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利用Fine-tiling aCGH分析tcr基因重排鉴定T细胞白血病克隆

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第5期27卷 483-486页

作者：郑海涛叶铁真陈少华杨力建卢育洪李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:建立基于分析T细胞受体(tcr)基因重排而确定T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)克隆的新方法,为研究T-ALL中涉及tcr基因位点的染色体易位提供基础。方法:提取1例T-ALL患者外周血单个核细胞(PBMC)的总DNA,利用精细定位的寡核苷酸阵列... 详细信息

目的:建立基于分析T细胞受体(tcr)基因重排而确定T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)克隆的新方法,为研究T-ALL中涉及tcr基因位点的染色体易位提供基础。方法:提取1例T-ALL患者外周血单个核细胞(PBMC)的总DNA,利用精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(fine-tiling aCGH)分析样本与对照组基因组DNA的差异,了解不同染色体上可能的断裂点和具体的位点,根据所提供的初步结果,从断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法去找出与之发生重排的基因序列。并进一步通过RT-PCR检测tcr基因表达。结果:该例T-ALL患者fine-tiling aCGH结果显示14染色体tcrα/δ基因座出现4个断裂点,分别对应tcr Vδ1、Vδ2、Jδ1和Jδ2基因位点。通过LM-PCR、测序及序列分析,该例T-ALL患者的PBMC中tcr基因涉及Vδ1Dδ2Dδ3 Jδ1、Vδ2Dδ3 Jδ2重排。RT-PCR的结果也验证T-ALL表达该tcr基因重排。结论:结果表明,利用fine-tiling aCGH及LM-PCR技术可以找出tcr基因重排,并且该方法是可靠的,也是发现一些涉及tcr位点的融合基因的一条途径。

关键词： Fine-tilingaCGH LM-PCR tcr基因重排

以Ig/tcr基因重排为分子标志的儿童急性淋巴细胞性白血病微小残留病检测的技术方案

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中华儿科杂志 2011年第3期49卷 165-169页

作者：李志刚崔蕾高超李伟京邢艳平赵晓曦廖紫婷梁廷勳吴敏媛首都医科大学附属北京儿童医院血液病中心 100045 香港中文大学威尔斯亲王医院儿科学系

微小残留病（minimal residual disease,MRD）是儿童急性淋巴细胞性白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）的重要预后指标.目前普遍认为,MRD检测在评价治疗效果、判断预后及实施个体化治疗中具有重要的指导意义[1-2].如果诱导缓... 详细信息

微小残留病（minimal residual disease,MRD）是儿童急性淋巴细胞性白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）的重要预后指标.目前普遍认为,MRD检测在评价治疗效果、判断预后及实施个体化治疗中具有重要的指导意义[1-2].如果诱导缓解治疗结束时MRD呈阴性,则患儿预后极佳,已有研究探讨降低化疗强度的可能性;而此时甚至到巩固治疗时MRD水平仍较高的患儿,则预后较差,需要更为强烈的化疗,甚至造血干细胞移植.

关键词：白血病微小残留病检测急性淋巴细胞性白血病 tcr基因重排分子标志儿童造血干细胞移植 Ig 预后指标

克隆性tcr基因重排在获得性纯红细胞再生障碍性贫血的意义

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中华医学遗传学杂志 2016年第3期33卷 369-372页

作者：王增胜安利木舍塔拜尔张晓燕富玲王晓敏新疆维吾尔自治区人民医院血液科乌鲁木齐830020

目的探讨获得性纯红细胞再生障碍性贫血（acquired pure red cell aplastic anemia，A-PRCA）患者中T细胞抗原受体（T cell antigen receptor，tcr）基因克隆性重排的意义。方法对16例A—PRCA患者，应用以环胞素菌A为基础的免疫抑制方... 详细信息

