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Circular RNA circCCNB1 inhibits the migration and invasion of nasopharyngeal carcinoma through binding and stabilizing tjp1 mRNA

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Science China(Life Sciences) 2022年第11期65卷 2233-2247页

作者： Mengyao Zhao Yian Wang Fenghua Tan Lingyun Liu Xiangchan Hou Chunmei Fan Le Tang Yongzhen Mo Yumin Wang Qijia Yan Zhaojian Gong Zheng Li Qianjin Liao Can Guo He Huang Xi Zeng Guiyuan Li Zhaoyang Zeng Wei Xiong Fuyan Wang NHC Key Laboratory of Carcinogenesis Hunan Cancer Hospital and the Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of MedicineCentral South UniversityChangsha 410078China Key Laboratory of Carcinogenesis and Cancer Invasion of the Chinese Ministry of Education Cancer Research InstituteCentral South UniversityChangsha 410083China Cancer Research Institute Hengyang Medical CollegeUniversity of South ChinaHengyang 421009China Department of Oral and Maxillofacial Surgery the Second Xiangya HospitalCentral South UniversityChangsha 410011China Hunan Key Laboratory of Nonresolving Inflammation and Cancer Disease Genome Research Centerthe Third Xiangya HospitalCentral South UniversityChangsha 410013China

Nasopharyngeal carcinoma(NPC)is a malignant tumor that usually occurs in people from Southeast Asia and Southern China.NPC is prone to migration and invasion,leading to poor prognosis.A large number of circular RNAs(circ RNAs)exacerbate the process of metastasis in NPC;however,their underlying mechanisms remain unclear.We found that the circular RNA circ CCNB1,encoded by the oncogene CCNB1,was downregulated in NPC biopsies and cell lines.In vitro assays show that circ CCNB1 inhibits NPC cell migration and invasion.Moreover,circ CCNB1 induces a protein,nuclear factor 90(NF90),to bind and prolong the half-life of tight junction protein 1(tjp1)m RNA.Upregulation of tjp1 enhances tight junctions between cancer cells and inhibits NPC cell migration and invasion.This study reveals a novel biological function of circ CCNB1 in the migration and invasion of NPC by enhancing the tight junctions of cancer cells by binding to NF90 proteins and tjp1 m RNA,and may provide a potential therapeutic target for NPC.

关键词： nasopharyngeal carcinoma circCCNB1 NF90 tjp1 migration and invasion

血清外泌体介导lncRNA HOTTIP通过miR-138-5p/tjp1轴调控胃癌细胞顺铂耐药的研究

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中华消化外科杂志 2023年第12期22卷 1467-1475页

作者：韩明阳白军伟聂洁伟李媛媛张超河南省人民医院胃肠外科郑州450003 河南省人民医院生殖医院郑州450003

目的探讨胃癌患者血清外泌体对胃癌细胞AGS顺铂耐药、克隆形成、迁移、侵袭和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法分离胃癌患者血清外泌体,qRT-PCR检测血清外泌体中lncRNA HOTTIP的表达。体外培养正常胃上皮细胞株GES1、胃癌细胞株AGS、... 详细信息

