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雾化吸入母牛分枝杆菌对哮喘小鼠γδt细胞及t-bet/gata3转录因子的调控作用

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雾化吸入母牛分枝杆菌对哮喘小鼠γδT细胞及T-bet/GATA3转录因子...

作者：姚意恩广西医科大学

学位级别：硕士

第一部分雾化吸入母牛分枝杆菌对tCR-β基因敲除小鼠γδt细胞的影响目的研究雾化吸入母牛分枝杆菌对tCR-β基因敲除小鼠γδt细胞亚型的调控作用。方法选取SPF级雄性tCR-β小鼠40只随机分为2组,20只每组。分别是:生理盐水雾化对照组(A... 详细信息

第一部分雾化吸入母牛分枝杆菌对tCR-β基因敲除小鼠γδt细胞的影响目的研究雾化吸入母牛分枝杆菌对tCR-β基因敲除小鼠γδt细胞亚型的调控作用。方法选取SPF级雄性tCR-β小鼠40只随机分为2组,20只每组。分别是:生理盐水雾化对照组(A组)、母牛分枝杆菌雾化组(B组)。两组小鼠分别放于密闭的雾化器内,分别予生理盐水、母牛分枝杆菌雾化。雾化时,B组将1支注射用母牛分枝杆菌注射液(22.5ug/ml)经10ml生理盐水稀释,A组则用10ml生理盐水代替,两组均雾化30min,每天一次,连续雾化5天。最后一次雾化后24小时内杀鼠,用分选器经磁珠分选提取脾脏的γδt细胞留备用,同时流式细胞术检测小鼠脾脏组织分选的细胞悬液γδt细胞纯度及γδt细胞分泌IL-17及Foxp3的情况。结果流式结果显示:与对照组对比,母牛分枝杆菌雾化后小鼠脾脏γδt17下降,γδtreg上升(pt细胞亚群γδt17/γδtreg比例。结论γδt细胞存在γδt17/γδtreg亚群及免疫调节模式,雾化吸入母牛分枝杆菌能调节γδt细胞γδt17/γδtreg平衡,表现为γδtreg优势应答。母牛分枝杆菌雾化可以使γδt细胞增值、活化,γδt细胞亚群比例发生改变,γδt17下降,γδtreg升高,可能通过激活的γδt细胞亚群,调节气道炎症反应,参与哮喘的发生发展。第二部分鼠尾过继输入γδt细胞对哮喘模型小鼠t-bet/gata-3及Notch表达的影响目的研究鼠尾过继输入γδt细胞对哮喘小鼠的影响,探讨母牛分枝杆菌雾化吸入对哮喘小鼠的影响及其机制。方法选取SPF级健康雄性Balb/c小鼠32只随机分为4组。分别是:A组对照组、B组哮喘模型组、C组tCR-β小鼠经生理盐水雾化后提取的γδt细胞过继组(作为D组的对照组)、D组tCR-β小鼠经母牛分枝杆菌雾化后提取γδt细胞过继组。B组、C组、D组三组均构建小鼠哮喘模型,用鸡卵清蛋白(OVA)腹腔注射加雾化吸入制作哮喘模型。C组在第一次腹腔注射OVA前10 min及第21天雾化OVA激发前10 min,予以鼠尾注射过继tCR-β小鼠经生理盐水连续雾化5天后用磁珠分选器提取的γδt细胞,每次鼠尾注射10个γδt细胞,共注射两次;而D组则是在第一次腹腔注射OVA前10min及第21天雾化OVA激发前10 min,予以鼠尾静脉注射过继tCR-β小鼠经母牛分枝杆菌连续雾化5天后用磁珠分选器提取的γδt细胞,每次鼠尾静脉注射10个γδt细胞,共注射两次。A组用生理盐水腹腔注射及雾化,与建模过程形成对照。最后一次雾化后24小时内杀鼠,对小鼠肺泡进行肺泡灌洗以收集肺泡灌洗液(BALF),ELISA方法检测BALF的IL-17A水平。解剖小鼠肺脏,取出左肺处理,留组织病理切片,用以HE染色和过碘酸-雪夫染色(PAS),观察肺内炎症浸润的病理情况;免疫组化、免疫荧光和WB检测肺组织中t-bet/gata3、NICD蛋白的表达。流式细胞术检测小鼠肺脏组织内IL-17γδt及Foxp3γδt细胞百分比及小鼠体内炎症指标。结果与B组相比,D组小鼠气道反应性、气道炎症明显减轻。BALF中IL-17A水平下降显著。免疫组化、免疫荧光结果示t-bet蛋白水平升高、gata3水平下降,WB结果示肺组织中NICD(Notch胞内域)表达显著降低,与对照组相比差异具有统计学意义(pt明显高于A组(p3γδt(5.4±05),哮喘组(2.4±0.6)肺组织中表达降低,差异具有统计学意义(p3γδt表达明显降低(p3γδt细胞百分比呈明显负相关(r=-0.81,pt细胞过继后影响γδt17和γδtreg细胞百分比,过继γδt(母牛分枝杆菌)细胞的哮喘模型组γδt17下降而γδtreg上升,过继γδt(NS)细胞的哮喘模型组γδt17升高但γδtreg上升。结论鼠尾过继输入对哮喘小鼠的作用机制可能是:(1)输入的γδt细胞本身的直接作用;(2)输入的γδt细胞调节了t-bet/gata3比例,即输注γδt细胞中的γδtreg细胞可以抑制Notch通路,调节th1/th2分化,进而调节了t-bet/gata3比例。γδt细胞参与哮喘的发生和发展;雾化吸入母牛分枝杆菌能调节γδt细胞γδt17/γδtreg平衡而防治哮喘,并可能与抑制Notch通路有关。

