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有氧运动对MI后大鼠心肌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响研究

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有氧运动对MI后大鼠心肌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响研究

作者：张冬茹扬州大学

学位级别：硕士

研究目的:探讨有氧运动对心肌梗死（MI）后大鼠心肌细胞端粒酶活性及心肌细胞增殖的影响。研究方法:选用雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组（sham）,心肌梗死组（MI）,心肌梗死运动组（ME）,每组10只。采用冠状动脉左前降支结扎手术建立... 详细信息

研究目的:探讨有氧运动对心肌梗死（MI）后大鼠心肌细胞端粒酶活性及心肌细胞增殖的影响。研究方法:选用雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组（sham）,心肌梗死组（MI）,心肌梗死运动组（ME）,每组10只。采用冠状动脉左前降支结扎手术建立心肌梗死模型。sham组除不进行结扎外其余手术过程同其他组。ME组心梗手术1周后进行为期8周间歇有氧运动。实验结束后,采用二维超声心动图检测大鼠心室厚度和射血功能。称量计算心重/体重比值（HW/BW）、左心室重量/体重比值（LVW/BW）。采用ELISA检测血浆和心肌组织胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达水平。采用RT-qPCR检测心肌组织GATA4和Nkx 2.5mRNA水平,衡量心肌细胞的增殖能力。采用ELISA检测心肌端粒酶活性,并采用RT-qPCR检测心肌组织端粒酶逆转录酶（tert）和自身携带的RNA（TERC）的mRNA水平。研究结果:1.心梗手术使大鼠心脏心室壁变薄,射血功能降低。与sham组相比,MI组射血分数（EF）明显降低（P≤0.01）,HW/BW 和 LVW/BW 也明显降低（P≤0.05vs.P≤0.05）;8 周间歇有氧运动后,ME组心脏舒张末期左室后壁厚度与舒张末期室间隔厚度之和（LVPWd+IVSd）,EF 值均比 MI 组明显增高（P≤0.05 vs.P ≤0.05）,HW/BW 和 LVW/BW也有明显升高（P≤ 0.05 vs.P≤ 0.05）。2.间歇有氧运动使心梗后大鼠心肌细胞增殖程度被激活。ME组血浆和心肌组织内IGF-1的水平比MI组明显升高（P≤0.05vs.P≤0.05）。与sham组相比,MI组心肌Nkx 2.5的mRNA表达水平明显升高（P≤ 0.05）;而ME组心肌GATA4和Nkx 2.5 mRNA表达水平比MI组显著升高（P≤0.01 vs.P≤0.05）。3.间歇有氧运动能明显升高心梗大鼠心肌组织的端粒酶表达水平。有氧运动使ME组心肌组织端粒酶水平与MI组相比显著升高（P ≤ 0.01）。与Sham组相比,MI组心肌tert mRNA表达水平明显增高（P ≤ 0.05）;而ME组心肌TERC和tert的mRNA表达水平都比MI组显著增高（P≤0.01vs.P≤0.01）。研究结论:1.间歇有氧运动能明显促进MI后大鼠心肌细胞增殖,改善心功能。2.间歇有氧运动能激活MI后大鼠心肌细胞端粒酶活性,进而促进心肌细胞增殖。

关键词：心肌梗死有氧运动细胞增殖端粒酶 tert

胶质瘤干细胞诱导骨髓间充质干细胞恶性转化的实验研究

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胶质瘤干细胞诱导骨髓间充质干细胞恶性转化的实验研究

作者：陈金生苏州大学

学位级别：硕士

第一部分:人胶质瘤干细胞体内诱导鼠骨髓间充质干细胞转化的实验研究目的:将转染红色荧光蛋白(RFP)基因的人脑胶质瘤干细胞SU3-RFP和源于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)裸小鼠的骨髓细胞接种于骨髓损毁Balb/c无荧光裸小鼠颅内,以双色荧光示... 详细信息

