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tcf21基因对人肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响

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实用医学杂志 2016年第8期32卷 1226-1229页

作者：陆晓冼磊广西医科大学第一附属医院心胸外科南宁市530021

目的:通过观察转录因子21(tcf21)基因对人肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响,探讨tcf21在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用。方法:利用慢病毒感染在人肺癌A549细胞中过表达tcf21,并进行Western blotting验证。实验组、阴性对照组以及空... 详细信息

目的:通过观察转录因子21(tcf21)基因对人肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响,探讨tcf21在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用。方法:利用慢病毒感染在人肺癌A549细胞中过表达tcf21,并进行Western blotting验证。实验组、阴性对照组以及空白组细胞接种于BALB/c裸鼠左侧腋窝皮下,观察裸鼠成瘤情况,并绘制生长曲线。计算体积抑瘤率。结果:tcf21成功过表达,实验组较阴性对照组及空白组瘤体生长速度慢,肿瘤终体积分别为(620.08±263.07)vs.(1 406.77±351.14)vs.(620.08±263.07)mm3(Ptcf21基因过表达能有效抑制NSCLC裸鼠成瘤和移植瘤生长,表明tcf21在NSCLC发生、发展中起到重要作用,并有可能成为NSCLC靶向治疗的潜在新靶点。

关键词：肺肿瘤 tcf21 A549细胞裸鼠成瘤

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tcf21基因对鸡前脂肪细胞增殖的影响

中国畜牧杂志 2018年第9期54卷 45-49页

作者：李嘉煜张心扬李辉原辉东北农业大学动物科学技术学院农业部鸡遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150030

实验旨在研究tcf21基因在鸡前脂肪细胞增殖过程中的功能。以鸡永生化前脂肪细胞系(ICP1)和体外分离培养的鸡原代前脂肪细胞为实验材料,首先利用qRT-PCR实验方法分析tcf21在ICP1细胞和鸡原代前脂肪细胞增殖过程中的表达规律,其次利用CCK-... 详细信息

实验旨在研究tcf21基因在鸡前脂肪细胞增殖过程中的功能。以鸡永生化前脂肪细胞系(ICP1)和体外分离培养的鸡原代前脂肪细胞为实验材料,首先利用qRT-PCR实验方法分析tcf21在ICP1细胞和鸡原代前脂肪细胞增殖过程中的表达规律,其次利用CCK-8比色法研究过表达和干扰tcf21基因对鸡前脂肪细胞增殖过程中细胞数的影响,最后利用qRT-PCR实验方法分析细胞增殖过程中标志基因PCNA、cyclinD1和Ki67的表达情况。结果表明:tcf21基因在ICP1细胞和体外分离培养的鸡原代前脂肪细胞的增殖过程中均呈下降趋势;过表达tcf21基因抑制鸡前脂肪细胞的增殖,且细胞增殖标志基因PCNA、cyclinD1和Ki67的mRNA表达水平下调;干扰tcf21基因对鸡前脂肪细胞增殖无明显影响。综上所述,tcf21可能对鸡前脂肪细胞的增殖有一定的抑制作用。

关键词： tcf21 增殖前脂肪细胞鸡

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tcf21在肿瘤中的研究进展

广东医学 2017年第Z1期38卷 331-333页

作者：朱清华田瑛河北医科大学第三医院妇产科河北石家庄050051

tcf21又名POD-1,是编码转录因子21的基因,属于碱性螺旋-环-螺旋（b HLH）家族。人类的tcf21基因全长6 417 bp,位于6号染色体区域6q23q24。它在肺、肾脏、肠、心脏间质细胞[1]和肾小球上皮细胞的间叶细胞中表达[2]。tcf21对细胞生长和分... 详细信息

tcf21又名POD-1,是编码转录因子21的基因,属于碱性螺旋-环-螺旋（b HLH）家族。人类的tcf21基因全长6 417 bp,位于6号染色体区域6q23q24。它在肺、肾脏、肠、心脏间质细胞[1]和肾小球上皮细胞的间叶细胞中表达[2]。tcf21对细胞生长和分化有重要作用。

关键词： tcf21 甲基化低表达启动子小细胞肺癌

tcf21通过调控PSC细胞的上皮间质转化参与慢性胰腺炎纤维化的机制研究

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Tcf21通过调控PSC细胞的上皮间质转化参与慢性胰腺炎纤维化的机制...