关键词：支气管哮喘母牛分枝杆菌 γδt细胞 γδt17/γδtreg t-bet/gata3 Notch信号通路

消银汤对血热型银屑病患者疗效及外周血t-bet/gata3平衡的影响

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中国中西医结合皮肤性病学杂志 2012年第2期11卷 74-77页

作者：汪五清王峰高志祥卜晓琳顾军复旦大学附属华山医院南汇分院皮肤科上海201300 第二军医大学附属长海医院皮肤科上海200433

目的从消银汤对血热型银屑病患者疗效及血清中t-bet/gata3平衡影响,探讨消银汤治疗银屑病的作用机制。方法观察30例寻常性银屑病患者治疗前后银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分、中医辨证评分的变化及外周血中t-bet、gata3及t-bet/GA... 详细信息

目的从消银汤对血热型银屑病患者疗效及血清中t-bet/gata3平衡影响,探讨消银汤治疗银屑病的作用机制。方法观察30例寻常性银屑病患者治疗前后银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分、中医辨证评分的变化及外周血中t-bet、gata3及t-bet/gata3水平变化,并对其与皮损严重度作相关分析。结果银屑病患者外周血t-bet及t-bet/gata3分别为0.14±0.07、5.55±0.97,明显高于健康对照者(Pgata3为0.15±0.06,明显低于健康对照者(Pt-bet、t-bet/gata3较治疗前明显下降(Pgata3水平治疗后与治疗前改变不明显。t-bet/gata3与银屑病皮损严重程度呈正相关。结论消银汤对血热型银屑病患者疗效满意,可显著降低患者血清t-bet、t-bet/gata3水平。

关键词：消银汤银屑病 t-bet/gata3

转录因子t-bet/gata3在肺癌患者中的基因表达状况及药物的干预研究

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转录因子T-bet/GATA3在肺癌患者中的基因表达状况及药物的干预研究

消银汤对血热型银屑病患者疗效及对外周血t-bet/gata3平衡的影响

山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会

作者：魏海明田志刚许晓群冯进波肖伟山东医学科学院基础医学研究所山东大学医学院

研究发现th1/th2分化与多种疾病有关,如肿瘤病人出现典型的th2漂移,自身免疫病表现为th1型,变态反应表现为th2型。我们的前期研究工作也发现肿瘤细胞表达的IFN和IL-2等th1类细胞因子明显降低,IL-4 IL-6,IL-10等th2类细胞因子明显增高,这... 详细信息

研究发现th1/th2分化与多种疾病有关,如肿瘤病人出现典型的th2漂移,自身免疫病表现为th1型,变态反应表现为th2型。我们的前期研究工作也发现肿瘤细胞表达的IFN和IL-2等th1类细胞因子明显降低,IL-4 IL-6,IL-10等th2类细胞因子明显增高,这种th2型漂移现象与肿瘤细胞的免疫逃逸密切相关。本研究进一步对42例肺癌患者

关键词：肺癌患者 t-bet/gata3 基因表达干预研究

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消银汤对血热型银屑病患者疗效及对外周血T-bet/GATA3平衡的影响

基于“治未病”理论探讨电针对DOR大鼠th1/th2免疫平衡的影响

2013中华中医药学会皮肤病分会第十次学术交流大会暨湖南省中西医结合皮肤性病第八次学术交流大会

作者：汪五清上海市闵行区中心医院

目的;从消银汤对血热型银屑病患者疗效、PASI评分变化及血清中t-bet/gata3平衡影响,探讨消银汤治疗银屑病的作用机制。方法:观察30例寻常性银屑病患者治疗前后PASI评分、中医辨证评分的变化及外周血中t-bet、gata3及t-bet/gata3水平变化... 详细信息