目的探讨获得性纯红细胞再生障碍性贫血（acquired pure red cell aplastic anemia，A-PRCA）患者中T细胞抗原受体（T cell antigen receptor，tcr）基因克隆性重排的意义。方法对16例A—PRCA患者，应用以环胞素菌A为基础的免疫抑制方案治疗，用PCR检测tcr基因重排，用流式细胞仪对外周血标本进行T淋巴细胞亚群检测。结果16例患者中，有5例检测到砌℃克隆性重排，且5例均为tcr7和tcr8阳性。16例患者中，13例血象恢复正常（3例骨髓象同时恢复正常），7例骨髓象红系增生仍减低，但较治疗前有所上升。基本治愈3例，缓解7例，改善3例，无效3例，总有效率为81．25％。其中3例无效者均为tcr重排阳性患者，tcr重排阴性患者组治疗有效比例（11／11）明显高于tcr克隆性重排阳性患者组（2／5），差异有统计学意义（χ^2=8．123，P=0．018）。tcr重排阳性患者组的Th细胞（CD3＋CD4＋），Th／Ts比值均低于tcr克隆性重排阴性患者组，差异有统计学意义（P〈O．05）；而Ts细胞（CD3＋CD8＋）细胞的表达高于tcr克隆性重排阴性患者组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论部分A-PRCA患者存在tcr克隆性重排，其在A-PRCA发病机制中可能起一定的作用。免疫抑制剂环胞菌素A对A—PRCA有较好的疗效，但存在tcr克隆性重排者对环胞素菌A治疗反应差。

关键词：获得性纯红细胞再生障碍性贫血 tcr基因重排 T淋巴细胞亚群

tcr基因重排检测在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用

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TCR基因重排检测在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用

作者：贾雯华北理工大学

学位级别：硕士

目的探讨T细胞抗原受体（T cell receptor,tcr）基因重排在T细胞淋巴瘤中的特异性及其在病理诊断中的价值。由于淋巴瘤在临床病理诊断中难度较大,仅凭HE和免疫组织化学特点得出的结论易造成误诊和漏诊。在恶性淋巴瘤的分类中,T细胞淋巴... 详细信息

