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农业生物技术学报 2005年第3期13卷 335-340页

作者：雷安民林少青窦忠英西北农林科技大学国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心杨凌712100 西北农林科技大学国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心

应用spindle-view对体外成熟培养20、22、24和26h的牛卵母细胞减数分裂纺锤体进行了观察;同时也对小鼠、家兔、山羊和猪等动物成熟卵母细胞的减数分裂纺缍体进行了观察。结果表明①在20～26h之间利用spindle-view得到的牛卵纺锤体影像... 详细信息

应用spindle-view对体外成熟培养20、22、24和26h的牛卵母细胞减数分裂纺锤体进行了观察;同时也对小鼠、家兔、山羊和猪等动物成熟卵母细胞的减数分裂纺缍体进行了观察。结果表明①在20～26h之间利用spindle-view得到的牛卵纺锤体影像与极体的相对位置没有明显的变化;②纺锤体成像是否清晰可用于牛卵母细胞的质量监控;③spindle-view适合于牛、家兔、小鼠和山羊成熟卵母细胞减数分裂纺缍体的观察。

关键词： spindle-view 成熟卵母细胞减数分裂纺缍体

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昆白小鼠体细胞核移植

昆白小鼠体细胞核移植

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作者：严兴荣西北农林科技大学

学位级别：硕士

自1998 年首例体细胞克隆小鼠成功后,克隆小鼠不仅在数量和品系上不断增多,而且供核细胞种类和也在增加。昆白小鼠体细胞克隆未见成功报道,昆白小鼠是我国自主繁殖的近交系小鼠,由于遗传背景清楚、生殖周期短、环境适应能力强等优点,是... 详细信息

自1998 年首例体细胞克隆小鼠成功后,克隆小鼠不仅在数量和品系上不断增多,而且供核细胞种类和也在增加。昆白小鼠体细胞克隆未见成功报道,昆白小鼠是我国自主繁殖的近交系小鼠,由于遗传背景清楚、生殖周期短、环境适应能力强等优点,是国内良好的实验动物模型。昆白小鼠的体细胞克隆不仅对克隆机理研究,而且对遗传学、胚胎学和分子生物学等领域都有重要的意义。本研究从4 个方面对昆白小鼠体细胞核移植进行了研究:供体细胞的采集、spindle-view 对卵母细胞的去核效率的影响,活力检测和核型分析,不同注核方法对克隆效率的影响。 1. 通过对分离培养的1-6 代的供核细胞进行核型分析和活力测定,各代间核型正常,细胞活力无显著性差异(P>0.05),证明用1-6 代的细胞作为供核细胞是可行的。 2. spindle-view 协助的卵母细胞去核。分别用spindle-view 协助和盲吸法对注射hCG后10和12h的小鼠卵母细胞去核,用spindle-view协助的去核率分别为95%和87%,用盲吸法为90%和22%。因此用spindle-view 协助下对hCG后10h卵的去核不仅去核率高,而且对卵母细胞损伤小。 3. 培养液和激活方法的筛选。用正常胚胎筛选培养液,CZB 和M16 克服2 细胞阻滞的比率分别为76.9%、56.2%,经检验发现差异显著(P0.05),但CZB 比M16 稍高,因此选用CZB 培养重组胚。分别用电刺激,酒精, SrCl2 和钙离子载体4 种不同的激活方法对卵母细胞的激活,激活率分别为40.8%、90.1%、60.3%、88.4%,发现用酒精和SrCl2 激活效果较好,两组发育到桑椹胚的比率分别为16.4%和3.6%,经比较酒精激活比SrCl 激活效果好(P<0.05)。 4. 不同注核方法对克隆效率的影响。用卵周隙注射和卵胞质注射两种方法注核发现用电融合方法融合率34.8%,有13 枚重构胚卵裂,其中3 枚发育到3-4cell,1 枚发育到6-cell,卵胞质注射成功率8.2%,激活培养后没有卵裂的。因此卵周隙注射优于卵胞质注射。

关键词：昆白小鼠体细胞核移植 spindle-view

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小鼠不同卵龄卵母胞细纺锤体位置及对去核效率的影响

小鼠不同卵龄卵母胞细纺锤体位置及对去核效率的影响

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全国首届动物生物技术学术研讨会

作者：严兴荣雷安民窦忠英西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心

探讨小鼠不同卵龄卵母细胞纺锤体位置与去核效率之间的关系。用spindle-view观察小鼠不同卵龄卵母细胞纺锤体位置,然后对其进行去核操作。观察发现卵龄10,12h的纺锤体处于Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ区的比率分别为95%,3%,2%;33%,33%,23%。两组进行盲吸去... 详细信息

探讨小鼠不同卵龄卵母细胞纺锤体位置与去核效率之间的关系。用spindle-view观察小鼠不同卵龄卵母细胞纺锤体位置,然后对其进行去核操作。观察发现卵龄10,12h的纺锤体处于Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ区的比率分别为95%,3%,2%;33%,33%,23%。两组进行盲吸去核,去核率分别为90%和22%。在spindle-view下去核卵龄10h的卵母细胞去核率为95%,其中有56%（n=59）的卵母细胞去不到1/6的卵胞质就可去核,而卵龄12h的卵母细胞去核率为87%,其中有76%（n=85）的卵母细胞吸去1/3的卵胞质才可去核。小鼠卵母细胞不同卵龄对纺锤体位置和核移植程序中去核效率有显著影响。

关键词：小鼠卵母细胞纺锤体位置 spindle-view 去核效率

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