目的;从消银汤对血热型银屑病患者疗效、PASI评分变化及血清中t-bet/gata3平衡影响,探讨消银汤治疗银屑病的作用机制。方法:观察30例寻常性银屑病患者治疗前后PASI评分、中医辨证评分的变化及外周血中t-bet、gata3及t-bet/gata3水平变化,并对其与皮损严重度作相关分析。结果:银屑病患者外周血t-bet及t-bet/gata3分别为0.1380±0.06957、5.5528±0.9686,明显高于健康对照者(Pgata3为0.1540±.05910,明显低于健康对照者(Pt-be t、t-bet/gata3较治疗前明显下降(Pgata3水平治疗后与治疗前改变无明显差异性。t-bet/gata3与银屑病皮损严重程度呈正相关。结论:消银汤对血热型银屑病患者疗效满意,且可显著降低患者血清t-bet、t-bet/gata3水平。

关键词：消银汤银屑病 t-bet/gata3 细胞因子

来源： cnki会议评论

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南京中医药大学学报 2023年第4期39卷 328-336页

作者：朱瑶瑶秦彦桐李红晓尹尧丽卢鸽沈梅红南京中医药大学针灸推拿学院·养生康复学院江苏南京210023

目的基于“治未病”理论,探讨电针对雷公藤多苷诱导的卵巢储备功能减退(Diminished ovarian reserve,DOR)模型大鼠卵巢功能和th1/th2免疫平衡的影响。方法将27只动情周期正常的雌性SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组9只... 详细信息

目的基于“治未病”理论,探讨电针对雷公藤多苷诱导的卵巢储备功能减退(Diminished ovarian reserve,DOR)模型大鼠卵巢功能和th1/th2免疫平衡的影响。方法将27只动情周期正常的雌性SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组9只。模型组和电针组采用雷公藤多苷片混悬液按50 mg·kg^(-1)·d^(-1)连续灌胃14 d,每日1次,空白组每日给予1次等体积的生理盐水灌胃,连续14 d。电针组大鼠在灌胃1 h后,进行电针干预,选取“中脘”“关元”或双侧“肾俞”穴,2组穴位隔日交替,每日1次,每次10 min,连续14 d。电针参数设置为2/100 Hz疏密波(疏波与密波交替持续的时间各约1.5 s),电流强度为1.0 mA。每日采用阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期;干预结束后,采用HE染色观察卵巢组织学形态;ELISA检测大鼠血清FSH、E 2、IL-4、IFN-γ含量;免疫组化、Western blot和qPCR分别检测大鼠卵巢组织中t-bet、gata3蛋白及mRNA的表达情况;流式细胞术检测大鼠脾脏th1、th2细胞比例并计算th1/th2比值。结果与空白组相比,模型组大鼠原始卵泡减少(Pt-bet蛋白及mRNA表达增多(Pgata3蛋白及mRNA表达减少(Pt-bet/gata3比值升高(Pth1细胞比例及th1/th2比值升高(Pth2细胞比例降低(Pt-bet蛋白及mRNA表达减少(Pgata3蛋白及mRNA表达增多(Pt-bet/gata3比值降低(Pth1细胞比例及th1/th2比值降低(Pth2细胞比例升高(Pth1/th2免疫平衡有关。

关键词：卵巢储备功能减退电针 th1/th2 t-bet/gata3

苍芷通鼻滴雾剂对变应性鼻炎大鼠的初步药效观察

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中药药理与临床 2019年第4期35卷 183-186页

作者：陈正元宋承霖吴玉环王碧霞陈儒科李钦鸿周佩佩刘进先刘福英熊天琴广州中医药大学中药学院广州510006 广州天河区中医院广州510000

目的:观察苍芷通鼻滴雾剂对变应性鼻炎(AR)模型大鼠的药效。方法:将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、丙酸倍氯米松0. 18 mg/kg组、苍芷通鼻滴雾剂2. 7 ml/kg、5. 4 ml/kg组。除对照组外,其余各组腹腔注射1ml含0. 3 mg卵清蛋白的氢氧... 详细信息

