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TβR-Ⅱ-RANTES融合基因重组腺病毒的抗肿瘤作用

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中华肿瘤杂志 2007年第6期29卷 405-410页

作者：王旭东刘虹曹水李慧任秀宝郝希山天津医科大学附属肿瘤医院免疫治疗中心教育部乳腺癌防治重点实验室 300060

目的构建表达融合基因tgf-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)胞外区及活化T细胞表达和分泌的调节因子(RANTES)重组腺病毒载体,并观察其抗肿瘤作用。方法RT-PCR扩增小鼠TβR-Ⅱ胞外区和RANTES基因,重叠PCR扩增融合基因TβR-Ⅱ胞外区-RANTES。采用adMax... 详细信息

目的构建表达融合基因tgf-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)胞外区及活化T细胞表达和分泌的调节因子(RANTES)重组腺病毒载体,并观察其抗肿瘤作用。方法RT-PCR扩增小鼠TβR-Ⅱ胞外区和RANTES基因,重叠PCR扩增融合基因TβR-Ⅱ胞外区-RANTES。采用adMax adenovjrus vector creation试剂盒构建表达融合基因重组腺病毒。体外感染小鼠肺腺痛LA795细胞系,绘制细胞生长曲线。采用Western blot法检测感染后细胞融合基因的表达;酶联免疫吸附试验(FLISA)法检测其培养上清的蛋白含量;Annexin V-FITC法检测感染后细胞的凋亡;并观察感染后细胞培养上清对小鼠脾细胞的趋化作用。将感染后的细胞(1×105个)接种于T739小鼠,观察成瘤时间和生存时间;1×1010pfu的重组腺病毒局部注射荷瘤小鼠,观察肿瘤的大小变化,并统计肿瘤的重量和计算抑瘤率。结果经测序证实,RT-PCR正确扩增小鼠TβR-Ⅱ胞外区和RANTFS基因,重叠PCR正确扩增融合基因TβR-Ⅱ胞外区-RANTES。重组质粒pDC316-融合基因经酶切鉴定正确,与pJM17双质粒共转染获得表达融合基因重组腺病毒,病毒滴度为8×1010pfu/ml。Western blot结果表明,感染后的LA795细胞有融合蛋白的特异性条带出现;培养上清中,游离tgf-β1的水平显菩减低,而RANTES的水平显著升高。感染融合基因重组腺病毒的细胞生长速度明显减低,凋亡率为16.9%;培养上清可趋化小鼠脾细胞,与对照组之间差异均有统计学意义。感染融合基因重组腺病毒组与对照组相比,体内成瘤时间和生存时间明显延长;局部注射融合基因重组腺病毒可显著抑制肿瘤的生长,抑瘤率为37.6%。结论成功构建表达融合基因TβR-Ⅱ胞外区-RANTES重组腺病毒可有效结合tgf-β1,显著逆转tgf-β介导的免疫抑制状态,高水平表达RANTES强化肿瘤局部的免疫功能,具有显著的抗肿瘤作用。

关键词： tgf—β RANTES 融合基因重组腺病毒载体肿瘤

tgf-β不敏感前列腺癌特异性CTLs的制备及其抗癌作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第5期16卷 458-463页

作者：杨阔徐勇曹现祥张婷于明杰畅继武天津市泌尿外科研究所天津市泌尿外科重点实验室天津300211 天津医科大学第二医院泌尿外科天津300211 济宁医学院附属医院泌尿外科济宁272013 天津泰达医院泌尿外科天津300457

目的:制备tgf-β不敏感前列腺癌特异性CTLs,观察其对前列腺癌的治疗作用。方法:分离前列腺癌患者外周血单个核细胞,体外诱导DCs;制备该患者前列腺癌肿瘤抗原,冲击DCs后诱导肿瘤特异性CTLs;用携带TβRⅡDNglytk基因的慢病毒感染肿瘤特异... 详细信息