目的探讨T细胞抗原受体（T cell receptor,tcr）基因重排在T细胞淋巴瘤中的特异性及其在病理诊断中的价值。由于淋巴瘤在临床病理诊断中难度较大,仅凭HE和免疫组织化学特点得出的结论易造成误诊和漏诊。在恶性淋巴瘤的分类中,T细胞淋巴瘤是一种临床上相对少见且异质性较高的肿瘤,准确做出诊断给病人的治疗和预后带来不可或缺的价值。近年来,随着分子生物学的发展和应用,抗原受体基因（Antigen receptor gene,ARG）的重排克隆性分析为淋巴瘤的诊断提供了有效的手段,并日益成熟起来。机体中每个淋巴细胞都有其独特的重排形式,使得基因重排形式多种多样。淋巴瘤是淋巴细胞的单克隆性增殖,故淋巴瘤细胞的ARG是单克隆性重排。而良性淋巴组织增生性疾病与淋巴结反应性增生都是多克隆性重排,这也是与淋巴瘤单克隆性相鉴别的分子病理学基础。目前,通过分子遗传学分析判断是否存在细胞克隆性增殖,辅助诊断淋巴瘤,从而与良性病变相鉴别。方法收集2011年1月014年1月唐山市人民医院病理科中,组织病理学诊断为T细胞淋巴瘤的存档蜡块58例,其中男性39例,占67%,女性19例,占33%,平均年龄58岁。复阅其组织病理形态学及免疫组织学特点并查阅患者临床资料,全部病例均经10%中性缓冲福尔马林固定,石蜡包埋后对组织进行常规HE染色和免疫标记,并根据WHO（2008版）造血和淋巴组织肿瘤进行分类。选取58例T细胞淋巴瘤病例作为实验组,选取20例淋巴结反应性增生病例作为对照组。使用DNA提取试剂盒对78例病例的石蜡包埋组织进行DNA提取,并采用多重引物进行PCR扩增tcr基因重排片段,其扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,利用分子凝胶成像仪观察并对结果进行进一步的分析。结果根据WHO（2008版）造血和淋巴组织肿瘤新分类标准,58例T细胞淋巴瘤分类如下:结外NK/T细胞淋巴瘤,鼻型20例、外周T细胞淋巴瘤,非特殊型18例、T淋巴母细胞性淋巴瘤9例、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤8例、间变大细胞淋巴瘤2例、肠病性T细胞淋巴瘤1例,筛除DNA提取失败的3例标本,实验组55例T细胞淋巴瘤tcr基因重排检测阳性率为89.1%,其中肠病型T细胞淋巴瘤100%、结外NK/T细胞淋巴瘤,鼻型89.5%、非特殊型外周T细胞淋巴瘤88.2%、T淋巴母细胞性淋巴瘤87.5%、血管免疫母T细胞淋巴瘤87.5%、间变大细胞淋巴瘤50%。2例外周T细胞淋巴瘤,非特殊型、2例NK/T细胞淋巴瘤、1例血管免疫母性T细胞淋巴瘤和1例T淋巴母细胞性淋巴瘤均为阴性。结论58例T细胞淋巴瘤中,发生于淋巴结外的淋巴瘤高于结内,以男性多见。部位依次是皮肤/软组织、鼻咽部、颈部、口腔、生殖系统、消化系统、骨、纵膈、扁桃体。55例T细胞淋巴瘤中有49例tcr基因重排为阳性,阳性率为89.1%,由于淋巴瘤组织学较为复杂,加之淋巴瘤组织内亦往往伴有不同程度的反应性淋巴细胞浸润,故临床上易误诊。因此tcr基因重排检测可用于辅助T细胞淋巴瘤的诊断,在疑为恶性淋巴瘤或结外反应性增生时提供重要手段。为患者的诊断、治疗和预后提供有效的依据。但由于部分标本时限较长致DNA降解或实验过程中可能出现交叉污染等缺陷,导致其出现非特异性条带,因此只能作为有效的辅助手段,确诊时必须结合组织病理形态学、免疫组织化学特点并联系临床。

关键词： T细胞淋巴瘤 tcr基因重排多重引物PCR

tcr及IgH基因重排在T淋巴细胞浸润亲表皮疾病诊断中的意义

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TCR及IgH基因重排在T淋巴细胞浸润亲表皮疾病诊断中的意义

作者：孙亮亮石河子大学

学位级别：硕士

目的：明确tcrγ基因重排在蕈样肉芽肿诊断中的特异性及其应用的意义,tcrγ和IgH基因重排在探讨蕈样肉芽肿与副银屑病之间发生发展的相关性研究,研究tcrγ及IgH基因重排在鉴别诊断及其临床辅助诊断中联合应用的重要意义,并初步探讨tcrγ... 详细信息

