检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=Snf1蛋白激酶"

共 3 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

snf1蛋白激酶各亚基对面包酵母麦芽糖代谢的影响

Snf1蛋白激酶各亚基对面包酵母麦芽糖代谢的影响

引用

作者：柏晓雯天津科技大学

学位级别：硕士

麦芽糖是面粉中含量最丰富的可发酵糖,因而面包酵母的麦芽糖发酵力是影响不加糖面团起发速度的关键因素。而葡萄糖阻遏效应是影响麦芽糖发酵力的重要因素,snf1蛋白激酶是解除葡萄糖阻遏效应的关键酶,本文研究了调节snf1蛋白激酶各亚基... 详细信息

麦芽糖是面粉中含量最丰富的可发酵糖,因而面包酵母的麦芽糖发酵力是影响不加糖面团起发速度的关键因素。而葡萄糖阻遏效应是影响麦芽糖发酵力的重要因素,snf1蛋白激酶是解除葡萄糖阻遏效应的关键酶,本文研究了调节snf1蛋白激酶各亚基对面包酵母麦芽糖代谢能力的影响,主要研究内容如下:(1)对面包酵母中snf1蛋白激酶α亚基的编码基因snf1基因分别进行了敲除与过表达,获得了基因敲除菌株B-snf1和基因过表达菌株B+snf1。模拟面团发酵性能试验结果显示,B+snf1菌株在三种模拟面团中(葡萄糖,麦芽糖和混合糖)的糖利用效率比亲本菌株BY14α分别提高了 2.9%,11%和18%,而B-snf1菌株在两种模拟面团中(麦芽糖和混合糖)的麦芽糖利用效率比亲本菌株BY14α分别降低了10%和11%。不加糖面团性能试验结果显示,60 min时B+snf1的产气量比亲本菌株高了 85 mL,发酵时间缩短了 11%,发酵力提高了 15%。,而60 min时B-snf1的产气量比亲本菌株低了 100mL,发酵时间延长了 10min,发酵力下降了 13%。(2)对面包酵母中snf1蛋白激酶γ亚基和β亚基的编码基因snf4和GAL83分别过表达,得到基因过表达菌株B+snf4和B+GAL83。模拟面团发酵性能试验结果显示,B+snf4菌株在三种模拟面团中(葡萄糖,麦芽糖和混合糖)的糖利用效率比亲本菌株BY14α分别提高了 1.4%,7.1%和1.4%,而B+GAL83菌株的糖利用效率比亲本菌株BY14α分别降低了 1.3%,4.1%和32.6%。不加糖面团性能试验结果显示,60min时B+snf4的产气量比亲本菌株高了60mL,发酵时间缩短了5 min,发酵力提高了 12.7%,而60 min时B+GAL83的产气量比亲本菌株低了 80 mL,发酵时间延长了 5 min,发酵力下降了 5.3%。(3)对面包酵母中snf1蛋白激酶α亚基和γ亚基编码基因snf1、snf4同时过表达,获得基因双过表达菌株B+snf1+snf4。对面包酵母中snf1蛋白激酶α亚基、γ亚基和β亚基编码基因snf1、snf4、GAL83同时过表达,获得基因三过表达菌株B+snf1+snf4+GAL83。模拟面团发酵性能试验结果显示,B+snf1+snf4菌株在三种模拟面团中(葡萄糖,麦芽糖和混合糖)的糖利用效率比亲本菌株BY14α分别提高了3.4%,12.2%和17.5%。不加糖面团性能试验结果显示,60 min时B+snf1+snf4的产气量比亲本菌株高了 95 mL,发酵时间缩短了 15 min,发酵力提高了 17.8%。而B+snf1+snf4+GAL83菌株的糖利用能力和发酵性能都与亲本菌株无显著差异。实验结果表明snf1蛋白激酶对面包酵母麦芽糖代谢能力的影响中,起主要作用的亚基是α亚基和γ亚基,这个结果为快速发酵面包酵母菌株的构建奠定良好的基础。

关键词：面包酵母 snf1蛋白激酶不加糖面团麦芽糖代谢能力

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

过表达snf1蛋白激酶α亚基与β亚基编码基因对面包酵母冷冻耐性的影响

过表达Snf1蛋白激酶α亚基与β亚基编码基因对面包酵母冷冻耐性的...

