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荧光定量PCR检测t细胞受体删除环在亲缘与非亲缘异基因造血干细胞移植后免疫重建早期的应用

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福建医药杂志 2017年第5期39卷 139-143页

作者：王坤金静君杨婷韩俊永陈金烟薛士杰刘慎敏福建省医学科学研究院免疫研究所福建省医学测试重点实验室福州350001

目的检测接受亲缘与非亲缘的异基因造血干细胞移植(allogeneic hemopoietic stem cell transplant,alloHSCt)的恶性血液病患者免疫重建早期t细胞受体删除环(signal joint t-cell receptor excision circle,sjtREC)的水平,分析供受者间亲缘关系对免疫重建早期的影响。方法采用taqMan探针,Real-time PCR技术,对6例(2例亲缘,4例非亲缘)allo-HSCt恶性血液病患者在移植前及移植后6个月的外周血sjtREC进行绝对定量检测。结果每1 000个细胞中各组sjtREC水平分别为:亲缘组移植前(17.05±22.28)拷贝,移植后(24.26±25.50)拷贝;非亲缘组移植前(6.74±12.85)拷贝,移植后(28.30±19.12)拷贝。结论两组患者移植后的sjtREC水平较移植前均有所上升,但无论移植前后两组之间的差异均不明显,提示在allo-HSCt患者移植后的免疫重建受诸多因素共同影响,供者是否具有亲缘关系在小样本检测中未发现明显差异。

关键词： t细胞受体删除环异基因造血干细胞移植亲缘

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不同t细胞亚群t细胞受体删除环含量的评价

中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2013年第1期7卷 32-34页

作者：孟庆才朱鏐娈郝禹周海卫董晓君李彤赵红心孔雅娴蔺洁曾辉首都医科大学附属北京地坛医院北京100015 新发突发传染病研究北京市重点实验室上海交通大学北京中医药大学首都医科大学附属北京安贞医院

目的评价脓毒症等疾病对胸腺输出功能的影响,建立t细胞受体删除环(tREC)的检测方法。方法构建tREC质粒标准品,应用实时定量PCR法绘制标准曲线。选择不同年龄健康人的血液样本,提取其外周血单个核细胞(PBMCs),通过流式细胞术分选出不同... 详细信息

目的评价脓毒症等疾病对胸腺输出功能的影响,建立t细胞受体删除环(tREC)的检测方法。方法构建tREC质粒标准品,应用实时定量PCR法绘制标准曲线。选择不同年龄健康人的血液样本,提取其外周血单个核细胞(PBMCs),通过流式细胞术分选出不同亚群的t细胞,检测tREC含量(拷贝/tcell)。结果 10例健康人血液PBMCs分选的不同t细胞亚群均检出tREC。CD4^+CD45RA^+及CD8^+CD45RA^+初始t细胞亚群中tREC平均含量均高于相应CD45RO^+记忆t细胞亚群的含量,差异具有统计学意义(PtREC的方法,用于评价胸腺t细胞的输出。

关键词： t细胞受体删除环胸腺输出 t细胞亚群

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实时定量PCR评价小鼠胸腺功能方法的建立

南方医科大学学报 2006年第1期26卷 62-65页

作者：张华华曾耀英何贤辉刑飞跃暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏t淋巴细胞中信号结合t细胞受体删除环(sjtRECs)水平的方法,推测其中的初始t细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细... 详细信息

目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏t淋巴细胞中信号结合t细胞受体删除环(sjtRECs)水平的方法,推测其中的初始t细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增目的片段。纯化构建标准质粒的RAG2片段,构建标准重组质粒并鉴定。优化PCR体系后,实时定量PCR反应建立标准曲线,并检测不同品系(BALB／c和C57BL／6)成年小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞sjtRECs含量。结果成功构建标准质粒。确定最适实时定量PCR反应条件后,在实时定量PCR中建立可信度高的标准曲线。建立的方法分析表明,这两个不同品系的sjtRECs含量统计学差异不显著。结论成功建立定量检测小鼠t淋巴细胞中sjtRECs含量从而推测其中的初始t细胞数目的方法,为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。

关键词：实时定量PCR t细胞受体删除环幼稚t细胞

t细胞受体Dβ-Jβ sjtRECs连接区多样性

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免疫学杂志 2005年第1期21卷 37-39页

作者：李扬秋陈少华杨力建周羽竝耿素霞韩素芳暨南大学医学院血液病研究所广州510632

目的　了解t细胞受体Dβ Jβ重排形成的t细胞受体删除DNA环 (sjtRECs)连接区序列特点。方法　利用巢式PCR分别扩增 10例正常人外周血单个核细胞和 3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的tRECs的情况 ,PCR产物进一步进行... 详细信息

目的　了解t细胞受体Dβ Jβ重排形成的t细胞受体删除DNA环 (sjtRECs)连接区序列特点。方法　利用巢式PCR分别扩增 10例正常人外周血单个核细胞和 3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的tRECs的情况 ,PCR产物进一步进行克隆和序列分析以确定结合区的序列。结果　获得Dβ1与 5个Jβ1基因片段、Dβ2与 4个Jβ2基因片段分别形成的sjtRECs连接区序列 ,部分所形成sjtRECs的Jβ与Dβ之间存在核苷酸的随机插入 (N区 )等多样性。结论　Dβ JβsjtRECs的连接并非简单的头对头拼接方式。

关键词： t细胞受体 t细胞受体删除环 t细胞连接区多样性

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原发性免疫缺陷病新生儿筛查

中国实用儿科杂志 2017年第7期32卷 484-487页

作者：文旻王晓川复旦大学附属儿科医院临床免疫科上海201102

随着分子诊断技术的不断提高,原发性免疫缺陷病的新生儿筛查项目越来越普及。重症联合免疫缺陷病新生儿筛查的成功开展,为其他原发性免疫缺陷病的广泛筛查奠定了良好基础。具体包括无丙种球蛋白血症及家族性噬血细胞淋巴组织细胞增生症... 详细信息

随着分子诊断技术的不断提高,原发性免疫缺陷病的新生儿筛查项目越来越普及。重症联合免疫缺陷病新生儿筛查的成功开展,为其他原发性免疫缺陷病的广泛筛查奠定了良好基础。具体包括无丙种球蛋白血症及家族性噬血细胞淋巴组织细胞增生症等。文章通过回忆新生儿疾病筛查的发展历史,总结目前原发性免疫缺陷病筛查概况,旨在为临床医师提供参考,推行我国原发性免疫缺陷病筛查项目,降低该类疾病的发病率及致死率。

关键词：原发性免疫缺陷病新生儿筛查 t细胞受体删除环

tRECs联合CD31+调节性t细胞检测用于分析慢性乙型肝炎患者的胸腺新近输出功能

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TRECs联合CD31+调节性T细胞检测用于分析慢性乙型肝炎患者的胸腺...