检索结果-南通市图书馆

作者：杨莹婕湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究验证肾脑复元汤对铁死亡脑缺血再灌注模型大鼠system xc-/gpx4通路的干预作用,检测和探讨了system xc-/gpx4通路相关因子SLC7A11、gpx4的表达情况,讨论具备有一定研究基础的肾脑复元汤对该模型大鼠的缺血-再灌注损伤所起保... 详细信息

目的:本研究验证肾脑复元汤对铁死亡脑缺血再灌注模型大鼠system xc-/gpx4通路的干预作用,检测和探讨了system xc-/gpx4通路相关因子SLC7A11、gpx4的表达情况,讨论具备有一定研究基础的肾脑复元汤对该模型大鼠的缺血-再灌注损伤所起保护作用的机制,为我国中医药的有效防治提供新思路和新靶点的实验支持。方法:造模前使用随机数字法将72只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、肾脑复元汤组、去铁酮组,予以相应的干预处理,应用线栓法闭塞大鼠大脑中动脉建立脑缺血再灌注模型,通过神经行为学评分评定各组大鼠神经功能及损伤程度;透射电子显微镜观察各组脑组织细胞线粒体形态;普鲁士蓝染色法观察各组脑组织神经元的铁聚集情况;选择q RT-PCR和Western blot法检测各组脑组织中SLC7A11、gpx4的m RNA与蛋白表达情况,从铁死亡system xc-/gpx4信号通路探究肾脑复元汤对脑缺血再灌注模型大鼠的保护作用。结果:(1)神经行为学评分:相比假手术组,模型组的神经行为学评分明显升高,肾脑复元汤组和去铁酮组神经行为学评分明显低于模型组。(2)透射电子显微镜:透射电镜下可见假手术组脑组织神经元的线粒体形态结构正常、完整,模型组脑组织细胞中可见大量结构明显损伤的线粒体,呈现线粒体萎缩、双层膜密度增厚以及内膜嵴消失等铁死亡表现;对比模型组,肾脑复元汤组和去铁酮组线粒体损伤程度均明显减轻,线粒体结构趋于正常,膜密度较小,线粒体内膜嵴数量较多。(3)普鲁士蓝染色:相比假手术组,模型组脑组织经普鲁士蓝染色后可见较多数量铁颗粒聚集细胞,肾脑复元汤组和去铁酮组铁颗粒聚集细胞数量相比模型组明显减少。(4)q RT-PCR检测:模型组相关因子SLC7A11和gpx4的m RNA含量表达较假手术组明显降低;肾脑复元汤组和去铁酮组的脑缺血再灌注模型大鼠24小时SLC7A11、gpx4表达水平明显上升,其差异与模型组相较,具备显著性(Pgpx4的蛋白表达水平呈现明显降低结果,肾脑复元汤组和去铁酮组的24小时MACO/R大鼠均能够显著上调SLC7A11、gpx4的蛋白表达水平,其差异与模型组相较,具备显著性(P通过调控铁死亡system xc-/gpx4通路,上调相关因子SLC7A11、gpx4的表达,抑制神经元铁死亡发生,减少脑缺血再灌注引起的脑组织损伤,发挥神经保护作用。

关键词：肾脑复元汤脑缺血再灌注 system xc-/gpx4通路铁死亡

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Roseburia hominis介导system xc-/gpx4通路改善新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠屏障功能的机制研究

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解剖科学进展 2024年第4期30卷 371-374页

作者：张宇琦乔奇汪金方中国医科大学附属盛京医院小儿普外胸外新生儿外科辽宁沈阳110136

目的探究Roseburia hominis对新生大鼠坏死性小肠结肠炎诱导的肠屏障功能障碍的改善作用及机制。方法新生SD大鼠随机分为对照组(Control组)、坏死性小肠结肠炎模型组(Model组)和Roseburia hominis治疗组(RH组),每组10只。HE染色观察肠... 详细信息

目的探究Roseburia hominis对新生大鼠坏死性小肠结肠炎诱导的肠屏障功能障碍的改善作用及机制。方法新生SD大鼠随机分为对照组(Control组)、坏死性小肠结肠炎模型组(Model组)和Roseburia hominis治疗组(RH组),每组10只。HE染色观察肠道组织病理学变化;Western blot检测肠道组织Claudin-1、Occludin、ZO-1、SLC7A11和gpx4蛋白表达情况;ELISA检测肠道组织炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及MDA和4-HNE含量;免疫荧光检测肠道组织中ROS水平。结果给予Roseburia hominis能改善坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠道组织病理损伤,上调肠道组织中Claudin-1、Occludin和ZO-1蛋白表达,降低肠道组织中TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及MDA和4-HNE含量,抑制肠道组织中ROS水平并上调肠道组织中SLC7A11和gpx4蛋白表达。结论Roseburia hominis恢复肠屏障功能并改善坏死性小肠结肠炎诱导的肠道损伤,其机制可能与激活system xc-/gpx4信号通路抑制铁死亡有关。

