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Rapid and high throughput detection of HBV YMDD mutants with fluorescence polarization

World Journal of Gastroenterology 2003年第10期9卷 2344-2347页

作者： Yui-Jie Bai Jin-Rong Zhao Guan-Ting Lv Wen-Hong Zhang Yan Wang Xiao-Jun Yan, Institute of Genetic Diagnosis, Fourth Military Medical University, Xi’an 710032, Shannxi Province, China Institute of Genetic Diagnosis Fourth Military Medical University Xi'an 710032 Shannxi Province China. yujiebai@***

AIM: To develop a simple and rapid detection of HBV gene variants and prediction of lamivudine-resistance in ***: Initially, plasmids harboring the wild-type or mutant HBV DNA fragments were used in a model *** technique was then applied to clinical samples for an analysis of YMDD mutations. The sera were extracted from chronic hepatitis patients who had received lamivudine treatment for more than one year. P region gene of HBV was amplified by polymerase chain reaction. The excess primers and dNTPs in PCR products were removed by cleaning-up reagents. Template-directed dye-terminator incorporation reaction was performed and R110 or TAMRA labeled acyclo-terminator was added on the 3' end of tdiprimer specifically. Fluorescence polarization value was measured with Victor 2 multilabel counter and the genotypes of HBV were ***: The YMDD genotypes in recombined positive plasmid and 56 serum samples of HBV infected patients were analyzed by using our tdi-fp method and the specificity and sensitivity were confirmed by DNA sequencing. Five of 56 serum samples showed YVDD phenotype (9%), including 1 YMDD and YVDD mixed infection. Four of 56 showed YIDD phenotype (7.1%).CONCLUSION: This is a simple, rapid, low cost and high throughput assay to detect HBV polymerase gene variants and suitable for large-scale screening and prediction of the lamivudine-resistance in clinical samples.

关键词： tdi-fp YMDD 乙型肝炎病毒基因变异血清标本

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模板指导末端延伸法检测内皮型一氧化氮合酶基因多态性研究

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中华检验医学杂志 2004年第10期27卷 653-653页

作者：焦凯江华张菊王香玲第四军医大学唐都医院内分泌科西安710038 第四军医大学基因诊断研究所西安交通大学第二医院检验科

糖尿病肾病(DN)是糖尿病的并发症之一,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性对DN易感性及预后有重要意义[1].本研究建立了模板指导末端延伸反应结合荧光偏振技术(tdi-fp)检测eNOS基因单核苷酸多态性(SNP)的方法,并对DN患者和正常人检测... 详细信息

糖尿病肾病(DN)是糖尿病的并发症之一,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性对DN易感性及预后有重要意义[1].本研究建立了模板指导末端延伸反应结合荧光偏振技术(tdi-fp)检测eNOS基因单核苷酸多态性(SNP)的方法,并对DN患者和正常人检测价值进行了探讨。

关键词： DN 内皮型一氧化氮合酶基因并发症多态性研究指导 eNOS基因 tdi-fp 延伸重要意义方法

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