目的:制备tgf-β不敏感前列腺癌特异性CTLs,观察其对前列腺癌的治疗作用。方法:分离前列腺癌患者外周血单个核细胞,体外诱导DCs;制备该患者前列腺癌肿瘤抗原,冲击DCs后诱导肿瘤特异性CTLs;用携带TβRⅡDNglytk基因的慢病毒感染肿瘤特异性CTLs;Western blotting检测TβRⅡDNglytk感染后CTLs对tgf-β的敏感性。分别以tgf-β敏感和不敏感CTLs治疗小鼠前列腺癌移植瘤,比较其疗效。结果:前列腺癌组织抗原冲击后DCs诱导的肿瘤特异性CTLs生长速度快于未冲击DCs组(Ptgf-β敏感性减弱。tgf-β不敏感的CTLs可显著抑制荷瘤鼠前列腺癌的生长(Ptgf-β不敏感前列腺癌特异性CTLs对小鼠前列腺移植瘤有明显的治疗作用,为前列腺癌免疫治疗奠定了一定的实验基础。

关键词：前列腺肿瘤 tgf—β 慢病毒 CTLs 树突状细胞

树突状细胞共表达tgf-β和自身抗原表位的体外研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第10期24卷 759-764页

作者：张燕沈茜第二军医大学附属长海医院实验诊断科上海200433

目的　用共表达转化生长因子 β(tgf β)和实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)自身抗原表位蛋白脂蛋白 (PLP)的重组腺病毒载体转染小鼠树突状细胞 (DC) ,检测转基因DC的表型特征和功能特点。方法　构建共表达tgf β和EAE自身抗原表位的重... 详细信息

目的　用共表达转化生长因子 β(tgf β)和实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)自身抗原表位蛋白脂蛋白 (PLP)的重组腺病毒载体转染小鼠树突状细胞 (DC) ,检测转基因DC的表型特征和功能特点。方法　构建共表达tgf β和EAE自身抗原表位的重组腺病毒载体转染小鼠骨髓造血细胞培养的DC。检测重组腺病毒的转染效率、转基因DC对抗脂多糖 (LPS)促成熟的能力、介导同种异体T细胞增殖能力、抗原递呈功能的改变、吞噬功能分析及表面表达自身抗原的情况。结果　该双表达重组腺病毒能高效转染DC并得到了正确表达 ,转基因DC比对照病毒载体更能对抗LPS的促成熟作用 ,它刺激同种T细胞增殖能力和抗原特异性增殖反应均受到一定程度的抑制 ,其抗原内吞能力较对照病毒载体增高。转基因DC在表达tgf β的同时 ,表达了自身致病抗原表位。结论　tgf β和PLP/Ig DC双基因修饰的DC可使DC维持在相对非成熟状态 ,在体外诱导T细胞抗原特异性低反应性。

关键词：自身抗原 DC 表位 tgf-β 树突状细胞共表达转染转基因 tgf—β 表面表达

tgf-β信号转导在放射性肺纤维化形成中的作用和意义

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中华放射医学与防护杂志 2005年第1期25卷 97-99页

作者：李广虎李志平四川大学华西医院肿瘤中心放疗科成都610041

放射性肺纤维化(radiation pulmonary fibrosis,RPF)是临床上胸部肿瘤放射治疗和骨髓移植预处理后常见的并发症.转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,tgf-β1)被公认为与RPF发生和形成关系最为密切的介导因子,是RPF形成的... 详细信息

放射性肺纤维化(radiation pulmonary fibrosis,RPF)是临床上胸部肿瘤放射治疗和骨髓移植预处理后常见的并发症.转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,tgf-β1)被公认为与RPF发生和形成关系最为密切的介导因子,是RPF形成的关键.笔者总结了近年来tgf-β信号转导的研究进展及其在RPF发病机理与防治中的作用.

关键词：放射性肺纤维化信号转导并发症 tgf—β 常见转化生长因子-β1 tgf-β1 介导

Iptakalim对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖及tgf-β和PCNA表达的影响

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中国生化药物杂志 2010年第3期31卷 158-161页

作者：王毅解卫平王虹周燕娟李庆玲南京医科大学基础医学院江苏南京210029 南京市胸科医院江苏南京210006 南京医科大学第一附属医院江苏南京210029 江苏省常州市武进人民医院江苏武进213002 江苏省徐州市第一人民医院江苏徐州221002

目的研究新型ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂Iptakalim(IPT)对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖及转化生长因子-β(tgf-β)和核增殖抗原(PCNA)表达的影响。方法原代培养HPASMC,随机分成对照组、低氧组、低氧+IPT10-7组、低氧+IPT... 详细信息