引用

作者：孟露海南大学

学位级别：硕士

冷冻面团技术可以有效地延长面包的保质期,以确保新鲜度,该技术被广泛使用并逐渐取代传统的面包生产。面包酵母低温胁迫后的活性是影响冷冻面团质量的主要因素。酵母snf1蛋白激酶是胞内能量代谢调节以及外界应激反应的重要调节蛋白,但... 详细信息

冷冻面团技术可以有效地延长面包的保质期,以确保新鲜度,该技术被广泛使用并逐渐取代传统的面包生产。面包酵母低温胁迫后的活性是影响冷冻面团质量的主要因素。酵母snf1蛋白激酶是胞内能量代谢调节以及外界应激反应的重要调节蛋白,但其在冷冻胁迫下的调节作用及调节途径未见报道。本实验以面包酵母ABY3(Saccharomyces cerevisiae)为研究对象,首次探究了过表达snf1蛋白激酶α亚基与β亚基编码基因snf1、SIP1、SIP2、GAL83对其冷冻耐性的影响,为工业面包酵母的育种提供了新思路。(1)通过构建snf1蛋白激酶α亚基编码基因snf1过表达的突变菌株(ABY+S),并与snf1蛋白激酶β亚基编码基因SIP1、SIP2、GAL83过表达的突变菌株(ABY+S1,ABY+S2,ABY+G)进行了生长性能的测试,冷冻耐性的测试和冷冻前后发酵性能的测试。结果表明:过表达snf1蛋白激酶β亚基编码基因SIP1、SIP2、GAL83对面包酵母冷冻耐性有负调节作用,其突变菌株在冷冻胁迫下的存活率远低于亲本菌株;过表达snf1蛋白激酶α亚基编码基因snf1对面包酵母冷冻耐性有正调节作用,其突变菌株ABY+S在冷冻胁迫下的存活率为75%,远高于亲本菌株43%的冷冻存活率;突变菌株ABY+S在冷冻前的不加糖面团发酵中,发酵能力有提升但并不显著,而在冷冻胁迫后的不加糖面团发酵中,ABY+S的发酵力较亲本ABY3提升8 m L/h·g,相对发酵力较亲本菌株提高11%;(2)转录组学分析,冷冻前,ABY+S较亲本ABY3表现出显著差异的基因共1799个,其中上调1453个,下调346个;冷冻后,ABY+S较亲本ABY3表现出显著差异的基因共2308个,其中上调2035个,下调273个。GO富集分析显示过表达snf1蛋白激酶α亚基编码基因snf1使面包酵母与细胞组成相关的大量基因表达以利于应对胁迫环境;同时与生长代谢调节相关的大量基因表达,为突变菌株发酵力优于亲本提供了转录水平的依据,另外与细胞应激反应相关基因的表达,与突变菌株较强的冷冻耐受力表型相符。KEGG富集分析显示过表达snf1蛋白激酶α亚基编码基因snf1对面包酵母蛋白酶体的影响最显著,突变菌株可能通过蛋白酶体相关调节基因的表达,加强了胁迫环境下错误折叠蛋白降解效率,实现细胞质量的监管,保证了冷冻损伤后的细胞仍保持较高的生长代谢活性。此外,snf1基因的过表达对酵母碳代谢途径,氨基酸生物合成途径,甘油代谢途径以及甘油磷脂代谢途径的调节作用,也是ABY+S高存活率及强发酵性能的原因;(3)非靶向代谢组学分析,冷冻前,ABY+S较亲本ABY3表现出显著差异的胞内代谢物共17个,其中上调10个,下调7个;冷冻后,ABY+S较亲本ABY3表现出显著差异的胞内代谢物共21个,其中上调11个,下调10个。冷冻前,与转录组学数据相符,snf1基因过表达的突变菌株较亲本胞内积累大量氨基酸和甘油,同时细胞膜成分发生变化。突变菌株冷冻前细胞膜成分变化是否能使细胞抵御冷冻胁迫的损伤还有待研究,而胞内积累较高含量的氨基酸和甘油,是突变菌株冷冻胁迫下高存活率的主要原因;冷冻胁迫后,snf1基因过表达的突变菌株较亲本胞内依旧保持较高的脯氨酸和甘油含量,使细胞在冷冻胁迫下得到较好的保护;而其他差异代谢物呈显著下调,是突变菌较强的碳代谢能力及蛋白质代谢调节作用的结果;另外胞内溶血磷脂类物质下调是否与低温适应能力相关,还需进一步研究。本研究首次通过系统生物学方法,分析了过表达snf1蛋白激酶α亚基与β亚基编码基因snf1、SIP1、SIP2、GAL83对面包酵母冷冻耐性的影响,为优良工业菌种选育提供理论指导,为冷冻面团技术发展提供新思路,同时可补充酵母环境应激反应的基础理论,完善snf1蛋白激酶的全局调控机制。

关键词：面包酵母(Saccharomyces cerevisiae) snf1蛋白激酶冷冻胁迫代谢组学转录组学

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

玉米大斑病菌Stsnf1基因的克隆与表达分析

玉米大斑病菌StSNF1基因的克隆与表达分析

引用

作者：何世道沈阳农业大学

学位级别：硕士

玉米大斑病(Northern Leaf Blight Corn)是全世界玉米产区的主要叶部病害之一,是由大斑凸脐蠕孢菌[Exserohilum turcicum(Pass.)Leonard&Suggs](无性态)侵染引起的,该病害在我国东北、华北北部、西北和南方山区冷量玉米产区发病较为严... 详细信息