作者：倪艳红福建中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在探讨tcf21在慢性胰腺炎动物模型中的表达水平,分析其对人胰腺星状细胞活化与EMT的影响及作用机制,并进一步探索tcf21作为CP药物治疗靶点的可行性。方法:1探讨tcf21表达水平与小鼠胰腺纤维化的相关性。雨蛙素构建CP小鼠模... 详细信息

目的:本研究旨在探讨tcf21在慢性胰腺炎动物模型中的表达水平,分析其对人胰腺星状细胞活化与EMT的影响及作用机制,并进一步探索tcf21作为CP药物治疗靶点的可行性。方法:1探讨tcf21表达水平与小鼠胰腺纤维化的相关性。雨蛙素构建CP小鼠模型,采用H&E染色、Sirius Red染色检测比较CP小鼠和正常小鼠胰腺组织炎症、纤维化程度,采用IHC染色法检测比较两组小鼠胰腺组织tcf21、上皮相关标志物(Ecadherin)、间质相关标志物(Vimentin)和纤维化相关标志物(α-SMA)的表达水平。2探讨tcf21表达水平与HPSC细胞活化、EMT及纤维化相关标志物的相关性。采用TGF-β1诱导HPSC细胞活化,通过CCK-8实验检测细胞增殖能力,通过WB、q RT-PCR实验检测tcf21、活化相关标志物(α-SMA)、上皮细胞相关标志物(ZO-1)、间质相关标志物(Vimentin)、纤维化相关标志物(Fibronectin)的表达变化。3探讨干预tcf21表达对HPSC细胞活化的调控作用及分子机制。构建tcf21过表达质粒并转染细胞,建立稳转细胞株。通过CCK-8实验、划痕实验检测细胞增殖、迁移能力的变化。通过WB、q RT-PCR实验检测纤维化、活化和EMT相关标志物的表达变化。结果:1与Control组相比,H&E、Sirius Red染色结果显示Cae组小鼠的胰腺组织出现不同程度的CP病理改变和纤维化改变,提示雨蛙素造模成功。与Control组相比,Cae组的Vimentin、α-SMA的IHC染色阳性面积显著升高,tcf21、E-cadherin的染色阳性面积则显著降低(Ptcf21、ZO-1的表达水平显著降低(Ptcf21过表达慢病毒。CCK-8、划痕实验结果表明,过表达tcf21蛋白显著抑制细胞的增殖、迁移能力(Ptcf21蛋白能显著降低Fibronectin、Vimentin蛋白的表达,显著升高tcf21、ZO-1蛋白的表达(Ptcf21能显著降低Fibronectin、Vimentin、α-SMA基因的转录水平,显著升高tcf21、ZO-1基因的转录水平(Ptcf21在雨蛙素诱导的CP小鼠胰腺组织中低表达,其表达水平与小鼠胰腺纤维化、EMT过程呈负相关。2 TGF-β1在一定剂量范围内诱导HPSC细胞活化及EMT过程,同时抑制tcf21的表达水平。3过表达tcf21能够抑制HPSC细胞的活化、增殖及迁移,同时抑制细胞EMT过程,这可能是其缓解胰腺纤维化的作用机制。

关键词：慢性胰腺炎纤维化胰腺星状细胞上皮间质转化 tcf21

tcf21及Wnt5a调节EMT在宫颈癌侵袭与转移中的作用与机制

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TCF21及Wnt5a调节EMT在宫颈癌侵袭与转移中的作用与机制

作者：杨宁宁蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:探讨tcf21及Wnt5a在宫颈癌组织中的表达水平、临床意义和生存预后的关系。研究tcf21对宫颈癌Siha细胞株增殖、迁移能力的调控作用和可能的分子机制。方法:1.收集2014年1月至2015年6月期间在蚌埠医学院第一附属医院归档的宫颈鳞癌... 详细信息