第一部分:人胶质瘤干细胞体内诱导鼠骨髓间充质干细胞转化的实验研究目的:将转染红色荧光蛋白(RFP)基因的人脑胶质瘤干细胞SU3-RFP和源于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)裸小鼠的骨髓细胞接种于骨髓损毁Balb/c无荧光裸小鼠颅内,以双色荧光示踪法探究移植瘤中作为肿瘤间质细胞的外源骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)和胶质瘤干细胞(Glioma Stem Cells,GSCs)相互作用。方法:直线加速器辐射后功能损毁普通Balb/c裸小鼠骨髓,尾静脉移植源于EGFP裸小鼠骨髓细胞,建立骨髓损毁重建模型;将RFP示踪的SU3细胞接种于骨髓重建鼠颅内,致瘤后培养原代肿瘤组织,从中克隆出高增殖力EGFP+细胞,鉴定其细胞类型并分析其生物学特征。结果:SU3-RFP细胞在骨髓重建鼠模型的致瘤率为100%(7/7),移植瘤中克隆到高增殖力EGFP+细胞,表达骨髓间充质干细胞标记蛋白—CD44、CD90、CD29,不表达CD45,具备强增殖能力和侵袭能力,并高表达端粒酶逆转录酶基因(Telomerase Reverse Transcriptase,tert),在Balb/c裸小鼠致瘤率为100%(5/5),将其命名为已转化的骨髓间充质干细胞(transformed Bone Mesenchymal Stem Cells,t BMSCs)。结论:胶质瘤干细胞可诱导移植瘤骨髓间充质干细胞发生恶性转化,后者参与肿瘤重构并高表达tert基因。第二部分t BMSCs与体外稳定转染tert基因BMSCs的生物学特征比较目的:体外建立稳定转染端粒酶逆转录酶基因(Telomerase Reverse Transcriptase,tert)骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并与克隆得到的已转化的骨髓间充质干细胞(transformed Bone Mesenchymal Stem Cells,t BMSCs)作比较研究。方法:原代培养源于BALB/c绿色荧光裸小鼠的BMSCs,将携带有tert基因的慢病毒表达载体转染BMSCs细胞,获得稳定表达tert的BMSCs(tert-BMSCs),以正常BMSCs为对照,比较tert-BMSCs和t BMSCs生物学特征。结果:1.t BMSCs细胞增殖力、侵袭能力和致瘤率(5/5,100%)均最强;2.tert-BMSCs细胞增殖力、侵袭能力较强,略低于t BMSCs(P﹤0.05),致瘤率(2/10,20%)明显低于t BMSCs;3.BMSCs细胞增殖力、侵袭能力远低于t BMSCs及tert-BMSCs(P﹤0.01),且不致瘤。结论:t BMSCs恶性转化机制与tert基因过表达高度相关,但其转化后的恶性表型应还包括其他基因异常参与,值得进一步深入研究。

关键词：胶质瘤干细胞骨髓损毁重建模型骨髓间充质干细胞 tert 恶性转化 tBMSCs tert-BMSCs 生物学特征

第一部分：妇科黏膜黑色素瘤的肿瘤基因组研究第二部分：PBRM1在肝癌细胞系中的机制研究

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第一部分：妇科黏膜黑色素瘤的肿瘤基因组研究第二部分：PBRM1在...

作者：宋金鸽北京协和医学院

学位级别：硕士

目的:黑色素瘤是一种恶性程度很高的肿瘤。在黑色素瘤的不同亚型中,研究最为广泛的是欧洲人中高发的皮肤黑色素瘤(Cutaneous melanoma,CM),而黏膜黑色素瘤多发于亚洲人群且大多出现在身体不受阳光照射的区域。但迄今为止只有少数亚型黏... 详细信息

