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system xc-/gpx4/nrf2介导的铁死亡对脓毒症大鼠肠道机械屏障的影响

中华实用诊断与治疗杂志 2024年第1期38卷 12-18页

作者：马涛黄玮玮于湘友新疆医科大学第一附属医院重症医学科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830054

目的探讨system xc-/gpx4/nrf2通路介导的铁死亡对脓毒症大鼠肠道机械屏障损伤程度及炎症状态的影响。方法 24只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、铁死亡组、治疗组各6只。脓毒症组、铁死亡组、治疗组采用盲肠结扎穿孔法制备... 详细信息

目的探讨system xc-/gpx4/nrf2通路介导的铁死亡对脓毒症大鼠肠道机械屏障损伤程度及炎症状态的影响。方法 24只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、铁死亡组、治疗组各6只。脓毒症组、铁死亡组、治疗组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症大鼠模型,假手术组开腹游离盲肠后还纳关腹。造模即刻,治疗组皮下注射去铁胺20 mg/kg,铁死亡组腹腔注射铁死亡激活剂Erastin 20 mg/kg,假手术组和脓毒症组腹腔注射等量生理盐水,注射后4组均皮下注射37℃生理盐水50 mg/kg液体复苏。造模24 h大鼠麻醉后开腹,取十二指肠(空肠),机械法组织匀浆后收集细胞悬液,应用荧光探针法检测小肠平滑肌细胞活性氧(ROS);透射电镜下观察小肠上皮组织中线粒体形态。然后腹主动脉采血离心取血清,采用比色法检测Fe^(3+)、D-乳酸脱氢酶(D-LDH)水平,采用硫代巴比妥酸缩合法检测丙二醛(MDA)水平,采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。采血后处死大鼠,取小肠组织,采用HE染色观察组织病理学改变,采用免疫组织化学ABC法检测gpx4、nrf2、Claudin-1阳性面积百分比,采用Western blot法检测gpx4、nrf2、Claudin-1蛋白相对表达量。结果 (1)治疗组[(56 528±182)×10~5/mL]、脓毒症组[(67 964±844)×10~5/mL]、铁死亡组[(71 958±1 306)×10~5/mL]小肠平滑肌细胞ROS荧光强度均高于假手术组[(52 551±438)×10~5/mL](P2)假手术组小肠上皮组织线粒体形态完整、嵴丰富整齐、双膜结构存在且体积较大;脓毒症组线粒体体积变小,膜信号变强,线粒体嵴松散并发生溶解现象;治疗组线粒体体积较脓毒症组略有恢复,双膜结构部分存在,线粒体嵴少量溶解;铁死亡组线粒体体积较脓毒症组进一步缩小,膜密度增高,线粒体嵴发生溶解及消失。(3)脓毒症组、治疗组、铁死亡组血清Fe^(3+)含量低于假手术组(P4)脓毒症组、治疗组、铁死亡组血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平均高于假手术组(Pnrf2阳性面积百分比大于假手术组(Pgpx4、Claudin-1阳性面积百分比小于假手术组(Pnrf2阳性面积百分比大于治疗组,gpx4、Claudin-1阳性面积百分比小于治疗组(Pnrf2阳性面积百分比大于脓毒症组,gpx4、Claudin-1阳性面积百分比小于脓毒症组(Pnrf2蛋白相对表达量高于治疗组,gpx4、Claudin-1蛋白相对表达量均低于治疗组(Pnrf2蛋白相对表达量高于脓毒症组,gpx4、Claudin-1蛋白相对表达量均低于脓毒症组(Psystem xc-/gpx4/nrf2通路介导的铁死亡,可改善脓毒症大鼠肠道机械屏障的损伤程度及炎症状态。

关键词：脓毒症肠道损伤 system xc-/gpx4/nrf2 铁死亡大鼠

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