目的：明确tcrγ基因重排在蕈样肉芽肿诊断中的特异性及其应用的意义,tcrγ和IgH基因重排在探讨蕈样肉芽肿与副银屑病之间发生发展的相关性研究,研究tcrγ及IgH基因重排在鉴别诊断及其临床辅助诊断中联合应用的重要意义,并初步探讨tcrγ及IgH基因重排在T淋巴细胞浸润亲表皮疾病诊断中的意义。方法：使用免疫组化方法筛选出T淋巴细胞浸润的组织病理学诊断的蕈样肉芽肿17例、疑似蕈样肉芽肿32例、副银屑病10例及湿疹10例,然后使用酚-氯仿法对新疆维吾尔自治区人民医院皮肤性病科收集的经组化筛选的蕈样肉芽肿、疑似蕈样肉芽肿、副银屑病和湿疹的石蜡包埋组织进行DNA抽提,并使用聚合酶链PCR方法扩增蕈样肉芽肿、疑似蕈样肉芽肿、副银屑病及湿疹基因片段。结果：（1）17例确诊的蕈样肉芽肿中有9例tcrγ基因重排为阳性,阳性率为52.94%;5例IgH基因重排阳性,阳性率为29.41%;（2）疑似的32例蕈样肉芽肿中2例tcrγ基因重排为阳性,阳性率为6.25%;14例IgH基因重排阳性,阳性率为43.75%;（3）10例副银屑病的tcrγ基因重排全部为阴性;4例IgH基因重排阳性,阳性率为40%。（4）10例湿疹tcrγ基因重排和IgH基因重排均为阴性。结论：（1）17例组织病理学确诊的蕈样肉芽肿tcr基因重排阳性9例,阳性率为52.94%,tcr和IgH基因重排可用于辅助诊断疑似蕈样肉芽肿及鉴别诊断出恶性淋巴瘤,随访具有一定的意义。（2）疑似蕈样肉芽肿中的32例有2例tcr基因重排阳性,阳性率仅为6.25%,14例出现了IgH阳性基因重排,可用于辅助诊断及其从疑似中鉴别出恶性淋巴瘤,随访更加重要。（3）副银屑病其中4例为IgH基因重排阳性,这样的结果可能为实验中有交叉污染,副银屑病可能与皮肤恶性淋巴瘤在发生发展过程中并无明显的相关性,随访对此具有重要的价值。（4）基因重排可作为鉴别良性疾病与恶性淋巴瘤的重要手段,在患者早期诊断、早期治疗及预防复发中提供了一定依据,从而提高了患者的生活质量及重要的理论及实践意义。

关键词：亲表皮性蕈样肉芽肿 tcr基因 tcr基因重排 IgH基因重排

RQ-PCR检测Ig/tcr基因重排监测急性淋巴细胞白血病患儿治疗过程微小残留白血病

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中国循证儿科杂志 2012年第6期7卷 454-458页

作者：李彦媚叶铁真赖冬波何映谊林慧玲广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科广州510623

目的研究RQ-PCR检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿Ig/tcr基因重排在微小残留白血病(MRD)监测中的作用。方法以2009年3月至2011年3月在广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科确诊和治疗的ALL患儿为研究对象,PCR检测初诊ALL患儿的Ig/tcr基因重... 详细信息

目的研究RQ-PCR检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿Ig/tcr基因重排在微小残留白血病(MRD)监测中的作用。方法以2009年3月至2011年3月在广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科确诊和治疗的ALL患儿为研究对象,PCR检测初诊ALL患儿的Ig/tcr基因重排;基因扫描分析初诊患儿Ig/tcr基因重排的克隆特性;对ALL患儿的单克隆性Ig/tcr基因重排进行测序,RQ-PCR检测不同治疗阶段Ig/tcr基因重排的表达量。结果 86例ALL患儿进入分析,男52例,女34例;年龄1～13(4.3±3.0)岁,随访时间1～26(14.3±7.0)个月。①83例(96.5%)检出1种或以上Ig/tcr基因重排,共检出209个Ig/tcr基因重排;②91.8%(56/61例)检出1种或以上单克隆性Ig/tcr基因重排;61例172个Ig/tcr基因重排中,单克隆性、寡克隆性和多克隆性Ig/tcr基因重排的检出率分别为58.1%(100个)、30.8%(52个)和11.0%(19个),差异有统计学意义(P=0.000);③26例完成连续3次随访,其中22例持续完全缓解患儿的Ig/tcr基因重排平均相对表达量持续下降,在维持治疗前均为MRD阴性(≤1.0×10-4);4例复发患儿在诱导缓解治疗后至复发前各检测时点Ig/tcr基因重排表达量均>1.0×10-4,并在复发前已有回升,从开始回升至临床复发的平均时间为3.75(2～8)个月。结论 Ig/tcr基因重排相对表达量可反映MRD水平,可作为判断预后、监测复发和指导治疗的有效手段。