目的探讨胃癌患者血清外泌体对胃癌细胞AGS顺铂耐药、克隆形成、迁移、侵袭和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法分离胃癌患者血清外泌体,qRT-PCR检测血清外泌体中lncRNA HOTTIP的表达。体外培养正常胃上皮细胞株GES1、胃癌细胞株AGS、人胚肾细胞株293T。AGS细胞与外泌体(Exo)孵育,以PBS处理作为对照,随后转染si-NC或si-HOTTIP-3,设为Exo组、PBS组、si-NC+Exo组、si-HOTTIP-3+Exo组。AGS细胞分别转染si-NC、si-HOTTIP-1、si-HOTTIP-2、si-HOTTIP-3、oe-HOTTIP、vector、oe-HOTTIP+miR-138-5p mimic、oe-HOTTIP+mimic NC、miR-138-5p inhibitor、inhibitor NC、miR-138-5p inhibitor+si-tjp1及miR-138-5p inhibitor+si-NC,设为si-NC组、si-HOTTIP-1组、si-HOTTIP-2组、si-HOTTIP-3组、oe-HOTTIP组、vector组、oe-HOTTIP+miR-138-5p mimic组、oe-HOTTIP+mimic NC组、miR-138-5p inhibitor组、inhibitor NC组、miR-138-5p inhibitor+si-tjp1组及miR-138-5p inhibitor+si-NC组。293T细胞转染mimic NC+HOTTIP wt、miR-138-5p mimic+HOTTIP wt、mimic NC+HOTTIP mut、miR-138-5p mimic+HOTTIP mut、mimic NC+tjp1 3′UTR wt、miR-138-5p mimic+tjp1 3′UTR wt、mimic NC+tjp1 3′UTR mut、miR-138-5p mimic+tjp1 3′UTR mut分别设为mimic NC+HOTTIP wt组、miR-138-5p mimic+HOTTIP wt组、mimic NC+HOTTIP mut组、miR-138-5p mimic+HOTTIP mut组、mimic NC+tjp1 3′UTR wt组、miR-138-5p mimic+tjp1 3′UTR wt组、mimic NC+tjp1 3′UTR mut组、miR-138-5p mimic+tjp1 3′UTR mut组。CCK8实验检测细胞的顺铂敏感性,平板克隆检测细胞克隆形成,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot实验检测外泌体标志蛋白CD63和CD81、tjp1及耐药相关蛋白P-gp、MCL-1的表达,双荧光素酶实验验证lncRNA HOTTIP、miR-138-5p和tjp1之间的靶向关系。观察指标:(1)lncRNA HOTTIP的表达情况。(2)血清外泌体介导lncRNA HOTTIP对胃癌细胞顺铂的耐药情况。(3)过表达lncRNA HOTTIP通过miR-138-5p对胃癌细胞顺铂耐药的调控情况。(4)miR-138-5p靶向tjp13′非编码区检测情况。(5)抑制miR-138-5p通过tjp1对胃癌细胞顺铂耐药的调控情况。正态分布的计量资料以x±s表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey′s检验。计数资料以绝对数表示,组间比较采用χ^(2)检验。相关性分析采用Pearson检验。结果(1)lncRNA HOTTIP的表达情况。lncRNA HOTTIP在胃癌患者血清外泌体中的表达高于在健康志愿者血清外泌体中的表达,差异有统计学意义(P1的表达。(2)血清外泌体介导lncRNA HOTTIP对胃癌细胞顺铂的耐药情况。与PBS组比较,Exo组半抑制浓度(IC50)、细胞克隆形成数、侵袭细胞数、迁移细胞数、P-gp蛋白表达和MCL-1蛋白表达均升高,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P1蛋白表达均降低,细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P138-5p对胃癌细胞顺铂耐药的调控情况。与vector组比较,oe-HOTTIP组IC50、细胞克隆形成数、侵袭细胞数、迁移细胞数、P-gp蛋白表达和MCL-1蛋白表达均升高,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与oe-HOTTIP+m

关键词：胃肿瘤血清外泌体 lncRNA HOTTIP miR-138-5p tjp1 顺铂耐药

miR-191-5p通过靶向tjp1调控Cal-27细胞增殖、侵袭和迁移的体外研究

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口腔医学 2023年第11期43卷 981-988页

作者：佟雪溪赵刚佳木斯大学口腔医学院黑龙江佳木斯154004 黑龙江省口腔生物材料与临床应用重点实验室黑龙江佳木斯154004

目的探讨miR-191-5p调控OSCC细胞的生物学功能及作用机制。方法利用生物信息学方法分析miR-191-5p在口腔鳞癌患者样本中的表达情况并通过相关数据库筛选出可能的靶基因tjp1,通过双荧光素酶实验验证二者的靶向关系。体外转染分为空白组、... 详细信息

目的探讨miR-191-5p调控OSCC细胞的生物学功能及作用机制。方法利用生物信息学方法分析miR-191-5p在口腔鳞癌患者样本中的表达情况并通过相关数据库筛选出可能的靶基因tjp1,通过双荧光素酶实验验证二者的靶向关系。体外转染分为空白组、inhibitor NC(阴性对照组)和miR-191-5p inhibitor(敲低miR-191-5p组)。敲低miR-191-5p后通过qRT-PCR验证转染效率,CCK-8增殖实验、细胞克隆实验、Transwell、划痕实验分别检测miR-191-5p对Cal-27细胞的增殖能力、侵袭和迁移能力的影响;Western blotting检测tjp1蛋白及上皮间质转化相关蛋白的表达。将siRNA-tjp1转染到miR-191-5p低表达的细胞中,观察同时下调tjp1后对Cal-27细胞的增殖和迁移能力的影响。结果miR-191-5p在OSCC组织和细胞中表达上调,而下调miR-191-5p可抑制Cal-27细胞的增殖、侵袭和迁移能力以及上皮间质转化趋势;miR-191-5p可靶向抑制tjp1的表达,同时tjp1的下调逆转了敲低miR-191-5p对Cal-27细胞增殖和迁移的抑制。结论miR-191-5p通过靶向tjp1抑制OSCC细胞的增殖、侵袭和迁移,并可能通过调控EMT途径增加肿瘤的转移。

关键词：口腔鳞癌 miR-191-5p tjp1 增殖侵袭迁移上皮间质转化

ZO-1不同功能片段在胃癌中表达意义的研究

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ZO-1不同功能片段在胃癌中表达意义的研究

作者：申发燕福建医科大学

学位级别：硕士

[背景和目的]胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,中国是胃癌高发区域,研究发现ZO-1是上皮细胞癌发生发展的机制之一。本科室前期的RT-PCR研究结果表明ZO-1α+ mRNA在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达量未发现明显差异,而免疫组化研... 详细信息