目的:黑色素瘤是一种恶性程度很高的肿瘤。在黑色素瘤的不同亚型中,研究最为广泛的是欧洲人中高发的皮肤黑色素瘤(Cutaneous melanoma,CM),而黏膜黑色素瘤多发于亚洲人群且大多出现在身体不受阳光照射的区域。但迄今为止只有少数亚型黏膜黑色素瘤的分子特征被揭示。因此,我们利用外显子测序来探究妇科黏膜黑色素瘤(Gynecological mucosal melanoma,GM)的基因突变谱进而阐述其疾病发展的可能机制。方法:1.对肿瘤组织进行二代测序(Next generation sequencing,NGS)以探究外显子区域突变;2.通过荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)和 C-circle实验验证端粒替代延长机制(Alternative lengthening of telomeres,ALT)的存在;3.免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)研究ATRX蛋白的表达情况;4.液滴数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)检测 tert 拷贝数变异。结果:通过对32例妇科黏膜黑色素瘤样本进行外显子测序,发现了与ALT相关的ATRX的频繁突变。在所有58份样本中,ALT阳性33例(56.9%),其中23例出现ATRX蛋白缺失。此外,GM样本中均未检测到tert启动子突变(n=40);但在20%(7/35)的标本中存在tert区拷贝数增加,且tert扩增与ALT阳性互斥(Ptert扩增来讲,ALT阳性与无转移GM患者的生存期延长有关。结论:端粒维持机制(Telomere maintenance mechanisms,TMMs)在GM的发生发展中起重要作用,这可能有助于预测GM患者的临床预后和靶向治疗效果。目的:构建PBRM1敲除的肝癌细胞系并探究PBRM1在肝癌发生发展中的功能。方法:应用CRISPR/Cas9系统在Huh7细胞中靶向敲除PBRM1基因。采用Sanger测序检测目的区域的敲除情况,Western blot检测蛋白的表达。通过转录本测序(RNA-seq)比较 Huh7 敲除(Knock-out,KO)细胞系与 Huh7 野生(Wild-type,WT)细胞系基因表达谱,富集差异表达基因。使用流式细胞术分析细胞周期的改变。CCK-8实验和克隆形成实验探究细胞增殖情况。此外对Huh7-KO细胞系和Huh7-WT细胞系进行不同浓度的γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)培养,验证GO富集中IFN-γ应答通路的改变。结果:测序结果显示PBRM1被成功敲除,且在Huh7-KO细胞系中未检测到PBRM1蛋白表达。Huh7-KO细胞的生长速度和克隆形成率均显著慢于Huh7-WT细胞(P<0.0001)。GO和KEGG功能富集分析发现下调基因主要与细胞周期相关,包括DNA复制、染色体分离、核分裂等;上调基因主要与免疫应答相关,包括适应性免疫应答,对IFN-γ应答等。Huh7-KO细胞系种处于G1期细胞的比例显著高于Huh7-WT(P=0.0166),而前者处于S期的细胞比例明显低于后者(P=0.0002)。另外,PBRM1缺失使细胞对高浓度IFN-γ的杀伤作用更敏感(P=0.0091),验证了 GO富集中Huh7-KO细胞系对IFN-γ应答的改变。结论:肝癌细胞系Huh7中敲除PBRM1可以引起G1/S期阻滞从而抑制细胞增殖。同时,PBRM1缺失影响肝癌细胞对IFN-γ刺激的响应。这些发现可为PBRM1缺失型肝癌患者的免疫治疗提供新思路。

关键词： ATRX 端粒替代延长妇科黑色素瘤 tert 端粒 PBRM1 CRISPR/cas9 基因敲除 Huh7细胞

tert启动子突变与尿路上皮肿瘤的研究进展

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右江医学 2019年第5期47卷 321-325页

作者：曾丽霞马韵广西医科大学附属肿瘤医院病理科

端粒酶可赋予真核细胞无限增殖的能力,而端粒酶逆转录酶(tert)是端粒酶活化的重要催化亚单位,其启动子的突变与多种肿瘤包括尿路上皮癌密切相关,提示其是肿瘤形成过程中的始动因素。该文将就近年来tert启动子突变与尿路上皮肿瘤的发生... 详细信息

端粒酶可赋予真核细胞无限增殖的能力,而端粒酶逆转录酶(tert)是端粒酶活化的重要催化亚单位,其启动子的突变与多种肿瘤包括尿路上皮癌密切相关,提示其是肿瘤形成过程中的始动因素。该文将就近年来tert启动子突变与尿路上皮肿瘤的发生、相关作用机制及潜在的临床应用价值等方面的研究展开综述。

关键词： tert 启动子突变尿路上皮癌

tert基因启动子区域突变与神经胶质瘤的相关研究进展

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临床神经外科杂志 2016年第2期13卷 158-160页

作者：董辉周兴旺毛庆四川大学华西医院神经外科成都610041

肿瘤的一个重要特性就是肿瘤细胞的无限增殖,这一特性可以通过基因变异实现端粒长度的维持,从而解除细胞周期的限制来实现[1-2]。对黑色素瘤的研究表明,体细胞端粒长度的维持主要有两种机制：端粒酶依赖性机制（85%）和端粒酶非依赖性... 详细信息

肿瘤的一个重要特性就是肿瘤细胞的无限增殖,这一特性可以通过基因变异实现端粒长度的维持,从而解除细胞周期的限制来实现[1-2]。对黑色素瘤的研究表明,体细胞端粒长度的维持主要有两种机制：端粒酶依赖性机制（85%）和端粒酶非依赖性机制（15%）[3],后者依靠ATRX和DAXX变异介导的端粒替代延长机制（ALT）实现端粒的延长;

关键词： tert 神经胶质瘤端粒长度非依赖性启动子区域高甲基化胶质瘤细胞星形细胞瘤细胞周期基因突变

tert通过外泌体胞间转移MET蛋白重塑成纤维细胞促进头颈部鳞状细胞癌侵袭的研究

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TERT通过外泌体胞间转移MET蛋白重塑成纤维细胞促进头颈部鳞状细...

tert多表位疫苗的制备及其免疫原性初步研究

2020年全国口腔颌面-头颈肿瘤学术大会暨中华口腔医学...

