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作者：杨卓娣成都中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:1.构建四氯化碳诱导肝纤维化大鼠模型,研究桂枝茯苓丸的抗肝纤维化作用;2.构建肝纤维化细胞模型,研究桂枝茯苓丸对肝星状细胞活化的影响及机制,为临床应用桂枝茯苓丸治疗肝纤维化提供一定的基础研究依据。研究方法:腹腔注射40... 详细信息

研究目的:1.构建四氯化碳诱导肝纤维化大鼠模型,研究桂枝茯苓丸的抗肝纤维化作用;2.构建肝纤维化细胞模型,研究桂枝茯苓丸对肝星状细胞活化的影响及机制,为临床应用桂枝茯苓丸治疗肝纤维化提供一定的基础研究依据。研究方法:腹腔注射40%四氯化碳溶液构建大鼠肝纤维化模型。分别使用高剂量（1.8g/kg/d）,中剂量（0.9g/kg/d）,低剂量（0.45g/kg/d）桂枝茯苓丸药液灌胃治疗4周。Kaplan-Meier法计算大鼠生存率;观察肝脏组织形态（大体形态、HE染色和Masson染色比较大鼠肝脏病理变化、运用Ishak评分和IOD值评估肝纤维化程度）;全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT、AST含量。使用tgf-β1诱导人肝星状细胞（LX-2细胞）活化构建肝纤维化细胞模型,使用桂枝茯苓丸药液干预。CCK8法检测细胞活力;Western Blot法检测细胞α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、smad2、p-smad2、MMP3、MMP9、TIMP1、TIMP3水平;免疫荧光染色检测细胞p-smad2水平及细胞内分布情况。研究结果:1.桂枝茯苓丸治疗肝纤维化的药效学研究:（1）大鼠生存率:药物干预第4周末,模型对照组生存率为50%,低、中、高剂量桂枝茯苓丸组大鼠生存率分别为:58%,67%,75%。（2）大鼠肝脏组织形态:肝脏大体形态方面,模型对照组肝脏普遍缩小,表面粗糙,与周围组织粘连较严重。桂枝茯苓丸干预改善了上述病变,与模型对照组相比,桂枝茯苓丸各剂量治疗组大鼠肝脏表面粗糙程度减轻,与周围组织粘连减轻;HE及Masson染色结果显示,模型对照组大鼠肝组织小叶结构破坏,部分肝细胞变性坏死,与模型对照组相比,各治疗组大鼠肝组织结构尚清晰,肝细胞变性坏死较少,肝窦狭窄程度减轻,肌成纤维细胞数量减少,胶原纤维增生较少,纤维细长且着色浅;高剂量桂枝茯苓丸组Ishak评分及相对IOD较模型对照组降低（P2.桂枝茯苓丸对肝星状细胞的作用机制:Western Blot结果显示,与空白对照组相比,桂枝茯苓丸对未经诱导活化的LX-2细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、p-smad2、MMP3、MMP9、TIMP1、TIMP3表达均无明显影响（P>0.05）。与tgf-β1组相比,桂枝茯苓丸干预,下调tgf-β1诱导的LX-2细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、p-smad2、TIMP1、TIMP3水平（Ptgf-β1组相比,桂枝茯苓丸干预减少tgf-β1诱导的LX-2细胞中p-smad2的核易位。研究结论:1.桂枝茯苓丸能够降低CCl诱导肝纤维化大鼠死亡风险,减少大鼠肝脏胶原纤维增生,缓解肝纤维化引起的肝脏结构组织病变,改善CCl造成的大鼠肝功能损伤,具有一定抗肝纤维化作用。2.桂枝茯苓丸的抗肝纤维化作用,部分是通过调控tgf-β1/smad2通路信号传导,抑制肝星状细胞活化,调节ECM降解,缓解ECM累积产生的。

关键词：桂枝茯苓丸肝纤维化细胞外基质肝星状细胞 tgf-β1/smad2通路

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糖皮质激素抑制结肠癌细胞增殖和侵袭的作用机制

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基因组学与应用生物学 2020年第3期39卷 1395-1400页

作者：杜春马丽波陈春华陈平马丽丽内蒙古医科大学附属医院呼和浩特010050 内蒙古医科大学第二附属医院呼和浩特010050

本研究目的是为了证实地塞米松对结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用,并阐明其中的分子机制。LoVo细胞经不同浓度梯度地塞米松干预,再加入tgf-β1受体抑制剂SB431542阻断tgf-β1信号传导途径,通过MTS分析各组细胞增殖情况,借助Hoechst 33342... 详细信息

本研究目的是为了证实地塞米松对结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用,并阐明其中的分子机制。LoVo细胞经不同浓度梯度地塞米松干预,再加入tgf-β1受体抑制剂SB431542阻断tgf-β1信号传导途径,通过MTS分析各组细胞增殖情况,借助Hoechst 33342和Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡率;结合Western blotting对tgf-β1、smad2和caspase-3蛋白表达情况的检测结果,分析地塞米松诱导结肠癌LoVo细胞凋亡的作用机理。LoVo细胞在1.0 mmol/L和10.0 mmol/L地塞米松干预48 h后,细胞增殖率与对照组相比分别降低32%(p1)和47%(p1),2组细胞凋亡率分别为28%和36%(p1)。Western blotting结果显示,与对照组相比,地塞米松以浓度依赖性方式显著上调LoVo细胞tgf-β1、smad2和Cleavedcaspase-3蛋白水平(p1),而tgf-β1受体抑制剂SB431542明显下调tgf-β1、smad2和Cleaved-capase-3蛋白表达(p1542+地塞米松干预组与地塞米松处理组LoVo细胞凋亡率分别为8%和23%(p1)。地塞米松可显著诱导LoVo细胞凋亡,而SB431542能够挽救这一过程,这表明,地塞米松通过tgf-β1/smad2通路诱导LoVo细胞凋亡。

