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The Epstein-Barr virus-miRNA-BART6-5p regulates tgf-β/smad4 pathway to induce glycolysis and enhance proliferation and metastasis of gastric cancer cells

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Oncology Research 2024年第5期32卷 999-1009页

作者： XUHUI ZHAO XIAOMIN HUANG CHUNYAN DANG XIA WANG YUJIAO QI HONGLING LI The First Clinical Medical College Gansu University of Traditional Chinese MedicineLanzhou730000China Department of Oncology Gansu People’s HospitalLanzhou730000China The Clinical Medical College Ningxia Medical UniversityNingxia750004China

Background:EBV-miR-BARTs exhibit significant relevance in epithelial tumors,particularly in EBVassociated gastric and nasopharyngeal cancers.However,their specific mechanisms in the initiation and progression of gastric cancer remain insufficiently explored.Material and Methods:Initially,EBV-miRNA-BART6-5p and its target gene smad4 expression were assessed in EBV-associated gastric cancer tissues and cell lines.Subsequent transfection induced overexpression of EBV-miRNA-BART6-5p in AGS and MKN-45,and downregulation in EBVpositive cells(SUN-719).The subsequent evaluation aimed to observe their impact on gastric cancer cell proliferation,migration,and glycolytic processes,with the tgf-β/smad4 signaling pathway value clarified using a tgf-βinhibitor.Results:EBV-miRNA-BART6-5p exhibits pronounced upregulation in EBV-associated gastric cancer tissues and EBV-positive cells,while its target gene smad4 demonstrates downregulated expression.Upregulation of it can promote the proliferation and migration of gastric cancer cells.Additionally,We found EBV-miRNA-BART6-5p promotes glycolysis of gastric cancer cells.Inhibition of the tgf-β/smad4 signaling pathway resulted in suppressed proliferation and migration of gastric cancer cells,concomitant with a diminished glycolytic capacity.Conclusion:In this study,we found that EBV-miRNA-BART6-5p can target smad4,effectively increasing glycolysis in gastric cancer cells by regulating the tgf-β/smad4 signaling pathway,thereby enhancing the proliferation and metastasis of gastric cancer cells.Our findings may offer new insights into the metabolic aspects of gastric cancer.

关键词： EBV tgf-β/smad4 Glycolysis Gastric cancer

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下调骨细胞tgf-β/smad4信号可抑制小鼠BMSCs成骨及破骨分化

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基础医学与临床 2017年第6期37卷 786-791页

作者：代光明任磊陈虹刘文陈宇何小强刘伟涂小林黄伟重庆医科大学附属第一医院骨科重庆400016 重庆医科大学生命科学研究院骨发育与再生实验室重庆400016

目的检测骨细胞tgf-β/smad4信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和破骨分化的作用,并初步探讨其相关机制。方法用条件性基因敲减Cre/loxp技术特异性敲减骨细胞smad4,获得下调骨细胞tgf-β/smad4信号通路的小鼠;体外分离骨细胞并与... 详细信息

目的检测骨细胞tgf-β/smad4信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和破骨分化的作用,并初步探讨其相关机制。方法用条件性基因敲减Cre/loxp技术特异性敲减骨细胞smad4,获得下调骨细胞tgf-β/smad4信号通路的小鼠;体外分离骨细胞并与野生型小鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(alizarin red)染色检测早期成骨分化和晚期钙盐沉积,酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞;real-time PCR检测成骨分化特异标志物Runx2、Osterix(OSX)、ALP、osteocalcin和破骨分化特异标志物RANKL和OPG的mRNA表达水平。Western blot检测成骨分化特异标志物Runx2和osteocalcin和破骨分化特异标志物RANK蛋白表达水平。结果下调骨细胞tgf-β/smad4信号能够抑制BMSCs成骨转录因子Runx2、Osterix(Ptgf-β/smad4信号可抑制BMSCs成骨和破骨细胞的分化。

关键词：骨细胞 tgf-β/smad4 BMSCs 成骨分化破骨分化

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痛泻要方调控tgf-β/smad4信号通路干预结肠炎相关性结肠癌的实验研究

痛泻要方调控TGF-β/SMAD4信号通路干预结肠炎相关性结肠癌的实验...

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作者：喻凤成都中医药大学

学位级别：硕士

目的结肠癌作为我国常见恶性肿瘤近年来有上升趋势,炎症性肠病患者有很高的几率进展为恶性结肠癌。在防止炎症进一步发展为癌症的过程中,中医药有较好的预防效果,但是在“炎-癌”转化的过程中涉及到多条信号通路的参与,对中医药干预其... 详细信息

