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实用儿科临床杂志 2011年第4期26卷 262-264页

作者：张云韩继敏王锁英潘小晶江苏大学附属医院儿科江苏镇江212001

目的观察携带t-bet基因的重组腺相关病毒(rAAV-t-bet)转染对呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型小鼠呼吸道炎症的影响。方法健康6～8周龄Balb/c小鼠40只。按随机数字表法分为4组:正常对照组(A组)、RSV感染模型组(B组)、模型/对照病毒rAAV载体... 详细信息

目的观察携带t-bet基因的重组腺相关病毒(rAAV-t-bet)转染对呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型小鼠呼吸道炎症的影响。方法健康6～8周龄Balb/c小鼠40只。按随机数字表法分为4组:正常对照组(A组)、RSV感染模型组(B组)、模型/对照病毒rAAV载体介导的增强型绿色荧光蛋白(rAAV-eGFP)干预组(C组)及模型/rAAV-t-bet干预组(D组),每组10只。将B组、C组和D组小鼠用滴度为1.26×1010PFU.L-1的RSV液滴鼻,每只100μL;A组用等量人喉癌上皮细胞(Hep-2细胞)培养上清液代替RSV液。于RSV接种第5天,再次麻醉小鼠,A组和B组经鼻滴入293细胞培养上清液;C组经鼻滴入293细胞包装的rAAV-eGFP对照病毒液,D组经鼻滴入293细胞包装的rAAV-t-bet。7 d后处死小鼠,检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞成分及IL-4和γ干扰素(IFN-γ)水平,并观察其肺组织病理学变化。结果 1.B组小鼠BALF中细胞总数和淋巴细胞计数百分比分别为(43.91±10.41)×109L-1、(65.15±1.88)%,A组分别为(14.52±3.57)×109L-1、(25.79±1.07)%,A组与B组比较差异均有统计学意义(Pat-bet基因转染能改善RSV感染模型小鼠呼吸道内细胞因子IL-4和IFN-γ异常表达,同时对淋巴细胞在肺内聚集、肺组织炎症有一定抑制作用。

关键词： t-bet基因呼吸道合胞病毒基因转染小鼠

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小鼠t-bet基因真核表达载体的构建

广东医学 2005年第10期26卷 1332-1334页

作者：檀卫平麦友刚黄嘉凌刘然义麦贤弟黄绍良黄文林中山大学附属第二医院儿科广州510120 中山大学肿瘤防治中心广州5100160

目的构建小鼠t—bet基因重组真核表达载体pcDNA3一t—bet,为t—bet基因治疗研究提供有效的生物表达系统。方法采用内切酶切从质粒t—bet/GFP—RV中获得约1.7 kb的小鼠t—betcDNA片段,以单酶切非定向克隆方式与真核表达质粒pcDNA3连接,... 详细信息

目的构建小鼠t—bet基因重组真核表达载体pcDNA3一t—bet,为t—bet基因治疗研究提供有效的生物表达系统。方法采用内切酶切从质粒t—bet/GFP—RV中获得约1.7 kb的小鼠t—betcDNA片段,以单酶切非定向克隆方式与真核表达质粒pcDNA3连接,构建真核表达载体pcDNA3-t-bet。结果经PCR筛选阳性重组子,双酶切鉴定t—bet基因重组方向,并测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变。结论本实验成功构建了小鼠t—bet基因真核表达载体pcDNA3-t-bet。

关键词： t-bet基因真核表达载体peDNA3-t-bet 小鼠基因真核表达载体重组真核表达载体 cDNA片段真核表达质粒酶切鉴定 pcDNA3 阳性重组子

Behcet’s病患者外周血和结节性红斑组织中t-bet基因的表达及意义

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眼科研究 2004年第1期22卷 1-4页

作者：李兵杨培增张震周红颜黄祥坤褚利群张锐俞琼中山大学中山眼科中心免疫室广州510060

目的观察th1细胞特异性转录因子t-bet(t-boxexpressintcells)在活动期Behcet’s病患者外周血单个核细胞和结节性红斑组织中的表达情况,探讨t-bet在Behcet’s病发病中的作用和地位。方法收集14例活动期Behcet’s病患者和12例正常人外周血... 详细信息