关键词：结肠癌地塞米松 SB431542 细胞凋亡 tgf-β1/smad2通路

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褪黑素通过激活SIRT1/NF-κB/tgf-β1/smad2抑制骨关节炎大鼠软骨细胞基质降解机理研究

褪黑素通过激活SIRT1/NF-κB/TGF-β1/Smad2抑制骨关节炎大鼠软骨...

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作者：赵明超东北农业大学

学位级别：硕士

骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种常见的关节退行性病变,伴有疼痛症状,以软骨细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分解合成代谢失衡为特征。褪黑素(Melatonin,MT)是由脑松果体分泌的激素之一,拥有抗炎、抗氧化、抗衰老和... 详细信息

骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种常见的关节退行性病变,伴有疼痛症状,以软骨细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分解合成代谢失衡为特征。褪黑素(Melatonin,MT)是由脑松果体分泌的激素之一,拥有抗炎、抗氧化、抗衰老和调节昼夜节律等功能。沉默信息调节因子2相关酶1(NAD-dependent deacetylasesirtuin-1,SIRT1)是一种依赖于NAD的核组蛋白去乙酰化酶,参与衰老、凋亡、炎症等多种过程的调控,其去乙酰化能力能够通过调节多种通路而发挥保护作用。论文通过在体内试验采用前交叉韧带切断(anterior cruciate ligament transection,ACLT)建立大鼠OA模型,观察褪黑素对软骨形态、基质和代谢指标的变化,离体试验探究褪黑素对软骨细胞中SIRT1表达的影响并引入SIRT1抑制剂EX527,检测NF-κB和tgf-β1/smad2通路相关蛋白和软骨细胞基质损伤相关蛋白的表达情况。旨在探究褪黑素对大鼠OA软骨的影响,并探讨其作用机制。在体试验分为对照组,模型组,褪黑素治疗组(30 mg/kg)三组,每两天一次,连续给药12周,12周后处死。取各组关节制成组织切片,番红O固绿染色观察各关节软骨及其ECM的病理变化,免疫组织化学检测软骨组织中Aggrecan、Ⅱ型胶原、MMP3、MMP13和ADAMTS-4的表达。ELISA检测大鼠血清中TNF-α、COX-2、PGE2和i NOS含量的变化。离体试验分为对照组、模型组(IL-1β)、褪黑素组(IL-1β+100、200、400、800 ng/m L)、阴性对照组(IL-1β+EX527)、抑制剂组(IL-1β+褪黑素+EX527)。提取大鼠膝关节软骨细胞离体培养至二代进行处理,提取蛋白及RNA,采用Western blot检测p-65、p-p65、IκBα、p-IκBα、tgf-β1、smad2蛋白变化。采用q PCR检测SIRT1、MMP3、MMP13、ADAMTS-4、COX-2、和COL2a1基因变化。免疫荧光检测SIRT1、p-p65、p-smad2核转位。在体试验发现,造模组软骨严重磨损、软骨变薄、水肿、基质红染变浅且不均匀,褪黑素组软骨增厚,基质红染相对较深且均匀。免疫组化显示造模组MMP3、MMP13和ADAMTS-4表达量升高,Aggrecan和Ⅱ型胶原表达量降低,褪黑素显著下调了MMP3、MMP13和ADAMTS-4的表达,增加了Aggrecan和Ⅱ型胶原的表达。造模组血清中TNF-α、COX-2、PGE2和i NOS表达量升高,褪黑素组也显著改变了这一趋势。离体结果发现,IL-1β组中SIRT1和COL2a1表达降低,褪黑素上调了其表达量,但是抑制剂的加入改变了这种情况。IL-1β组中p-p65、p-IκBα、MMP3、MMP13、ADAMTS-4、COX-2和i NOS表达量升高,褪黑素组显著降低了其表达,抑制剂的加入逆转了这种趋势。另外,IL-1β抑制了tgf-β1和smad2蛋白表达量,褪黑素组显著恢复了其表达,而抑制剂EX527的加入并不能改变这种趋势。试验结果表明:褪黑素能够减少软骨基质降解酶MMP3、MMP13、ADAMTS-4和炎性因子的分泌,增加Ⅱ型胶原和Aggrecan表达。褪黑素能够通过激活SIRT1/NF-κB/tgf-β1/smad2途径抑制IL-1β诱导的大鼠软骨细胞基质降解。本试验为探究褪黑素在OA中的治疗效果及作用机制提供了新的理论支持,为缓解OA进展提供新的靶点。

关键词：骨关节炎褪黑素软骨细胞 SIRT1 NF-κB通路 tgf-β1/smad2通路

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