激活calpain-2/caspase-12信号通路促进非小细胞肺癌细胞凋亡。

关键词：非小细胞肺癌 A549 miR-27b-3p tmbim6 凋亡

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miR-1271-5p调节tmbim-6基因的表达促进乳腺癌细胞凋亡的机制研究

miR-1271-5p调节TMBIM-6基因的表达促进乳腺癌细胞凋亡的机制研究

引用

作者：吉天豪南京医科大学

学位级别：硕士

目的:分析比较miRNA-1271-5p在乳腺癌组织样本和细胞系中的表达水平,进而探讨miRNA-1271-5p在乳腺癌发生发展中的生物学功能和相关分子机制。材料和方法:为了筛选正常组织和乳腺癌组织中具有差异表达的miRNA,首先在癌症基因组图谱(TCGA... 详细信息

目的:分析比较miRNA-1271-5p在乳腺癌组织样本和细胞系中的表达水平,进而探讨miRNA-1271-5p在乳腺癌发生发展中的生物学功能和相关分子机制。材料和方法:为了筛选正常组织和乳腺癌组织中具有差异表达的miRNA,首先在癌症基因组图谱(TCGA)组织样本数据库中进行分析筛选,而后对54对腺癌组织及邻近的正常组织样本采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测验证。在得出的miRNA-1271-5p相对表达量结果中,miRNA-1271-5p在乳腺癌样本中较正常组织样本表达降低近50%。使用EdU细胞增殖检测、单克隆形成实验评价miRNA-1271-5p对增殖能力的影响,使用流式细胞术(FCM)评价对凋亡进程的影响。通过裸鼠异种移植模型皮下成瘤实验,观察体内miRNA-1271-5p对于肿瘤形成的影响。使用生物信息分析筛选乳腺癌中miRNA-1271-5p的潜在靶标,并通过荧光素酶报告基因实验、RT-qPCR和免疫印迹(Western Blot)实验进行验证。通过WB实验研究下游Calpain 1和Caspase 12信号转导通路参与介导细胞凋亡的相关进程。结果:***-1271-5p在乳腺癌组织(TCGA、标本)、细胞系表达降低。***-1271-5p在体内外实验中抑制乳腺癌细胞增殖和肿瘤生长,促进细胞凋亡。3.荧光素酶报告基因证实tmbim6(transmembrane BAX inhibitor motif 6)是miRNA-1271-5p的直接靶点,其表达受负性调控。***-1271-5p可通过抑制tmbim6的表达在乳腺癌中发挥相关生物学作用。5.抑制tmbim6表达可激活Calpain通路以介导miRNA-1271-5p下游效应。结论:本研究表明,miRNA-1271-5p通过结合致癌基因tmbim6促进凋亡,并且这可能在乳腺癌中作为新的诊断和治疗靶点。

关键词：乳腺癌 miRNA-1271-5p 凋亡 tmbim6 Calpain

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