目的观察th1细胞特异性转录因子t-bet(t-boxexpressintcells)在活动期Behcet’s病患者外周血单个核细胞和结节性红斑组织中的表达情况,探讨t-bet在Behcet’s病发病中的作用和地位。方法收集14例活动期Behcet’s病患者和12例正常人外周血,采用Western免疫印迹检测外周血单个核细胞的t-bet的表达水平;对4例Behcet’s病活动期患者腿或臂部结节性红斑组织进行免疫组织化学染色观察的t-bet表达。结果14例活动期Behcet’s病患者均可检测到相对分子质量约为62000的特征性免疫印迹带,所有的正常对照却没有发现。正常人皮肤表皮t-bet分子表达均为阴性,4例结节性红斑表皮t-bet分子均表达阳性,表皮阳性细胞数为108个±10个/mm2,阳性表达率为35%～42%。结论活动期Behcet’s病外周血单个核细胞和结节性红斑组织t-bet的表达均显著增高,t-bet分子可能在Behcet’s病发病机制中起重要作用。

关键词： Behcet’s病外周血结节性红斑 t-bet基因表达

t-bet和Gata-3基因在脐带血中的表达特点

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 569-571页

作者：林锦绒陈少华李萡杨力建李扬秋暨南大学第一附属医院妇产科暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:了解转录因子t-bet和Gata-3基因在脐带血中的表达情况。方法:采用实时定量Rt-PCR检测21例脐带血单个核细胞(CBMC)中转录因子t-bet和Gata-3基因的表达水平,21例健康成人外周血单个核细胞(PBMC)作为对照。结果:t-bet基因和Gata-3基因... 详细信息

目的:了解转录因子t-bet和Gata-3基因在脐带血中的表达情况。方法:采用实时定量Rt-PCR检测21例脐带血单个核细胞(CBMC)中转录因子t-bet和Gata-3基因的表达水平,21例健康成人外周血单个核细胞(PBMC)作为对照。结果:t-bet基因和Gata-3基因在CBMC和PBMC中均存在一定表达,Gata-3基因在CBMC中的表达水平(0.43±0.35)%与PBMC(0.42±0.27)%相比无明显差异(P=0.925),而t-bet基因在CBMC中的表达水平(0.47±0.48)%则明显低于健康成人组(2.12±1.48)%(P=0.000)。结论:CBMC中t-bet基因表达低下,可能与脐带血移植后GVHD发生率低下以及发生程度较轻有关。

关键词： t-bet基因 Gata-3基因脐带血实时定量Rt-PCR

t-bet和c-FLIP双基因共表达质粒的构建及生物学活性检测

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第三军医大学学报 2008年第24期30卷 2272-2275页

作者：伊远学李宝金刘晓平张超张维冯子毅冷希圣北京大学香港科技大学医学中心北京大学深圳医院肝胆腔镜外科广东深圳518036 北京大学人民医院肝胆外科北京100044

目的构建携带t-bet和c-FLIP双基因的真核表达载体及检测其生物学活性。方法采用Rt-PCR方法从人外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出t-bet和c-FLIPcDNA,利用pIRES和pEGFP-C1,构建t-bet和c-FLIP双基因真核表达载体pEGFPt-bet-IRES-c-FLIP。采... 详细信息

目的构建携带t-bet和c-FLIP双基因的真核表达载体及检测其生物学活性。方法采用Rt-PCR方法从人外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出t-bet和c-FLIPcDNA,利用pIRES和pEGFP-C1,构建t-bet和c-FLIP双基因真核表达载体pEGFPt-bet-IRES-c-FLIP。采用非脂质体的脂质型介导载体将pEGFPt-bet-IRES-c-FLIP转染至外周血淋巴细胞,观察t-bet和c-FLIP在外周血淋巴细胞中的表达,并检测其诱导淋巴细胞的抗凋亡作用及th1/th2细胞偏移。结果成功构建pEGFPt-bet-IRES-c-FLIP质粒,运用非脂质体的脂质型介导载体将该质粒转染淋巴细胞,其转染率为34.6%。流式细胞仪分析未经pEGFPt-bet-IRES-c-FLIP预处理的淋巴细胞在CH-11作用24h后,细胞的凋亡率分别为(50.12±8.02)%;经pEGFPt-bet-IRES-c-FLIP预处理1d的淋巴细胞,其细胞凋亡率分别下降到(5.73±0.37)%;双基因表达的淋巴细胞的th1型细胞因子IFN-γ表达水平明显高于空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞组(Pth2型细胞因子IL-4表达水平较空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞低(Pt-bet和c-FLIP共表达基因后的t淋巴细胞可产生抗凋亡作用及向th1细胞分化。

关键词： t-bet基因 c-FLIP基因 pEGFP-C1 t淋巴细胞生物学活性共表达

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人t-bet基因的克隆及序列分析

江苏大学学报（医学版） 2006年第2期16卷 109-111,119页

作者：杨敏王锁英王胜军马洁毛朝明邱谷风许小朋邵启祥许化溪江苏大学医学技术学院免疫研究室江苏镇江212001 江苏大学附属医院儿科江苏镇江212001

目的:克隆人t-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究th1/th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用Rt-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得t-bet基因的cDNA;连接至pGEM-teasy载体,导入大肠... 详细信息