关键词： Roseburia hominis 坏死性小肠结肠炎肠屏障功能 system xc-/gpx4通路

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Frataxin介导的铁死亡在阿尔茨海默病细胞模型中的机制研究

Frataxin介导的铁死亡在阿尔茨海默病细胞模型中的机制研究

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作者：王梦冉宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的在左旋-谷氨酸（L-Glutamaic acid,L-Glu）诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）构建的阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）细胞模型中,明确FXN的表达情况,初步探讨铁死亡是否参与了其细胞死亡过程,进一步研究在AD细胞模型中FXN... 详细信息

目的在左旋-谷氨酸（L-Glutamaic acid,L-Glu）诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）构建的阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）细胞模型中,明确FXN的表达情况,初步探讨铁死亡是否参与了其细胞死亡过程,进一步研究在AD细胞模型中FXN与铁死亡及线粒体功能相关机制的影响与作用,为基于抑制铁死亡的AD治疗机制提供可参考的实验室依据。方法1.以SH-SY5Y细胞为研究对象,分别使用不同浓度L-Glu诱导细胞24 h后,CCK-8法检测细胞活力,筛选出最佳L-Glu浓度构建AD细胞模型。将细胞分为:Control（正常对照组）、L-Glu（L-谷氨酸组）、Lentiviral Vector（正常对照组+FXN慢病毒空载组）、L-Glu+OE-FXN（L-谷氨酸+FXN过表达组）、L-Glu+Fer-1（L-谷氨酸+铁死亡抑制剂Fer-1组）;2.线粒体功能方面:通过荧光探针TMRE法检测线粒体膜电位（MMP）变化、透射电子显微镜观察细胞线粒体形态变化,以验证过表达FXN对AD细胞模型中线粒体功能的影响;3.铁死亡水平:通过荧光探针DHE法检测细胞内活性氧（ROS）变化、微量法检测还原型谷胱甘肽（GSH）以及脂质过氧化指标丙二醛（MDA）水平、铁离子比色法检测总铁离子及亚铁离子比色法检测二价铁离子浓度的变化,以明确L-Glu是否可诱导SH-SY5Y细胞发生铁死亡,过表达FXN及铁死亡抑制剂Fer-1是否可逆转上述指标;*** blot法及细胞免疫荧光法检测system xc/gpx4通路中xcT及gpx4蛋白的表达情况,Western blot法检测铁死亡重要调控蛋白ACSL4、Tf R1的表达变化,进一步探讨过表达FXN介导AD细胞模型中铁死亡的可能发病机制。结果1.不同浓度L-Glu可显著减低SH-SY5Y细胞的存活率,并呈浓度依赖性降低,最终测得20 mmol/L L-Glu诱导SH-SY5Y细胞24 h后其生存率为54.6%左右,且在普通光学显微镜下观察到细胞形态发生明显变化,细胞突触变短或消失,细胞变小变圆。故将20 mmol/L L-Glu设为本研究后续实验最佳浓度,以制备AD细胞模型;2.在AD细胞模型中FXN的表达降低,使用慢病毒转染技术成功上调了FXN的表达;3.各检测指标Control组与Lentiviral Vector组相比均无统计学意义,考虑慢病毒空载体对SH-SY5Y细胞无明显功能影响;与Control组相比,L-Glu组MMP降低,透射电子显微镜观察到线粒体体积缩小,嵴变形、减小或消失,过表达FXN后MMP升高,线粒体形态明显改善,提示在AD细胞模型中出现线粒体功能损伤,过表达FXN可改善线粒体功能损害表现;4.L-Glu组ROS、MDA、铁离子浓度、Fe水平均升高,GSH降低,过表达FXN后GSH升高,ROS、MDA以及铁离子浓度和Fe水平均有所降低,给予铁死亡抑制剂Fer-1（10μmol/L）同样可逆转上述铁死亡相关指标,提示L-Glu可诱导SH-SY5Y细胞发生铁死亡,过表达FXN抑制了AD细胞模型中铁死亡的发生;在L-Glu组Western blot法检测铁死亡重要调控蛋白ACSL4、Tf R1表达均升高,Western blot法及细胞免疫荧光法检测system xc/gpx4通路中xcT、GXP4蛋白表达均降低,过表达FXN及Fer-1干预后可逆转上述蛋白的表达。结论***在L-Glu诱导SH-SY5Y细胞构建的AD细胞模型中表达降低。2.过表达FXN可改善AD细胞模型中线粒体功能损伤。3.过表达FXN可能通过调控system xc/gpx4通路,提高xcT、gpx4的表达提升抗氧化能力;通过抑制ACSL4的表达抑制脂质过氧化;通过抑制Tf R1的表达减少Fe的蓄积,从而抑制铁死亡并对AD细胞模型具有保护作用。

关键词：阿尔茨海默病 Frataxin 铁死亡线粒体功能 system xc-/gpx4通路

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