作者：赵腾达张世周张东升张天奇刘桂军山东省立医院

研究目的:头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)具有局部侵袭和高度远处转移的特性,关于tert在细胞转化和肿瘤进展中的促进作用目前已经阐明;然而,tert在HNSCC发生过程中对周围微环境的影响知之甚少。研究方法:首先,基于HNSCC患者临床标本分析,评估T... 详细信息

研究目的:头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)具有局部侵袭和高度远处转移的特性,关于tert在细胞转化和肿瘤进展中的促进作用目前已经阐明;然而,tert在HNSCC发生过程中对周围微环境的影响知之甚少。研究方法:首先,基于HNSCC患者临床标本分析,评估tert与肿瘤微环境(TME)中成纤维细胞的相关性;进一步通过体内外共培养实验检测HNSCC中活化的tert对成纤维细胞的作用。

关键词： tert 头颈部鳞状细胞癌肿瘤微环境外泌体 MET

来源： cnki会议评论

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TERT多表位疫苗的制备及其免疫原性初步研究

tert、HP在早期胃癌及癌旁组织中的表达及临床意义

河北省免疫学会第六次免疫学大会

作者：曾瑞红吴丽娜杨建岭魏林李彩霞崔玉秀河北医科大学免疫教研室

目的:制备端粒酶逆转录酶(tert)的多表位(metert)肽疫苗和DNA疫苗,免疫小鼠,对其免疫原性进行初步研究。方法:用重叠延伸PCR将tert的多个CD4+和CD8+T细胞表位串

关键词： tert CD4+T细胞表位 CD8+T细胞表位 metert 细胞免疫

来源： cnki会议评论

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牡丹江医学院学报 2014年第1期35卷 22-24页

作者：管桂杰代海兵李志平牡丹江医学院红旗医院病理科牡丹江医学院生物教研室牡丹江医学院红旗医院药剂科黑龙江牡丹江157011

目的:探讨TER和HP在早期胃癌及癌旁组织中的表达情况,以及其对临床的意义。方法:运用免疫组化方法检测50例早期胃癌及癌旁组织中tert的表达情况,用特殊染色方法对这50例癌及癌旁组织进行HP检测。结果:tert在早期胃癌组织标本中的阳性表... 详细信息

目的:探讨TER和HP在早期胃癌及癌旁组织中的表达情况,以及其对临床的意义。方法:运用免疫组化方法检测50例早期胃癌及癌旁组织中tert的表达情况,用特殊染色方法对这50例癌及癌旁组织进行HP检测。结果:tert在早期胃癌组织标本中的阳性表达率为82%,显著高于癌旁非癌组织(Ptert在早期胃癌及癌旁组织中阳性表达率增高,且其与HP感染成正相关,联合检测二者可能有助于预测早期胃癌的发生,为早癌的诊断和治疗提供理论依据。

关键词： tert HP 早期胃癌癌旁免疫组化

甲状腺癌RAS/BRAF/tert基因突变与临床病理特征的关系

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诊断病理学杂志 2020年第4期27卷 250-254页

作者：鲁涛高洁周良锐陆俊良林岩松吴焕文中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院核医学科北京100730

目的研究甲状腺癌5种驱动基因RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和tert突变与临床病理特征的关系,以期细化甲状腺癌主要驱动基因突变的人群特征,在临床实践中为患者提供更精准的分子分型检测指导。方法回顾性收集319例甲状腺癌患者的临床病理... 详细信息

目的研究甲状腺癌5种驱动基因RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和tert突变与临床病理特征的关系,以期细化甲状腺癌主要驱动基因突变的人群特征,在临床实践中为患者提供更精准的分子分型检测指导。方法回顾性收集319例甲状腺癌患者的临床病理特征和5种基因突变状态资料,分析各基因突变状态与患者年龄、性别、病理类型的相关性。结果 319例患者的RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和tert突变频率分别为5. 3%、45. 1%和12. 9%。其中37例患者检出双基因突变(11. 6%);BRAF和tert共突变发生频率最高,为9. 4%;其次为NRAS/tert共突变4例。RAS和BRAF的突变状态与患者病理类型显著相关(均Ptert突变在乳头及滤泡性癌中均可见,在滤泡性癌中比例增高,但无统计学意义。此外,RAS/BRAF/tert基因突变患者的平均年龄分别为52. 5岁、44. 6岁和59. 5岁,均显著高于总体平均年龄(40岁)(P tert驱动基因突变与患者的病理分型及年龄相关。青少年甲状腺癌患者RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和tert驱动基因突变发生频率极低,在临床实践中需有针对性的设计基因检测方案。

关键词：甲状腺癌 RAS BRAF tert 年龄病理分型