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联勤军事医学 2024年第1期38卷 6-10页

作者：孙图南李晓琦李宗源黄一飞王丽强解放军总医院第三医学中心眼科医学部北京100039

目的探究性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y-box protein 9,SOX9)是否会调控角膜内皮细胞损伤后的角膜上皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)过程及具体机制。方法转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低人角膜内皮细胞B4G12中SOX9的表达,使用甲萘醌构建体外B4G12细胞损伤模型,设4个分组:si-NC组(转染siRNA-阴性对照)、si-SOX9组(转染siRNA-SOX9)、si-NC+甲萘醌组(转染siRNA-阴性对照后添加外源性甲萘醌做损伤处理)、si-SOX9+甲萘醌组(转染siRNA-SOX9后添加外源性甲萘醌做损伤处理)。通过实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测各组细胞中EndMT关键因子snail家族转录抑制因子2(snail family transcriptional repressor 2,snail2)及相关信号通路关键因子表达变化,阐明SOX9调控EndMT过程的功能和机制。结果转染siRNA-SOX9敲低细胞SOX9表达后,给予甲萘醌细胞损伤处理,观察到细胞中snail2的表达会随SOX9的敲低而降低,同时观察到转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号通路中snail2的上游关键因子Smad2/Smad3的表达也随着SOX9的敲低而降低。结论SOX9通过TGF-β信号通路调控角膜内皮损伤后EndMT过程。

关键词：角膜内皮细胞性别决定区Y框蛋白9 snail家族转录抑制因子2 上皮-间质转化转化生长因子β信号通路

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SOX9在角膜内皮损伤过程中的表达及功能

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联勤军事医学 2023年第8期37卷 637-642,690页

作者：孙图南李晓琦李宗源王丽强黄一飞解放军总医院第三医学中心眼科医学部北京100039

目的探究性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y box protein 9,SOX9)在角膜内皮损伤过程中的表达及功能。方法通过转录组数据库分析人角膜内皮损伤与SOX9表达的关联。冷冻法构建小鼠角膜内皮损伤模型,每只小鼠左眼造模、右眼空... 详细信息

目的探究性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y box protein 9,SOX9)在角膜内皮损伤过程中的表达及功能。方法通过转录组数据库分析人角膜内皮损伤与SOX9表达的关联。冷冻法构建小鼠角膜内皮损伤模型,每只小鼠左眼造模、右眼空白对照,采用裂隙灯照相、眼前节光学相干断层扫描技术(optical coherence tomography,OCT)、免疫荧光技术评估动物模型质量,角膜铺片免疫荧光染色观察损伤后内皮细胞中SOX9的表达变化。分别用低浓度(30μmol/L)和高浓度(50μmol/L)的甲萘醌对人角膜内皮细胞(B4G12)处理3 h(短时间组)、6 h(中时间组)、12 h(长时间组)、24 h(超长时间组),构建细胞模型。采用显微镜照相、细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验评估细胞模型质量,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、Western blot检测SOX9和介导角膜内皮-间质转化(endothelium-mesenchymal transition,EndMT)关键转录因子snail家族转录抑制因子2(snail family transcriptional repressor 2,snail2)的表达变化。结果数据库资料显示在角膜内皮损伤代表性疾病Fuchs角膜内皮营养不良(Fuchs′endothelial corneal dystrophy,FECD)患者中,FECD3期以上患者角膜内皮SOX9表达量比2期患者明显升高(Psnail2的表达变化也会随甲萘醌处理时间的延长呈现先升高后降低的趋势。结论SOX9的表达随角膜内皮损伤进程产生变化,并与损伤修复中的EndMT紧密相关。

关键词：角膜内皮细胞性别决定区Y框蛋白9 snail家族转录抑制因子2 损伤修复内皮-间质转化

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