目的:探讨tcf21及Wnt5a在宫颈癌组织中的表达水平、临床意义和生存预后的关系。研究tcf21对宫颈癌Siha细胞株增殖、迁移能力的调控作用和可能的分子机制。方法:1.收集2014年1月至2015年6月期间在蚌埠医学院第一附属医院归档的宫颈鳞癌组织蜡块130例、宫颈高级别上皮内病变35例及正常宫颈组织30例。采用免疫组化Elivision TM法检测tcf21、Wnt5a及EMT相关分子（EZH2、E-cadherin）在不同宫颈病变中的表达水平,卡方检验分析tcf21及Wnt5a的表达水平和临床病理参数之间的关系,Spearman相关性分析tcf21、Wnt5a及EMT相关蛋白之间的关联性,采用单因素Kaplan-Meier生存分析法探讨tcf21、Wnt5a的表达及临床病理参数对患者生存时间的影响。2.通过瞬时转染将Siha细胞分为过表达组、空载体组及阴性对照组。荧光显微镜观察、Western Blot验证tcf21转染情况,CCK-8增殖实验检测上调tcf21对Siha细胞增殖能力的影响,Transwell小室迁移实验检测其迁移能力的改变,并观察tcf21对EMT相关蛋白（EZH2、E-cadherin）的调控作用。结果:***21在宫颈癌组织中的阳性表达率低于宫颈高级别上皮内病变组织和正常宫颈组织,差异具有统计学意义（P＜0.01）。Wnt5a则与之相反,且差异亦具有统计学意义（P＜0.01）。***21和Wnt5a在宫颈癌组织中的异常表达与肿瘤分化程度、FIGO临床分期及有无淋巴结转移有关（P＜0.05）,而与年龄、肿瘤大小及浸润程度无关（P＞0.05）。tcf21阴性患者预后不良,总生存时间低于tcf21阳性患者（P＜0.05）;Wnt5a阴性患者预后较好,总生存时间高于Wnt5a阳性患者（P＜0.05）。3.宫颈癌组织中tcf21的表达水平和Wnt5a呈负相关性（r=-0.575,P＜0.01）,同时tcf21和EMT相关蛋白EZH2的表达具有负相关关系（r=-0.428,P＜0.01）,和E-cadherin的表达具有正相关性（r=0.403,P＜0.01）。***21过表达可以抑制宫颈癌Siha细胞的增殖能力和迁移能力,明显低于空载体组及阴性对照组（P＜0.05）,后两者之间无统计学意义。***21过表达后明显提高E-cadherin蛋白的表达水平（P＜0.01）,降低EZH2蛋白水平（P＜0.01）。结论:***21和Wnt5a在宫颈癌组织中异常表达,并和肿瘤的恶性生物学指标相关,可能成为判断宫颈癌预后和生存的有效因子。***21通过调控EMT相关蛋白,在宫颈癌细胞增殖、迁移中发挥抑制作用。

关键词：宫颈癌 tcf21 Wnt5a 上皮间质转化

tcf21通过调控KISS1基因及其下游PI3K-AKT通路在人非小细胞肺癌的作用及机制研究

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TCF21通过调控KISS1基因及其下游PI3K-AKT通路在人非小细胞肺癌的...

作者：陈炜康广西医科大学

学位级别：硕士

目的和意义:旨在研究tcf21基因对人非小细胞肺癌生物学功能的影响,并探讨其与KISS1基因及其下游PI3K/AKT信号通路之间的潜在关系。方法:1、利用TCGA数据库分析tcf21在肺鳞癌、肺腺癌表达情况2、采用tcf21-over慢病毒感染人非小细胞肺癌(... 详细信息

目的和意义:旨在研究tcf21基因对人非小细胞肺癌生物学功能的影响,并探讨其与KISS1基因及其下游PI3K/AKT信号通路之间的潜在关系。方法:1、利用TCGA数据库分析tcf21在肺鳞癌、肺腺癌表达情况2、采用tcf21-over慢病毒感染人非小细胞肺癌(A549、H460、SKMES-1)细胞株,并成功构建过表达稳转细胞株。3、在上述稳转细胞株中,应用CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验、血管生成实验、单克隆形成实验分别检测tcf21表达变化对非小细胞肺癌(A549、H460、SK-MES-1)细胞株的增殖、迁移、侵袭、扩散转移、克隆形成能力等作用。4、运用Western Blot方法检测tcf21过表达组(tcf21-over)、空白组(mock)和阴性组(nc)中KISS1及其下游PI3K/AKT信号通路中关键分子PI3K、p-PI3K、AKT1、p-AKT1蛋白水平的变化。5、通过JASPAR数据库预测转录因子tcf21与KISS1启动子区域有结合位点。6、双萤光素酶报告基因实验探索tcf21对KISS1启动子活性的作用。7、利用TCGA数据库分析tcf21表达与NSCLC患者临床病理特征及NSCLC微环境中免疫细胞浸润的相关性。结果:1、通过TCGA数据库发现,在肺癌组织中tcf21 m RNA表达水平明显低于正常组织(Ptcf21-over慢病毒能够在人非小细胞肺癌细胞株中成功地过表达tcf21(ptcf21过表达的稳转细胞株。3、过表达tcf21后,CCK-8实验表明非小细胞肺癌细胞的增殖能力明显下降(ptcf21-over组的KISS1 m RNA及蛋白表达量也显著升高(p0.05)5、通过JASPAR数据库预测到转录因子tcf21与KISS1基因启动子区域有两个潜在结合位点。6、通过双萤光素酶报告实验,证实了转录因子tcf21对KISS1启动子有促进作用。7、通过TCGA数据库发现,肺癌组织中tcf21基因表达水平与肺癌患者预后有一定的影响(ptcf21基因能够并明显抑制非小细胞肺癌细胞的生物学功能。2、通过激活KISS1启动子活性,抑制其下游PI3K/AKT信号通路来发挥其肿瘤转移抑制作用。3、在肺腺癌患者中,tcf21低表达者可能有着更差的生存率;而在肺鳞癌中,tcf21高表达者可能有着更差的生存率。