目的:克隆人t-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究th1/th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用Rt-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得t-bet基因的cDNA;连接至pGEM-teasy载体,导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆;应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。结果:扩增得到的t-bet基因cDNA全长1 670 bp,包括编码区1 607 bp,编码530个氨基酸残基,与Gen-bank中发表的序列完全一致。结论:获得了人t-bet基因的克隆,为进一步研究其生物学功能构建了基础平台,为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。

关键词： t-bet基因 cDNA克隆 Rt-PCR

t—bet质粒基因转染对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液白细胞介素13和内皮素1的影响

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中华生物医学工程杂志 2011年第2期17卷 120-123页

作者：徐小彩檀卫平吴葆菁麦贤弟黄花荣中山大学附属第二医院儿科广州510120

目的观察气道内t-bet质粒基因转染对哮喘小鼠气道肺泡灌洗液白细胞介素13（IL13）、内皮素1（Et-1）的影响.方法 C57BL/6J小鼠32只,完全随机分为4组（n=8）,即哮喘模型组（A组）、正常对照组（B组）、空质粒干预组（C组）和模型t-bet... 详细信息

目的观察气道内t-bet质粒基因转染对哮喘小鼠气道肺泡灌洗液白细胞介素13（IL13）、内皮素1（Et-1）的影响.方法 C57BL/6J小鼠32只,完全随机分为4组（n=8）,即哮喘模型组（A组）、正常对照组（B组）、空质粒干预组（C组）和模型t-bet质粒干预组（D组）.用卵白蛋白（OVA）抗原溶液小鼠腹腔注射致敏,滴鼻造模.B组用生理盐水代替卵白蛋白,C组和D组卵白蛋白激发48 h前,分别经鼻滴入50μg空质粒或重组t-bet质粒.免疫印迹检测和酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组小鼠的支气管肺泡灌洗液中IL-13、Et-1的水平.结果哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中th2因子IL-13和Et-1水平比正常对照组升高[（2.32±0.40）ng/L比（0.38±0.16）ng/L,（40.07±6.52）ng/L比（14.16±0.51）ng/L,均P＜0.05];模型t-bet质粒干预组BALF中th2因子IL-13和Et-1水平[（1.16±0.19）和（23.08±2.59）ng/L]比哮喘模型组降低（均P＜0.05）.结论气道内转染t-bet质粒能有效下调小鼠BALF中th2因子IL-13及Et-1水平.

关键词：支气管肺泡灌洗液哮喘 t-bet基因白介素13 内皮素1

StAt4、t-bet和IL-2基因多态性与中国汉族人群哮喘的相关性研究

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STAT4、T-bet和IL-2基因多态性与中国汉族人群哮喘的相关性研究

作者：张文静山东大学

学位级别：硕士

[研究背景] 哮喘是由多种炎症细胞(嗜酸性粒细胞、肥大细胞和t淋巴细胞)参与、由IgE介导的慢性炎症性疾病,是一种由遗传因素和环境因素共同作用的多基因遗传病,主要表现为气道高反应性、气道阻塞、气道炎症和气道重构。临床以反复发作... 详细信息