目的:观察苍芷通鼻滴雾剂对变应性鼻炎(AR)模型大鼠的药效。方法:将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、丙酸倍氯米松0. 18 mg/kg组、苍芷通鼻滴雾剂2. 7 ml/kg、5. 4 ml/kg组。除对照组外,其余各组腹腔注射1ml含0. 3 mg卵清蛋白的氢氧化铝佐剂溶液致敏,隔天一次,共7次。造模第15天开始,用10μl 10%的卵清蛋白生理盐水滴鼻激发,每天一次,第23天开始,滴鼻给予相应药物,共8天。从造模第15天开始,持续观察大鼠AR行为学指标。给药结束后取材,HE、AB-PAS、Masson染色观察鼻黏膜的病理改变,Elisa法检测大鼠血清中IL-4、IFN-γ及肺中tGF-β2、IL-5的含量,Western blot方法检测大鼠鼻黏膜中t-bet和gata3蛋白的表达。结果:OVA致敏后,大鼠行为学分数明显升高,给药之后显著降低。OVA造模后模型组黏膜充血,水肿,炎细胞浸润明显,基底层胶原增多,杯状细胞明显增多;给药后充血,水肿程度降低,炎症浸润有一定程度降低,胶原减少,杯状细胞数量有所下降。OVA造模后IL-4、IL-5明显升高,给药后显著降低。IFN-γ、tGF-β2造模之后显著降低,给药之后显著升高。t-bet、gata3蛋白造模后显著上调,给药后显著下调。结论:苍芷通鼻滴雾剂对大鼠变应性鼻炎的症状有明显改善作用,对鼻粘膜的损伤有修复作用。苍芷通鼻滴雾剂通过抑制变应性鼻炎发生过程中促炎因子表达,增强抑炎因子的表达发挥治疗作用。

关键词：苍芷通鼻滴雾剂变应性鼻炎促炎因子抑炎因子 t-bet/gata3

四物消风散加减治疗慢性湿疹的疗效观察及对慢性湿疹患者tH1/tH2平衡的影响

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重庆医科大学学报 2015年第12期40卷 1550-1554页

作者：曾丹周维康李惠吴音林岚重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400014 重庆市第三人民医院过敏反应科重庆400014 重庆市急救中心皮肤科重庆400014 重庆市中山医院皮肤科重庆400014

目的:观察四物消风散加减治疗慢性湿疹的疗效及其对慢性湿疹患者tH1/tH2平衡的影响。方法:将纳入试验的患者随机分为治疗组和对照组,治疗组36例,对照组36例,治疗组用中药四物消风散加减,对照组口服盐酸非索非拉定,比较2组患者在治疗2周... 详细信息

目的:观察四物消风散加减治疗慢性湿疹的疗效及其对慢性湿疹患者tH1/tH2平衡的影响。方法:将纳入试验的患者随机分为治疗组和对照组,治疗组36例,对照组36例,治疗组用中药四物消风散加减,对照组口服盐酸非索非拉定,比较2组患者在治疗2周及4周的疗效;治疗前后检测外周血细胞因子IFN-γ、IL-4以及t-bet/gata3的水平。结果:2组总有效率在第2周时分别为63.9%、38.9%,治疗组明显优于对照组;在第四周时分别为83.3%、61.1%,治疗组有效率明显高于对照组,2组比较差异有统计学意义(t=4.662,P=0.031)。治疗组、对照组在治疗后细胞因子IFN-γ、t-bet/gata3较治疗前明显升高,IL-4较治疗前下降;治疗组细胞因子IFN-γ、IL-4及转录因子t-bet/gata3的变化明显优于对照组,2组比较差异有统计学意义(t=15.31、10.64、8.68,P=0.001、0.002、0.004)。2组用药过程中均无明显不良反应。结论:中药四物消风散加减治疗慢性湿疹有效,其机理可能是通过调节IFN-γ、IL-4的水平,同时影响转录因子t-bet/gata3的比值,恢复tH1/tH2平衡。

关键词：四物消风散慢性湿疹细胞因子 tH1/tH2 t-bet/gata3

益气养阴法逆转老年非小细胞肺癌患者th1/th2漂移状态的分子机制研究

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益气养阴法逆转老年非小细胞肺癌患者Th1/Th2漂移状态的分子机制...

作者：王清睿华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分益气养阴法对老年非小细胞肺癌患者th2漂移的影响【目的】选择老年非小细胞肺癌的病例,观察单纯化疗、化疗加中药和单纯中药治疗前后的th1与th2细胞因子浓度的变化,探讨化疗以及益气养阴法对老年非小细胞肺癌患者th... 详细信息