关键词：非小细胞肺癌 tcf21 KISS1 PI3K/AKT 启动子调控

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tcf21对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用

TCF21对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用

作者：朱清华河北医科大学

学位级别：硕士

卵巢癌的致死率居妇科恶性肿瘤的首位。卵巢癌起病隐匿,70%发现时已为晚期,晚期卵巢癌的生存率不到30%,而早期发现的卵巢癌经过手术和化疗,大部分可以达到治愈或完全缓解,其5年生存率可达90%。据美国卵巢癌治疗研究报道,卵巢癌在美国女... 详细信息

卵巢癌的致死率居妇科恶性肿瘤的首位。卵巢癌起病隐匿,70%发现时已为晚期,晚期卵巢癌的生存率不到30%,而早期发现的卵巢癌经过手术和化疗,大部分可以达到治愈或完全缓解,其5年生存率可达90%。据美国卵巢癌治疗研究报道,卵巢癌在美国女性恶性肿瘤的死亡原因中位于第五。因此早诊断、早治疗对于提高卵巢癌患者的生存率非常重要。诊治卵巢癌的一大难点是其早期缺乏特异的临床表现和灵敏的筛查方法,因此研究卵巢癌发生发展的分子机制,为早期诊治卵巢癌寻找新的靶点是非常必要的。近来研究表明,tcf21是一种抑癌基因,在头颈癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、胃癌和黑色素瘤等多种肿瘤中呈低表达状态。关于tcf21在肿瘤中的作用机制有两个方面:一是启动子甲基化导致其表达下调,从而导致肿瘤的发生发展,这种下调机制已得到了较多研究的证实;另一方面是Zhang等人在肾癌中发现mi R-21通过下调tcf21,从而抑制Kiss-1基因的表达,增加肾癌的侵袭能力,表明tcf21上游调控基因可能是mi R-21,其下游调控基因可能是Kiss-1基因。在恶性黑色素瘤、肾癌和结直肠癌均发现tcf21的下游调控基因可能是Kiss-1基因,那么在tcf21下游,是否只调控Kiss-1使其表达增高,从而抑制肿瘤的转移?在肿瘤的增殖和凋亡方面是否同样存在tcf21的下游调控基因?有待进一步证实。研究发现恶性黑色素瘤、肺癌、头颈癌、乳腺和卵巢癌的发生可能与6号染色体区域6q22和6q23-q24的杂合型缺失相关,而tcf21基因就位于6号染色体区域6q23-q24,且已有研究报道tcf21在恶性黑色素瘤、肺癌、头颈癌、乳腺呈低表达状态,但对于tcf21在卵巢癌的表达情况及作用机制目前尚无文献报道。目的:本研究探讨tcf21对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用及其可能的作用调控机制。方法:1分别采用荧光实时定量PCR和Western-blot方法检测卵巢癌组织和正常卵巢组织的tcf21m RNA和蛋白水平。2利用Gateway克隆技术把目的基因tcf21克隆到目的载体上,并对目的载体进行琼脂糖凝胶电泳和DNA序列检测检测。3利用慢病毒转染技术在卵巢癌Ovcar8细胞中高表达tcf21基因,并用抗生素对转染后的细胞进行筛选。4将细胞分为空白对照组(Ovcar8)和实验组(Ovcar8-tcf21),以荧光实时定量PCR和Western-blot方法检验tcf21基因在实验组第1、3、5代和空白对照组的表达水平。5采用MTT法检测tcf21高表达对Ovcar8增殖的影响。6采用流式细胞术检测tcf21高表达对Ovcar8凋亡的影响。7运用荧光实时定量PCR检测Cyclin A、B、C、D和CKD2、3、4、6在实验组和空白对照组的表达水平。结果:1卵巢癌组织中的tcf21的表达:荧光实时定量PCR和Western-blot均显示,卵巢癌组织中的tcf21m RNA和蛋白表达水平较正常卵巢组织低;2目的载体检测:电泳条带显示两条带,DNA序列检测显示目的载体的序列与tcf21基因的69-1028bp重合;3转染效果的观察:利用抗生素筛选,空白对照组细胞全部死亡,实验组细胞90%存活;4目的基因的表达:荧光实时定量PCR和Western-blot检测均显示实验组的第1、3、5代细胞组较空白对照组tcf21m RNA和蛋白表达水平明显上升;5 MTT法检测tcf21高表达对Ovcar8增殖能力的影响:结果显示实验组与空白对照组比较在24h的OD值无统计学差异(P>0.05),在48h、72h、96h的OD值降低,且有统计学差异(Ptcf21高表达对Ovcar8凋亡的影响:结果显示实验组较空白对照组细胞凋亡率明显上升,有统计学差异(Ptcf21基因的表达下降。2高表达tcf21后Ovcar8的细胞生长受抑制,凋亡率增高。