关键词：急性淋巴细胞白血病微小残留白血病 Ig tcr基因重排实时定量PCR

原发于小肠结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤10例临床病理学特征分析

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临床与实验病理学杂志 2024年第1期40卷 95-98页

作者：岳振营山东省东营市胜利油田中心医院病理科东营257000

目的探讨小肠结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-cell lymphoma nasal type,ENKTL-NT)的临床病理特点、免疫表型、诊断和鉴别诊断。方法收集10例原发于小肠ENKTL-NT的临床资料,采用免疫组化EnVision法检测CK广谱、CD20、CD79α、... 详细信息

目的探讨小肠结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-cell lymphoma nasal type,ENKTL-NT)的临床病理特点、免疫表型、诊断和鉴别诊断。方法收集10例原发于小肠ENKTL-NT的临床资料,采用免疫组化EnVision法检测CK广谱、CD20、CD79α、CD3ε、CD5、CD2、CD43、CD45RO、CD56、CD8、CD103、CD30、TIA-1、颗粒酶B和Ki67,应用原位杂交检测EBER表达情况,并进行tcr基因重排检测,结合文献复习此组原发于罕见部位ENKTL-NT临床病理学特征。结果10例小肠ENKTL-NT中,男性7例,女性3例,年龄26~75岁,中位年龄45岁。其中位于空肠4例、回肠6例,黏膜活检标本3例,手术切除标本7例。临床症状主要以消化道症状为主。组织学特点为凝固性坏死和多种炎性细胞混合浸润的背景上,具有明显多形性的肿瘤细胞散在或呈灶性分布;存在不同程度和范围的凝固性坏死,部分病例可见肿瘤细胞的血管中心性和血管破坏性浸润。免疫表型:肿瘤细胞表达细胞毒颗粒相关抗原(TIA-1和颗粒酶B)、CD3ε(10/10)、CD2(8/10)、CD45RO(9/10),部分病例存在其他T细胞标志物表达减弱/缺失,不表达B细胞和组织细胞抗原。Ki67增殖指数55%~90%,所有病例EBER原位杂交均阳性。9例随访者中6例死亡,中位生存期13个月。结论原发于小肠ENKTL-NT临床罕见,常合并消化道穿孔等急腹症。临床和影像缺乏特异性,易误诊为消化道溃疡或炎症性肠病。了解其临床病理特征,结合免疫表型、原位杂交及tcr基因重排检测结果,对有效提高该病的诊断和早期治疗具有重要意义。

关键词：结外NK-T细胞小肠淋巴瘤鼻型免疫组织化学 tcr基因重排

EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病患者临床、病理特征分析

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EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病患者临床、病理特征分析

作者：杨雪广西医科大学

学位级别：硕士

目的和意义:初步分析EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病患者的临床、病理特征、治疗及预后。方法:回顾性分析广西医科大学第一附属医院皮肤病与性病科2010年1月至2021年12月确诊为EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病患者的临床资料,统计... 详细信息