目的结肠癌作为我国常见恶性肿瘤近年来有上升趋势,炎症性肠病患者有很高的几率进展为恶性结肠癌。在防止炎症进一步发展为癌症的过程中,中医药有较好的预防效果,但是在“炎-癌”转化的过程中涉及到多条信号通路的参与,对中医药干预其的相关机制不明确。通过建立相关疾病模型并对主要相关细胞因子进行检测,对中医药干预结肠炎相关结肠癌的机制进行初步探讨。方法通过AOM联合DSS的方法成功复制出结肠炎相关结肠癌动物模型,采用痛泻要方高、中、低剂量进行灌胃。实验过程中,我们以小鼠疾病活动指数和定期称重来判断一般情况,我们在一定的时间点随机选取小鼠处死后取材,测量结肠长度,HE染色镜下观察炎细胞浸润、肠道隐窝损伤、不典型增生以及癌变情况,免疫组化法观察小鼠结肠tgf-β1、smad4表达,ELISA法检.测小鼠血清TNF.-α、CCL20含量,RT-PCR法检测小鼠结肠TNF-αmRNA、CCL20 mRNA表达。结果1.造模时间历时7个星期共49天,在第4周以及第5周围炎症高发期,小鼠在实验周期内出现体重下降、毛发脱落、稀便及便血,取材后观察肠道组织有炎细胞浸润及癌变。2.与空白组相比,模型组小鼠疾病活动指数、体重变化、结肠.长度(Psmad4表.达高于其他组(Psmad4表达较高(Psmad4表达(Psmad4的表达。与空白组比,模型组小鼠tgf-β1表达(Ptgf-β1表达(Ptgf-β14表达(Ptgf-β1、smad4含量,发挥抑制炎症发展作用3.痛泻要方干预结肠炎相关结直肠癌的机制可能与上调tgf-β1、smad4抑制TNF-α、CCL20表达有关。

关键词：痛泻要方结肠炎相关性结肠癌 tgf-β/smad4

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以Th17/Treg为中心研究黄芪、莪术对CT26.WT原位移植瘤小鼠肿瘤转移的影响

以Th17/Treg为中心研究黄芪、莪术对CT26.WT原位移植瘤小鼠肿瘤转...

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作者：齐卓操南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:黄芪、莪术作为经典的补气活血药对已被证实具有良好的抗肿瘤作用。目前已有报道阐释Th17/Treg平衡与肿瘤免疫调控关系密切。本文以中医理论为指导,文献研究黄芪、莪术配伍调控Th17/Treg平衡在结肠癌转移过程中的作用。并运用动物... 详细信息

目的:黄芪、莪术作为经典的补气活血药对已被证实具有良好的抗肿瘤作用。目前已有报道阐释Th17/Treg平衡与肿瘤免疫调控关系密切。本文以中医理论为指导,文献研究黄芪、莪术配伍调控Th17/Treg平衡在结肠癌转移过程中的作用。并运用动物实验,选用BALB/c雄性小鼠造模,建立CT26.WT结肠癌(CC)原位移植瘤模型,观察给药后小鼠原位瘤生长及肝转移情况,计算脾指数及胸腺指数,检测辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞及上皮-间质转化(EMT)相关分子表达,探究以Th17/Treg细胞为核心的转化生长因子-β(tgf-β)/smad4及EMT关系,以冀为结肠癌临床治疗提供可行性依据。方法:1.在BALB/c雄性小鼠上建立CT26.WT结肠癌原位移植瘤模型,模型小鼠按体重随机分为模型,5-FU,黄芪、莪术(2:1)高(12 g·kg-1),中(6 g·kg-1),低(3 g·kg-1)组及联合5-FU高、中、低组,初步计算给药后各组荷瘤小鼠体重、平均瘤重情况;观察小鼠给药过程中的生存状态;计算原位移植瘤生长、转移相关指数抑瘤率、肝转移率;计算免疫相关指数脾指数、胸腺指数;2.Flow CytoMetry检测外周血及脾组织CD4+T淋巴细胞中Th17/Treg细胞百分比变化;3.Elisa 检测血清 IL-17、IL-23、IL-10、IL-6、IL-21、IL-22 等水平;4.Real time-PCR法检测小鼠原位移植瘤组织与血液中tgf-β、TNF-α、IFN-γ、smad4、N-cadherin、MMP-7mRNA 表达;5.Western Blot法检测小鼠原位移植瘤组织与血液中tgf-β、TNF-α、IFN-γ、smad4、N-cadherin、MMP-7 蛋白表达。结果:1.CT26.WT结肠癌原位移植瘤模型在BALB/c雄性小鼠上成功建立,造模全部成功。给药后,各组小鼠平均瘤重结果表明,与模型组相比,黄芪莪术高、中、低组联合5-FU组均可明显抑制肿瘤生长,具有显著性统计学差异(P4+IL-17+均有不同程度降低(P4+Foxp3+细胞比例均升高(P4.RT-PCR结果提示,除个别给药组mRNA表达无差异外,与模型组相比,黄芪、莪术配伍联合5-FU组可降低原位移植瘤及血液tgf-β、TNF-α、IFN-γ、smad4、N-cadherin 及 MMP-7 mRNA 表达(Ptgf-β、TNF-α、IFN-γ、smad4、N-cadherin及MMP-7 mRNA表达柱状图提示,黄芪、莪术药对联合5-FU能够显著降低结肠癌免疫及转移相关指标,表明联合组治疗结肠癌生长及转移效果优于中药组单用及阳性药组。5.Western blot结果提示,与模型组相比,各组小鼠原位移植瘤组织及血液tgf-β、TNF-α、IFN-γ、smad4、N-cadherin 及 MMP-7 蛋白表达均降低(Ptgf-β、TNF-α、IFN-γ、smad4、N-cadherin及MMP-7蛋白表达。联合组蛋白低于黄芪莪术组及5-FU组。各组小鼠原位移植瘤tgf-β、TNF-α、IFN-γ、smad4、N-cadherin及MMP-7蛋白电泳结果表明,联合组蛋白表达降低程度显著。结论:补气活血药对黄芪、莪术配伍联合5-FU不仅能够有效抑制CT26.WT模型小鼠原位移植瘤的生长及转移,更能提高小鼠免疫功能,维持免疫微环境稳态。其机制可能与维持Th17/Treg平衡,调控tgf-β/smad4表达,继而抑制tgf-β/smad4介导的EMT有关。