第一部分益气养阴法对老年非小细胞肺癌患者th2漂移的影响【目的】选择老年非小细胞肺癌的病例,观察单纯化疗、化疗加中药和单纯中药治疗前后的th1与th2细胞因子浓度的变化,探讨化疗以及益气养阴法对老年非小细胞肺癌患者th2漂移的影响。【方法】 60例中晚期老年非小细胞肺癌患者,随机分为单纯化疗组、化疗加中药组和单纯中药组,每组各20例。连续观察2个疗程,以酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血清中th1型细胞因子（IFN-γ、IL-2）及th2型细胞因子（IL-4、IL-10）的含量。【结果】单纯化疗组治疗后th1型细胞因子IFN-γ和IL-2水平与治疗前比较明显下降（P＜0.05或P＜0.01）,th2型细胞因子IL-4和IL-10水平较治疗前明显增高（P＜0.05）;化疗加中药组治疗后th2型细胞因子IL-4和IL-10水平与治疗前比明显降低（P＜0.05）;单纯中药组治疗后,th1型细胞因子IFN-γ和IL-2水平与治疗前比较明显提高（P＜0.05或P＜0.01）;与单纯化疗组比,化疗加中药治疗和单纯中药治疗th1型细胞因子水平明显增高,th2型细胞因子水平明显降低。【结论】化疗可以明显促进老年非小细胞肺癌患者th2漂移,益气养阴法有利于th1型细胞因子的分泌,逆转老年非小细胞肺癌患者的th2漂移状态,并能阻止化疗对th2漂移状态的促进作用。第二部分益气养阴法逆转老年非小细胞肺癌th2漂移状态的分子机制研究【目的】选择老年非小细胞肺癌的病例,观察单纯化疗、化疗加中药和单纯中药治疗后各组间外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMC）中核转录因子t-bet/gata3的mRNA浓度的差异,探讨益气养阴法对肺癌th2漂移状态逆转作用的分子机制。【方法】 60例中晚期老年非小细胞肺癌患者,随机分为单纯化疗组、化疗加中药组和单纯中药组,每组各20例。连续观察2个疗程,用逆转录聚合酶链反应（Rt-PCR）方法检测外周血单个核细胞（PBMC）中th1和th2型细胞核转录因子t-bet和gata-3的mRNA含量。【结果】化疗加中药组和单纯中药组治疗后与单纯化疗组比较,th1型核转录因子t-bet的mRNA表达增强,th2型核转录因子gata-3的mRNA表达减弱（P＜0.05或P＜0.01）。【结论】益气养阴法增强了th1型核转录因子t-bet的表达,降低了th2型核转录因子gata-3的表达,逆转老年非小细胞肺癌患者的th2漂移状态。这与前期实验对th1/th2型细胞因子的影响的结论相一致,说明益气养阴法逆转肺癌患者的th2漂移状态可能是通过对th1和th2型细胞的特异性核转录因子t-bet/gata-3表达的影响来调控由细胞因子、胞内信号转导通路和核转录因子三个环节组成的复杂分子网络而实现的。

关键词：老年非小细胞肺癌益气养阴法 th2漂移 t-bet/gata3

四物消风散加减治疗慢性湿疹的疗效观察及对慢性湿疹患者tH1/tH2平衡的影响

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四物消风散加减治疗慢性湿疹的疗效观察及对慢性湿疹患者TH1/TH2...

作者：曾丹重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：观察四物消风散加减治疗慢性湿疹的疗效及其对慢性湿疹患者tH1/tH2平衡的影响。方法：入选患者84例，由随机数字表产生随机号，3个参与单位各得到28个随机编号,患者按就诊时间顺序随机得到一个随机号。治疗组与对照组按照1:1的比... 详细信息

目的：观察四物消风散加减治疗慢性湿疹的疗效及其对慢性湿疹患者tH1/tH2平衡的影响。方法：入选患者84例，由随机数字表产生随机号，3个参与单位各得到28个随机编号,患者按就诊时间顺序随机得到一个随机号。治疗组与对照组按照1:1的比例分配,最终符合统计病例数为72例（剔除12例），将这72例患者随机分为治疗组和对照组，我们应用中药四物消风散加减作为治疗组，而对照组单纯口服盐酸非索非拉定，比较两组患者在治疗的第2周以及第4周的临床疗效;治疗前后检测外周血细胞因子IFN-γ、IL-4以及t-bet/gata3的水平。结果：两组总有效率在第2周时分别为63.9%、38.9%，在第4周时总有效率分别为83.3%、61.1%。两组比较，治疗组总有效率高于对照组总有效率，差异有统计学意义（pt-bet/gata3较治疗前明显升高，IL-4较治疗前下降;治疗组细胞因子IFN-γ、IL-4及转录因子t-bet/gata3的变化明显优于对照组，两组比较差异有统计学意义（pt-bet/gata3的比率来恢复tH1/tH2平衡。

关键词：四物消风散慢性湿疹细胞因子 tH1/tH2 t-bet/gata3