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Efficacy of the new therapeutic approach in curing malignant neoplasms on the model of human glioblastoma

Cancer Biology & Medicine 2021年第3期18卷 910-930页

作者： Evgeniya V.Dolgova Oleg M.Andrushkevich Polina E.Kisaretova Anastasia S.Proskurina Genrikh S.Ritter Tatyana D.Dubatolova Margarita V.Romanenko Oleg S.Taranov Yaroslav R.Efremov Evgeniy L.Zavyalov Alexandr V.Romaschenko Sergey V.Mishinov Svetlana S.Kirikovich Evgeniy V.Levites Ekaterina A.Potter Alexandr A.Ostanin Elena R.Chernykh Stanislav Yu.Roshchin Anatoliy V.Bervitskiy Galina I.Moysak Jamil A.Rzaev Sergey S.Bogachev Institute of Cytology and Genetics SB RAS Novosibirsk 630090Russia A.I.Evdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry Moscow 127473Russia Institute of Molecular and Cellular Biology Novosibirsk 630090Russia Novosibirsk State University Novosibirsk 630090Russia The State Research Center of Virology and Biotechnology"Vector" KoltsovoNovosibirsk 630559Russia First Department of Neurosurgery Ya.L.Tsivian Novosibirsk Research Institute of Traumatology and OrthopaedicsNovosibirsk 630091Russia Institute of Fundamental and Clinical immunology Novosibirsk 630099Russia Sklifosovsky Research Institute of Emergency Medicine Moscow 129010Russia Federal Center of Neurosurgery Novosibirsk 630048Russia

Objective:Glioma is a highly invasive tumor,frequently disposed in essential areas of the brain,which makes its surgical excision extremely difficult;meanwhile adjuvant therapy remains quite ***:In the current report,a new therapeutic approach in curing malignant neoplasms has been performed on the U87 human glioblastoma *** approach,termed"Karanahan",is aimed at the eradication of cancer stem cells(CSCs),which were recently shown to be capable of internalizing fragments of extracellular double-stranded *** being internalized,these fragments interfere in the process of repairing interstrand cross-links caused by exposure to appropriate cytostatics,and such an interference results either in elimination of CSCs or in the loss of their tumorigenic *** of the approach requires a scheduled administration of cytostatic and complex composite double-stranded DNA ***:U87 cells treated in vitro in accordance with the Karanahan approach completely lost their tumorigenicity and produced no grafts upon intracerebral transplantation into immunodeficient *** SCID mice with developed subcutaneous grafts,the treatment resulted in reliable slowing down of tumor growth rate(P<0.05).In the experiment with intracerebral transplantation of U87 cells followed by surgical excision of the developed graft and subsequent therapeutic treatment,the Karanahan approach was shown to reliably slow down the tumor growth rate and increase the median survival of the mice twofold relative to the ***:The effectiveness of the Karanahan approach has been demonstrated both in vitro and in vivo in treating developed subcutaneous grafts as well as orthotopic grafts after surgical excision of the tumor.

关键词： Glioblastoma U87 cell line mytomycin C cancer stem cells tamra

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基于核酸杂交链式反应的新型生物传感器的研究

基于核酸杂交链式反应的新型生物传感器的研究

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作者：陈莹福州大学

学位级别：硕士

杂交链式反应(HCR)作为一种新型的体外核酸扩增技术,近年来引起了研究者们的广泛关注。其实验原理是基于两个自身稳定的核酸发夹探针只有在目标DNA存在下才开始杂交,并自组装形成一条带切口的dsDNA长链。荧光共振能量转移(FRET)是一种... 详细信息

杂交链式反应(HCR)作为一种新型的体外核酸扩增技术,近年来引起了研究者们的广泛关注。其实验原理是基于两个自身稳定的核酸发夹探针只有在目标DNA存在下才开始杂交,并自组装形成一条带切口的dsDNA长链。荧光共振能量转移(FRET)是一种与两个荧光团之间的距离密切相关的基于近场偶极-偶极相互作用的能量转移。利用两个波长下荧光强度的比值所设计的比率型传感器可以减小外界因素(如激发光源的波动、荧光探针浓度的微小变化等)的干扰,检测结果更可靠。本论文基于HCR和FRET技术,构建了两种新的比率型荧光生物传感器。本论文主要分为以下三部分:第一章,简单介绍了几种体外核酸扩增技术的基本原理和应用,重点介绍了”…HCR技术在不同领域的应用;同时,也介绍了 FRET技术的原理及应用。最后提出了本论文的研究目的和主要内容。第二章,基于HCR和FRET技术,构建了一种灵敏的无酶DNA荧光传感器。根据目标DNA的碱基序列设计两个发夹探针H1和H2并分别标记FAM和tamra荧光团。当目标DNA存在时,基于链取代原理引发两个发夹探针发生HCR,自组装成带切口的dsDNA长链,FAM和tamra之间的距离靠近,引起tamra和FAM的相对荧光强度发生变化。该传感器检测目标DNA的线性范围为2.0～40.0 nM,检出限为0.7 nM。这种方法成功应用于血清模拟样品中DNA的检测。第三章,基于特异性识别Cu2+的DNAzyme,结合HCR和FRET技术,构建了一种新型检测水溶液中Cu2+的荧光传感器。利用生物素-链酶亲和素相互作用将标记生物素的DNAzyme修饰到磁珠上。当Cu2+存在时,DNAzyme被Cu2+特异性切割,释放出的单链DNA作为引物引发发夹探针H1和H2发生HCR,自组装成的带切口的长链dsDNA,弓引起分别标记在H1和H2上的供体FAM和受体tamra之间的距离靠近,产生FRET。受体和供体的荧光强度比值的改变量与Cu2+浓度在1.0～100.0 nM范围内有良好的线性,检出限为0.5 nM。这种方法应用于自来水中的Cu2+的检测,具有较好的回收率。

关键词：杂交链式反应(HCR) 荧光共振能量转移(FRET) 比率测量磁珠 FAM tamra DNA Cu2+

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