目的研究新型ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂Iptakalim(IPT)对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖及转化生长因子-β(tgf-β)和核增殖抗原(PCNA)表达的影响。方法原代培养HPASMC,随机分成对照组、低氧组、低氧+IPT10-7组、低氧+IPT10-6组和低氧+IPT10-5组,采用流式细胞技术检测细胞周期,用细胞免疫组织化学技术检测细胞tgf-β和PCNA表达部位分布,用Western-blot方法检测tgf-β和PCNA蛋白的表达量。结果缺氧24 h,G0/G1期细胞比例减少,S期比例增高,与对照组相比,差异具有统计学意义(Ptgf-β染色主要位于细胞浆和细胞膜,PCNA染色主要位于细胞核;Western-blot结果显示低氧组tgf-β和PCNA的表达高于对照组(Ptgf-β和PCNA的表达呈下降趋势,差异具有统计学意义(Ptgf-β和PCNA表达增高;IPT能浓度依赖性抑制这种作用,其机制可能与抑制tgf-β和PCNA的表达有关。

关键词： Iptakalim 低氧人肺动脉平滑肌细胞细胞增殖 tgf—β PCNA

肿瘤标志物CA242与细胞因子tgf-β联合检测对胰腺癌的诊断价值

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中国实用内科杂志 2006年第8期26卷 1179-1180页

作者：姜葵胡志东王邦茂钟述猷吕宗舜黄乃侠天津医科大学总医院消化科天津300052 天津医科大学总医院检验中心

目的探讨肿瘤标志物CA242与细胞因子tgf-β联合检测对诊断胰腺癌的临床价值。方法选择天津医科大学总医院2004年12月至2005年9月胰腺癌患者30例,采用ELISA方法检测血清CA242水平,其中20例同时检测tgf-β水平。对照组为健康志愿者20名。... 详细信息

目的探讨肿瘤标志物CA242与细胞因子tgf-β联合检测对诊断胰腺癌的临床价值。方法选择天津医科大学总医院2004年12月至2005年9月胰腺癌患者30例,采用ELISA方法检测血清CA242水平,其中20例同时检测tgf-β水平。对照组为健康志愿者20名。结果30例胰腺癌患者中CA242高于正常值者20例,平均值(312±5)kU/L;对照组中2例高于正常值,平均值(56±2)kU/L,Ptgf-β检测结果高于正常值者16例,平均值(245.31±25.12)ng/L;对照组中1例稍高于正常值(112.31ng/L,Ptgf-β的敏感性(80.0%),P0.05。结论CA242、tgf-β诊断胰腺癌的特异性均较高,tgf-β的敏感性高于CA242;两者联合检测可提高胰腺癌的诊断率。

关键词：肿瘤标志物 CA242 转化生长因子 tgf—β 胰腺癌

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愈骨胶囊促进兔骨折愈合的分子机制初探

中成药 2013年第11期35卷 2337-2341页

作者：王琴易美彤曾敏重庆市中医院重庆市中医特色治疗工程技术研究中心重庆400021 重庆市中医院病理科

目的初步探讨愈骨胶囊(血竭、骨碎补、续断、自然铜和延胡索)对新西兰兔桡骨骨折愈合的分子机制。方法将实验动物随机分成正常组、模型组、愈骨胶囊组和接骨七厘片组,柴本甫法造成骨折模型,于给药第2、4、6周进行生物力学测定,HE、Masso... 详细信息

目的初步探讨愈骨胶囊(血竭、骨碎补、续断、自然铜和延胡索)对新西兰兔桡骨骨折愈合的分子机制。方法将实验动物随机分成正常组、模型组、愈骨胶囊组和接骨七厘片组,柴本甫法造成骨折模型,于给药第2、4、6周进行生物力学测定,HE、Masson、甲苯胺兰染色观察骨痂组织病理变化,免疫组化观察愈骨胶囊对骨痂组织中转化生长因子-β(tgf-β),血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果与模型组相比,在第4、6周,愈骨胶囊组最大载荷,最大位移和弹性模数显著增加,有统计学差异(Ptgf-β的表达明显较模型组强。结论愈骨胶囊能使骨痂生长、塑形提前,促进骨折愈合,可能与提高骨痂组织内VEGF、tgf-β表达,完善骨痂内微血管重建有关。