关键词： tcf21 卵巢癌增殖凋亡细胞周期蛋白

非小细胞肺癌tcf21基因表达及其启动子区甲基化的研究

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中华胸心血管外科杂志 2013年第1期29卷 24-27页

作者：何文武胡松陈铭伍阳诺冼磊广西医科大学第一附属医院心胸外科南宁530021

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中tcf21基因mRNA和蛋白的表达水平及其启动子区甲基化状态的意义。方法运用RT—PCR、蛋白印迹法（Western—blot）和焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术检测97例非小细胞肺癌组织和21例支气管扩张或肺大疱... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中tcf21基因mRNA和蛋白的表达水平及其启动子区甲基化状态的意义。方法运用RT—PCR、蛋白印迹法（Western—blot）和焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术检测97例非小细胞肺癌组织和21例支气管扩张或肺大疱等手术切除的良性肺组织中tcf21基因mRNA、蛋白表达及启动子区甲基化状态。结果97例NSCLC癌组织和21例良性肺组织中分别检测出tcf21基网mRNA阳性表达23例（23．71％）和14例（66．67％）；NSCLC癌组织中tcf21蛋白平均表达量灰度值为0．49±1．78，良性肺组织中其平均表达量灰度值为1．48±1．58；NSCLC癌组织和良性肺组织叶1tcf21摹因启动子区均有不同程度的甲基化，且癌组织和良性肺组织中各个位点甲基化频率均有统计学意义，在NSCLC癌组织中第1、5位点平均甲基化频率较高为49．04％和51．37％。结论tcf21基因mRNA及蛋白表达在NSCLC痈组织和良性肺组织中均有统计学意义，tcf21基因启动子区平均甲基化频率明屁高于良性肺组织细胞。

关键词： tcf21 蛋白印迹法甲基化癌,非小细胞肺

小分子干扰RNA沉默人结直肠癌HT-29细胞tcf21基因对Kiss-1基因表达的影响

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中华实验外科杂志 2013年第10期30卷 2101-2103页

作者：陈绍勤陈昌江戴起宝林素勇陈志华福建医科大学附属第一医院胃肠外科二区福州350005

目的观察小于扰RNA（siRNA）沉默结直肠癌HT-29细胞tcf21基因对Kiss-1基因表达的影响,以及细胞增殖、侵袭及迁移能力等生物学行为的变化.方法利用脂质体lipofectamineTM 2000将siRNA稳定转染结直肠癌HT-29细胞,实验分为干扰组、阴性... 详细信息

目的观察小于扰RNA（siRNA）沉默结直肠癌HT-29细胞tcf21基因对Kiss-1基因表达的影响,以及细胞增殖、侵袭及迁移能力等生物学行为的变化.方法利用脂质体lipofectamineTM 2000将siRNA稳定转染结直肠癌HT-29细胞,实验分为干扰组、阴性对照组、空白对照组；应用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）与Western blot技术检测tcf21与Kiss-1基因mRNA与蛋白的表达水平,分别采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法和Transwell小室法检测干扰前后细胞增殖、侵袭与迁移能力的变化.结果 siRNA干扰后成功沉默了HT-29细胞tcf21基因的表达,Kiss-1基因mRNA的表达量为0.58 ±0.02,较对照组的1.00±0.00明显降低（P＜0.05）,蛋白表达量为0.3491±0.0009,与对照组比较（0.8485 ±0.0016）亦出现明显下降（P＜0.05）,同时细胞增殖、侵袭及迁移能力均明显增强（P＜0.01）.结论沉默tcf21基因的表达可以下调结直肠癌细胞Kiss-1基因的表达水平,并导致相应生物学行为的变化,因此TC F21基因可能是Kiss-1基因的上游调控因子.

关键词：结直肠癌小干扰RNA tcf21 Kiss-1 生物学行为