玉米大斑病(Northern Leaf Blight Corn)是全世界玉米产区的主要叶部病害之一,是由大斑凸脐蠕孢菌[Exserohilum turcicum(Pass.)Leonard&Suggs](无性态)侵染引起的,该病害在我国东北、华北北部、西北和南方山区冷量玉米产区发病较为严重。玉米大斑病流行可使玉米减产20～30%,给玉米生产带来严重威胁。目前关于玉米大斑病菌[SeSosphaeria turcia(Luttrell)Leonard&Suggs](有性态)致病因子的研究主要集中在细胞信号传导途径类、细胞壁降解酶类、氧化还原酶类、黑色素类以及毒素等方面。研究较为深入的一类为细胞信号传导途径包括:cAMP途径、MAPK途径、Ca2+途径等,但对AMPK途径的相关研究较少。snf1蛋白激酶是AMPK在植物病原真菌中的同源蛋白,所以本文以snf1基因为切入点,克隆玉米大斑病菌中Stsnf1基因,利用生物信息学技术分析该基因编码蛋白的理化性质及结构特征,并利用实时荧光定量PCR技术监测玉米大斑病菌侵染寄主各个时期、分生孢子萌发侵染过程中以及不同碳源培养下Stsnf1基因的表达情况,构建Srsnf1基因敲除载体并成功获得1个Stsnf1基因突变体,研究结果总结如下:1.通过使用NCBI、JGI数据库的BLAST功能,明确snf1基因在玉米大斑病菌基因组中的位置;利用玉米大斑病菌基因组数据库信息设计特异性引物snf1F1和snf1 R1,扩增出玉米大斑病菌snf1基因;同源性分析表明,该基因在玉米大斑病菌中为单拷贝,将其命名为Stsnf1;序列分析表明,该基因全长为3046 bp,由2个内含子与3个外显子组成,开放阅读框为 2634bp,编码 877个氨基酸,与玉米圆斑病菌(Cochliobolus carbonum)Ccsnf1基因的结构高度相似。2.通过生物信息学分析技术对Stsnf1基因编码的Stsnf1蛋白进行分析。结果表明,该蛋白由877个氨基酸组成,分子量为97.94 kD,pI值为8.29,不稳定系数为53.24,总平均疏水性指数(GRAVY)为-0.638,为亲水性蛋白;在编码该蛋白的氨基酸序列中未检测到跨膜结构域以及信号肽的存在,推测Stsnf1不属于膜蛋白或分泌蛋白;亚细胞定位结果表明,该蛋白在细胞核内的K-NN百分率为78.3%,推测该蛋白行使功能的主要场所为细胞核;在功能域方面,Stsnf1包括1个N端域和1个C端域,N端域含有1个蛋白激酶结构域以及1个碳代谢产物去阻遏蛋白激酶泛素相关结构域(snf1BA),C端则为5个激酶相关结构域1(KA1)的串联组合;二级结构分析表明,无规则卷曲的含量最多,其次为α-螺旋;同源性分析表明,该蛋白与玉米圆斑病菌的Ccsnf1蛋白有较高同源性,一致性为90.92%,与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)以及其他病原真菌的同源性较低。3.通过实时荧光PCR技术研究玉米大斑病菌Stsnf1基因的表达情况。结果表明,该基因在接种玉米后72h表达量达到最大,96h表达下调,120h又呈现上调趋势;在分生孢子萌发侵染过程中Stsnf1的表达量逐步上调,24 h时(侵入丝形成时期)达到最大,为6 h时(附着胞形成初期)表达量的4倍,由此可以推测Stsnf1与分生孢子萌发侵染有关;Stsnf1基因在蔗糖培养基中的表达量最高,果胶培养基次之,在甘油培养基中的表达量最低,在葡萄糖和果糖培养基中的表达量趋于一致,分别是蔗糖与果胶培养基中表达量的1/3和1/2,由此可以确定Stsnf1基因与蔗糖和果胶的利用有关。综上所述,Stsnf1基因在侵染后期大量表达,在分生孢子萌发侵染过程中表达呈上调趋势,同时与碳源利用密切相关。4.通过对玉米大斑病菌遗传转化体系的优化,成功获得1个Stsnf1基因突变体。研究发现,使用溶壁酶、崩溃酶、蜗牛酶混合酶解玉米大斑病菌孢子释放原生质体的最适温度为28℃,最适酶解时长为6～8小时,在此条件下原生质体的释放量最大。

关键词：玉米大斑病菌生物信息学实时荧光定量PCR snf1蛋白激酶基因敲除

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：