目的和意义:初步分析EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病患者的临床、病理特征、治疗及预后。方法:回顾性分析广西医科大学第一附属医院皮肤病与性病科2010年1月至2021年12月确诊为EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病患者的临床资料,统计相关指标包括患者性别、发病年龄、皮疹特点、体征、实验室检查结果、皮肤组织病理学特征、治疗及生存状态等;通过EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交和免疫组化双重染色技术检测患者的石蜡皮损组织,分析皮损组织中EB病毒感染的淋巴细胞类型;通过BIOMED-2系统对纳入的病例行T细胞受体(T cell receptor,tcr)基因重排检测,进行淋巴细胞克隆性分析。结果:1.临床特征:1.1性别:男性8例(38.10%),女性13例(61.90%);1.2发病年龄:6岁-65岁,中位发病年龄为34岁;1.3临床表现:发病部位:皮疹主要累及面部(71.43%),四肢(61.90%),躯干(47.62%);皮疹特点:根据患者皮损表现可分为以下四型:1.过度虫咬反应型(10例);2.种痘样水疱病样型(7例);3.Sweet样型(3例);4.局限性溃疡型(1例)。其中Sweet样型、局限性溃疡型在临床上少见;伴淋巴结肿大14例(66.67%),曾有反复或持续发热有9例(42.86%),脾肿大3例(14.29%),肝肿大2例(9.52%)。2.实验室检查:2.1血常规:21例患者中出现白细胞减少有4例(19.05%),贫血12例(57.14%),血小板减少2例(9.52%);2.2肝功能检测:19例患者接受检测,出现肝功能损害6例(31.58%);2.3 EB病毒核酸定量检测:19例患者接受检测,8例>4.00×10～2拷贝,占42.11%;2.4免疫球蛋白E:17例患者接受检测,12例(70.59%)免疫球蛋白E升高,中位数为268.40 IU/m L;2.5血清铁蛋白:9例患者接受检测,6例(66.67%)血清铁蛋白升高;2.6乳酸脱氢酶:16例患者接受检测,6例(37.50%)乳酸脱氢酶升高。3.皮肤组织病理学特征:21例EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病患者皮损组织病理学表现为轻度不典型淋巴细胞浸润真皮浅深层以及皮下脂肪小叶。4.EBER原位杂交与免疫组化双重染色:2例患者石蜡组织脱水不良导致不易分析,其余19例患者中有11例(57.89%)EBER原位杂交与免疫组化CD3双染阳性,19例患者EBER原位杂交与免疫组化CD20双染均为阴性。5.T细胞受体基因重排检测:21例患者中12例(57.14%)tcr基因重排阳性,其中9例(42.86%)为tcrγ单重排,3例(14.29%)为tcrγ与tcrδ双重排。9例(42.86%)tcr基因重排检测为阴性。6.治疗及随访情况:21例患者治疗以抗病毒、调节免疫、减轻光敏感等治疗为主,随访时间为3月-48月,中位随访时间为12月,其中2例失访,2例死亡,其余17例在随访时间内存活。10例患者治疗后好转,7例患者出现病情反复,3周-3月复发一次。结论:(1)表现为Sweet样型或局限性溃疡型皮疹的EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病临床少见,容易误诊。(2)被EBV感染的T淋巴细胞被募集至皮损内可能诱发局部异常炎症反应。(3)EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病易出现tcr基因单克隆重排,导致患者病情迁延不愈或持续恶化。

关键词： EB病毒相关皮肤淋巴组织增生性疾病临床特征皮肤病理特征 EBER原位杂交与免疫组化双重染色 tcr基因重排

子宫原发性结外NK/T细胞淋巴瘤1例并文献复习

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诊断病理学杂志 2022年第3期29卷 240-243页

作者：蒋欣张亚军李明江月闫莉江苏省连云港市妇幼保健院病理科江苏连云港222000 江苏省连云港市妇幼保健院妇瘤科江苏连云港222000

女性生殖系统淋巴瘤少见,占结外非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)的2%[1],大多数是继发性、少数是原发性NHL,查阅文献报道[2-3]肿瘤好发部位依次是卵巢、宫颈、宫体;常见组织学类型是弥漫性大B细胞淋巴瘤,其次是Burkitt淋巴... 详细信息

女性生殖系统淋巴瘤少见,占结外非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)的2%[1],大多数是继发性、少数是原发性NHL,查阅文献报道[2-3]肿瘤好发部位依次是卵巢、宫颈、宫体;常见组织学类型是弥漫性大B细胞淋巴瘤,其次是Burkitt淋巴瘤,T细胞淋巴瘤很少发生。结外NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-cell lymphoma, ENKTCL)常见发病部位是上呼吸、消化道、皮肤。

关键词：子宫 NK/T细胞淋巴瘤 EBER tcr基因重排鉴别诊断