关键词：黄芪莪术结肠癌 Th17/Treg平衡 EMT tgf-β/smad4 转移

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活络效灵丹对2型糖尿病SD大鼠的作用和对血管平滑肌细胞表型转化影响初探

活络效灵丹对2型糖尿病SD大鼠的作用和对血管平滑肌细胞表型转化...

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作者：高姗姗北京中医药大学

学位级别：硕士

国内外众多研究显示DM的血管并发症问题也成问了困扰广大病患的一大难题,给患者造成了巨大的精神负担和经济压力。因此对于DM血管并发症的治疗就显得尤为重要。目前,中医中药在DM血管并发症方面取得了一定的疗效,特别是延缓坏疽,糖尿病... 详细信息

国内外众多研究显示DM的血管并发症问题也成问了困扰广大病患的一大难题,给患者造成了巨大的精神负担和经济压力。因此对于DM血管并发症的治疗就显得尤为重要。目前,中医中药在DM血管并发症方面取得了一定的疗效,特别是延缓坏疽,糖尿病足等方面有突出表现,这显示出了中医中药在DM血管并发症方面的预防和治疗方面有着极大潜力和广阔的前景。活络效灵丹,从方名上理解,“活络”即通经活络,活血祛瘀,目前广泛应用于临床。从组方来看,丹参、芍药、乳香没药四药合用,能够活血化瘀通条二焦水道,是中西医结合治疗血管疾病的常用药。研究表明此方对于糖尿病肾病的患者而言,能够降低血BUN、SCr降低,24小时尿蛋白减少,全血粘度和纤维蛋白原较对照组治疗后均改善显著。本课题之前的实验也显示,活络效灵丹对于抑制高脂喂养家兔动脉粥样硬化方面也有显著效果。为了更加深入的探讨活络效灵丹对于糖尿病血管病的研究,本实验小组进行了进一步的探索。本课题通过建立2TDM大鼠模型,从对2TDM大鼠生化指标的研究和对于VSMC表型转化机制探讨两个方面,对于中医中药在治疗DM血管并发症方面的作用进行初步探讨。研究目的：1、通过活络效灵丹作用于2TDM大鼠,通过中药干预,观察实验前后大鼠血糖值、葡萄糖耐量,体重的作用,分析活络效灵丹对治疗2TDM大鼠的生物学作用。2、通过活络效灵丹作用于2TDM大鼠,通过中药干预,以2型糖尿病大鼠VSMC的tgf-β/smad4信号表达途径为切入点,通过观察VSMC表型转化过程中PDGF-BB以及相关标志蛋白SM22a和OPN含量从而研究活络效灵丹对防治糖尿病血管病的作用机制。研究方法1、80只SD大鼠分为对照组、模型组、二甲双胍组和中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,后五组高脂喂养8周时,腹腔注射小剂量链脲霉素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型,予药物灌胃4周后,观察大鼠的一般情况,动态监测各组大鼠体重、空腹血糖值、以及给药前,给药后2周和4周的葡萄糖耐量。2、80只SD大鼠分为对照组、模型组、阿司匹林组和中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,后五组高脂喂养8周时,腹腔注射小剂量链脲霉素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型。活络效灵丹连续灌胃,各组给药30天后处死。取大鼠颈动脉切片,HE染色观察血管平滑肌细胞病理变化,实时荧光定量PCR法检测颈动脉PDGF-BB、SM22α、 smad4和OPN表达。研究结果：1、给药4周后,与模型组相比,中药组可降低糖尿病大鼠空腹血糖(p西药组>低剂量组>高剂量组,表明活络效灵丹对2型糖尿病的治疗有着积极地作用。2、活络效灵丹能有效降低VSMC表型转化,而且能够干扰tgf-β/smad4信号通路,下调smad4,上调SM22α,同时具有拮抗作用的PDGF-BB表达下降,合成表型的标志蛋白OPN表达随之下降。

关键词：活络效灵丹血管平滑肌表型转化 PDGF-BB tgf-β/smad4 SM22α OPN

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