[背景和目的]胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,中国是胃癌高发区域,研究发现ZO-1是上皮细胞癌发生发展的机制之一。本科室前期的RT-PCR研究结果表明ZO-1α+ mRNA在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达量未发现明显差异,而免疫组化研究结果却发现ZO-1蛋白表达的定位变化参与了胃癌的进展,即ZO-1蛋白出现了胞膜异位至胞浆的迷离表达。ZO-1包含有三个PDZ结构域、一个SH3、GUK、ABR、ZU5结构域和一个α基序,为了进一步探讨ZO-1不同功能片段在胃癌进展过程中的作用,我们选择了ZO-1(α-pan)(主要检测PDZ3、SH3结构域、GUK结构域和α基序)、ZO-1(α+)(主要检测α基序)、ZO-1(α-)(主要检测α基序剪切后连接位点两端的10个氨基酸残基)和ZO-1(H-300)(主要检测ZU5结构域),ZO-1四种不同的功能片段进行免疫组化技术染色,从而进一步探讨ZO-1的不同功能片段的表达模式与胃癌生物学行为的相关性。 [方法]收集从2008年11月至2009年6月间福建医科大学附属第一医院手术的199例胃癌病例存档蜡块,制作6×5、6×4的组织芯片。组织芯片选取5个具有代表性的位点,即正常胃粘膜、粘膜层胃癌组织、肿瘤中心区胃癌组织、侵袭前沿区胃癌组织和淋巴结转移灶胃癌组织。应用免疫组织化学方法检测ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)、ZO-1(α-)和ZO-1(ZU5)在不同位点胃癌组织中的表达模式。 [结果] 1.粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)较正常胃粘膜,出现了明显的胞膜异位至胞浆的迷离表达或不表达(P1(ZU5)的迷离表达程度最重。 2.进展期胃癌中ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的迷离表达程度,从粘膜层胃癌到侵袭前沿区逐渐加剧,而淋巴结转移区较侵袭前沿区降低。 3.进展期胃癌粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)迷离表达水平,较早期胃癌更为加剧(P1(ZU5)的迷离表达水平差异最为明显。 4.在粘膜层胃癌区、肿瘤中心区、侵袭前沿区和淋巴结转移区,胃癌组织的ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的迷离表达程度均与组织学分型相关(P1(ZU5)还与患者的年龄相关;在粘膜层胃癌组织中ZO-1的三个不同功能片段的表达还与年龄和浸润深度相关。 5. 199例胃癌病例的粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)表达水平进行比较发现, ZO-1(α+)与ZO-1(ZU5)的表达水平和ZO-1(α-pan)与ZO-1(ZU5)的表达水平具有明显差异(P170例进展期胃癌的肿瘤中心区胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)表达水平进行比较发现,ZO-1(α-pan)与ZO-1(ZU5)表达水平具有明显差异(P128例淋巴结转移区胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)表达水平进行比较发现, ZO-1(α+)与ZO-1(ZU5)的表达水平和ZO-1(α-pan)与ZO-1(ZU5)的表达水平具有明显差异(P1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的表达水平不具有明显的相关性,而在粘膜层胃癌区、肿瘤中心区、侵袭前沿区和淋巴结转移区,ZO-1三个不同功能片段的相关性明显增强,粘膜层胃癌区ZO-1三个不同功能片段的相关性最强。 9. ZO-1(α-)抗体来源于荷兰猪,预实验使用多种试剂盒检测,包括即用型SP检测试剂盒(美国LabVision公司产品)、即用型快速免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒(KIT-5010,美国LabVision公司产品)、第二代通用型二步法检测系统(pv-9000,美国GBI公司产品),通用型SP系列工作液试剂盒(SP-9000,美国Zymed公司产品),大鼠两步法(非生物素)检测试剂盒(pv-6004,美国GBI公司产品),全自动多功能组织病理检测系统(Benchmark XT)试剂盒(美国VENTANA公司)等,未找到匹配的试剂盒,故无法检测。 [结论] 1.粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)较正常胃粘膜出现了胞膜异位至胞浆的迷离表达或不表达,提示ZO-1的PDZ3、GUK、SH3结构域、α基序和ZU5结构域参与了胃癌的发生过程;2.进展期胃癌病例从粘膜层胃癌区至肿瘤中心区至侵袭前沿区,癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的迷离表达程度逐渐加剧,提示ZO-1的PDZ3、GUK、SH3结构域、α基序和ZU5结构域是EMT发生的机制之一;3

关键词：胃癌 ZO-1 tjp1 基序 ZU5结构域组织芯片免疫组化