[研究背景] 哮喘是由多种炎症细胞(嗜酸性粒细胞、肥大细胞和t淋巴细胞)参与、由IgE介导的慢性炎症性疾病,是一种由遗传因素和环境因素共同作用的多基因遗传病,主要表现为气道高反应性、气道阻塞、气道炎症和气道重构。临床以反复发作的咳嗽、喘鸣和呼吸困难为主要表现,可自愈或经药物缓解。近年来陆续报道哮喘发生与th1、th2细胞分化不平衡有关。StAt4(signaltransducer and activator of transcription 4)---t-bet(t-box expressed in t cells)途径与StAt6---GAtA3途径分别被认为是th1细胞与th2细胞分化的两种主要途径。任何一条途径出现异常都会导致th1/th2细胞分化异常。已知th2细胞的分化与哮喘发生密切相关,th1方向分化减弱或者th2方向分化增强都将导致免疫调节失常,引起哮喘。2005年,Park等在韩国人群中发现StAt4基因的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)与哮喘相关,并认为StAt4是特异性IgE产生的遗传学因素之一。t-bet是th1分化的重要转录因子。Susetta等报道t-bet基因缺失的小鼠会发生哮喘。同时在2006年发现,t-bet基因多态位点与美国人群哮喘和气道高反应性相关。2005年在日本人群中也发现,t-bet基因多态位点与药物诱发的哮喘相关。IL-2位于4q27,包含4个外显子,2006年,Ulla Christensen等首次报道IL-2可作为哮喘的候选基因,并在丹麦人群中发现IL-2基因的两个多态位点与IgE介导过敏性疾病相关。上述遗传学研究提示StAt4、t-bet和IL-2基因在不同人群中与哮喘和气道高反应性有不同程度的相关性,但到目前为止,上述三个基因在中国汉族人群中与哮喘的相关性尚未见报道。 [研究目的] 利用病例—对照方法探讨StAt4、t-bet及IL-2基因的三个多态位点与中国汉族人群哮喘之间的相关性。这些多态位点分别是:StAt4基因启动子区域SNP位点—608 A＞G,t-bet基因—1993 t＞C,IL-2基因启动子区域—92t＞G。 [研究方法] 1.哮喘组与对照组样本收集:收集中国汉族哮喘患者及正常对照个体外周血样,提取基因组DNA。收集的哮喘患者均符合支气管哮喘的诊断标准;正常对照个体均无哮喘及其他过敏性疾病症状与病史,排除肝、肾疾病。 2.基因分型,基因型及等位基因频率统计:用PCR-RFLP方法对StAt4基因—608 A＞G位点分型;用tetra-primer ARMS-PCR方法对t-bet基因—1993t＞C位点和IL2基因—92 t＞G位点分型。根据琼脂糖凝胶电泳结果确定个体基因型,计算各位点在哮喘组及对照组中的基因型频率及等位基因频率。 3.Hardy-Weinberg平衡吻合度检验:根据Hardy—Weinberg平衡定律计算各多态位点在哮喘组和对照组的预期基因型频率,采用卡方检验进行组间比较。 4.基因型与等位基因分布差异检测:采用卡方检验比较各多态位点在哮喘组与对照组的基因型与等位基因频率差异,检验多态位点与哮喘的相关性。 [结果] 1.StAt4基因多态位点—608 A＞G,在哮喘组中,A/A、A/G、G/G基因型频率分别是0.536、0.377和0.086,在对照组中分别是0.515、0.399和0.086;等位基因A和G的频率在哮喘组分别是0.725和0.275,在对照组分别是0.715和0.285,经χ检验P=0.889。 2.t-bet基因多态位点—1993 t＞C,哮喘组中,t/t、t/C、C/C基因型频率分别是0.630、0.315、0.055,在对照组中分别是0.632、0.324、0.044;等位基因t和C的频率在哮喘组分别是0.788、0.212,在对照组分别是0.794、0.206,经χ检验P=0.837。 3.IL-2基因多态位点—92 t＞G,哮喘组中,t/t、t/G、G/G基因型频率分别是0.344、0.511、0.145,在对照组中分别为0.331、0.532、0.137;等位基因t、G的频率在哮喘组分别为0.599和0.401;在对照组分别为0.597和0.403,经χ检验P=0.894。 [结论] StAt4基因多态位点—608 A＞G,t-bet基因多态位点-1993 t＞C以及IL-2基因多态位点—92 t＞G在中国汉族人群中与哮喘无显著相关,但不排除这三个基因内的其它多态位点与哮喘相关。

关键词：哮喘相关性单核苷酸多态 StAt4基因 t-bet基因 IL-2基因

Behcet病患者结节性红斑组织中t-bet基因的表达及意义

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中国新医药 2003年第4期2卷 1-2页

作者：李兵周红颜黄祥坤中山大学中山眼科中心510060

摘要目的观察th1细胞特异性的转录因子t-bet(t-box express in t cells)在Behcet病患者结节性红宽组织中的表达情况，探讨其在Behcet病结节性红斑发生中的作用和地住。方法对4例Behcet病活动期患者腿或臂部结节性红斑进行t-bet表达的... 详细信息

摘要目的观察th1细胞特异性的转录因子t-bet(t-box express in t cells)在Behcet病患者结节性红宽组织中的表达情况，探讨其在Behcet病结节性红斑发生中的作用和地住。方法对4例Behcet病活动期患者腿或臂部结节性红斑进行t-bet表达的免疫组织化学染色，以正常皮肤作对照，比较结节性红斑组织t-bet分子的表达情况。结果正常人皮肤表皮t-bet分子表达均为阴性，4例结节性红斑表皮t-bet分于均表达阳性，表皮阳性细胞数为108+10个／mm^2，阳性表达率为35-42％。结论 Behcet’s病结节性红斑组织中存在相当数量t-bet表达的活化淋巴细胞，这些细胞在结节红斑的形成中可能起着重要的作用。

关键词： Behcet病结节性红斑 t-bet基因转录因子自身免疫性疾病