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Toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究

Toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研...

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作者：郁喆苏州大学

学位级别：硕士

目的:在心脏移植后,急性血管性排斥反应导致心肌细胞间质出血、水肿,周围中性粒细胞浸润,血管内皮细胞死亡,最终细胞凋亡。本实验拟研究Toll样受体通路及其下游通路核因子-κB(NF-κB)在心肌细胞凋亡中的作用。方法:在体外培养C57BL6小... 详细信息

目的:在心脏移植后,急性血管性排斥反应导致心肌细胞间质出血、水肿,周围中性粒细胞浸润,血管内皮细胞死亡,最终细胞凋亡。本实验拟研究Toll样受体通路及其下游通路核因子-κB(NF-κB)在心肌细胞凋亡中的作用。方法:在体外培养C57BL6小鼠的心肌细胞及SD大鼠和BALB/C小鼠的脾细胞。在体外建立C57BL6小鼠到BALB/C小鼠和SD大鼠的心脏移植细胞模型。将实验分为六组,A组:C57BL6小鼠心肌细胞+PBS液(PBS组);B组:C57BL6小鼠心肌细胞+TNF-α(TNF-α组);C组:C57BL6小鼠心肌细胞+BALB/C小鼠脾细胞(Mouse SC组);D组:C57BL6小鼠心肌细胞+BALB/C小鼠脾细胞+BALB/C小鼠血清(Mouse SC+S组);E组:C57BL6小鼠心肌细胞+SD大鼠脾细胞(Rat SC组);F组:C57BL6小鼠心肌细胞+SD大鼠脾细胞+SD大鼠血清(Rat SC+S组),共培养时间为108h。运用Annexin-V/PI法检测各组C57BL6小鼠心肌细胞凋亡,比较同种和异种免疫原对心肌细胞刺激效应的差别。RT-PCR法检测A组、C组、D组、E组、F组心肌细胞tlr-1、tlr-2、tlr-3、tlr-4、tlr-5、tlr-7、tlr-9的表达,筛选出被激活的Toll样受体。利用相应的Toll样受体的阻断抗体抑制激活的Toll样受体,Annexin-V/PI法检测心肌细胞凋亡,Western-blot法检测其下游通道NF-κB的表达变化。结果:运用酶消化法培养C57BL6小鼠的心肌细胞,细胞活性好,纯度达80-90%。供心心肌细胞凋亡检测实验中,TNF-α组、Rat SC组、Rat SC+S组的心肌细胞凋亡比例达71.31±7.71%、70.05±5.73%、68.61±4.71%,与PBS组、Mouse SC组、Mouse SC+S组相比,心肌细胞凋亡程度有明显差异(Ptlr-2和tlr-3的表达明显增高(Ptlr-3的增高更加明显(Ptlr-3抗体来抑制心肌细胞tlr-3信号通路后,供心心肌细胞的凋亡比例减少(Ptlr-2和tlr-3是异种免疫原诱导的心肌细胞凋亡过程中所激活的主要Toll受体种类,而tlr-3是受激活最明显的受体。2.通过抑制tlr-3受体信号通路的激活,可抑制下游的NF-κB表达,减轻心肌细胞凋亡。

关键词：异种移植心肌细胞凋亡 tlr-3信号通路 tlr-3抗体核因子-κB

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