关键词：愈骨胶囊骨折生物力学 VEGF tgf—β

NK1．1^＋细胞在实验性重症肌无力发病机制中的作用

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中国免疫学杂志 2008年第1期24卷 38-41,48页

作者：王菁华孙博李国忠王丹丹刘玉梅王琪穆莉莉金连弘李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室哈尔滨医科大学神经生物学黑龙江省高校重点实验室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科哈尔滨150081

目的:探讨NK1.1+细胞在重症肌无力疾病进展中发挥的作用以及其调节机制。方法:(1)用腹腔注射抗NK1.1抗体和抗tgf-β抗体的方法制造NK1.1+细胞缺陷和tgf-β缺陷的小鼠模型;(2)通过肌无力评分标准来评价试验组和对照组小鼠之间实验性自身... 详细信息

目的:探讨NK1.1+细胞在重症肌无力疾病进展中发挥的作用以及其调节机制。方法:(1)用腹腔注射抗NK1.1抗体和抗tgf-β抗体的方法制造NK1.1+细胞缺陷和tgf-β缺陷的小鼠模型;(2)通过肌无力评分标准来评价试验组和对照组小鼠之间实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的发病情况和病情严重程度的区别;(3)观察淋巴细胞增殖以及应用ELISA方法检测细胞因子tgf-β、抗AchRIgG的各种亚型。结果:(1)NK1.1+细胞缺陷的小鼠同对照组小鼠相比EAMG发病时间延迟且病情严重程度明显降低,但在免疫后7天用抗NK1.1处理却不能改变EAMG的临床病程。(2)NK1.1+细胞缺陷没有明显改变由AchR刺激产生的T细胞增殖反应,但由AchR特异性T细胞所产生的tgf-β有明显的增高。(3)经tgf-β中和抗体处理的NK1.1+细胞缺陷的小鼠其EAMG的进展明显加快。(4)NK1.1+细胞缺陷鼠血清中抗AchRIgG、AchRIgG2b亚型的含量下降。结论:NK1.1+细胞在EAMG的起始时发挥重要的作用,并且NK1.1+细胞的缺失将导致AchR特异性T细胞产生tgf-β的增加,从而抑制了重症肌无力的进展。

关键词：实验性自身免疫性重症肌无力 NK1.1^+ 细胞细胞因子 tgf—β

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抗细胞因子疗法治疗实验性急性坏死性胰腺炎

南京医科大学学报（自然科学版） 2006年第1期26卷 59-62页

作者：汪宝林许利剑张建平张明顺南京医科大学第二附属医院腹部外科江苏南京210011 南京医科大学微生物与免疫学系江苏南京210029

目的:观察实验性急性坏死性胰腺炎(acutenecroticpancreatitis,ANP)中炎症细胞因子(TNF-α和IL-1β)和抗炎细胞因子tgf-β之间的动态变化;并且分别进行抗TNF-α和抗IL-1β处理,进而探讨对细胞因子产生水平的影响。方法:制作ANP鼠模型,... 详细信息

目的:观察实验性急性坏死性胰腺炎(acutenecroticpancreatitis,ANP)中炎症细胞因子(TNF-α和IL-1β)和抗炎细胞因子tgf-β之间的动态变化;并且分别进行抗TNF-α和抗IL-1β处理,进而探讨对细胞因子产生水平的影响。方法:制作ANP鼠模型,施加抗TNF-α或抗IL-1β处理,制备血清,ELISA检测TNF-α、IL-1β和tgf-β的表达水平。结果:ANP模型中,TNF-α和IL-1β早期(3h)即显著升高,tgf-β进展期(6h)显著升高;TNF-α和IL-1β互相促进分泌;TNF-α单抗处理抑制晚期tgf-β(12h)的产生;IL-1β单抗处理则促进早期(3h)和进展期(6h和9h)tgf-β的产生。结论:ANP的发生发展与TNF-α、IL-1β和tgf-β关系密切,且TNF-α、IL-1β和tgf-β3种细胞因子之间存在动态调节。

关键词：急性坏死性胰腺炎中和抗体 TN F-α IL-1β tgf—β