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smurf1对对子宫内膜异位症发生的影响及可能机制

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解剖科学进展 2023年

作者：冷慧敏张颖谭娜迟秀梅秦皇岛市海港医院产科

目的探讨泛素酶smurf1对子宫内膜异位症发生的影响及可能机制。方法 20只C57BL/6J小鼠随机分为smurf1抑制剂处理组和对照组，每组10只，建立子宫内膜异位症小鼠模型，8周后取静脉血并处死小鼠，测定小鼠子宫内膜异位病灶体积和Lee’s... 详细信息

目的探讨泛素酶smurf1对子宫内膜异位症发生的影响及可能机制。方法 20只C57BL/6J小鼠随机分为smurf1抑制剂处理组和对照组，每组10只，建立子宫内膜异位症小鼠模型，8周后取静脉血并处死小鼠，测定小鼠子宫内膜异位病灶体积和Lee’s指数，qPCR和westernblot法检测子宫内膜异位病灶中β-catenin、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA与蛋白的表达情况，ELISA法测定小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平。结果与对照组比较，smurf1抑制剂处理组Lee’s指数和子宫内膜异位病灶体积变大，小鼠血清炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平升高，小鼠子宫内膜异位病灶中β-catenin、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白与mRNA水平表达升高。结论 smurf1调控小鼠子宫内膜异位症的发生与Wnt-β-catenin信号通路有关。

关键词： smurf1 子宫内膜异位症 Wnt/β-catenin

smurf1调节因子在骨形态发生蛋白诱导骨生成中的作用

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第二军医大学学报 2011年第7期32卷 783-785页

作者：袁恒锋何崇儒高金巍徐卫东第二军医大学长海医院骨科上海200433

骨形态发生蛋白(BMP)是明确具有诱导成骨作用的生长因子。其通过结合靶细胞表面受体,活化细胞内一系列Sm ad蛋白,经Sm ad蛋白介导,将信号转导至细胞核内,在一系列辅助因子的作用下,启动成骨基因的表达。细胞内源性smurf1对这一整个过程... 详细信息

骨形态发生蛋白(BMP)是明确具有诱导成骨作用的生长因子。其通过结合靶细胞表面受体,活化细胞内一系列Sm ad蛋白,经Sm ad蛋白介导,将信号转导至细胞核内,在一系列辅助因子的作用下,启动成骨基因的表达。细胞内源性smurf1对这一整个过程起抑制作用。本文就smurf1调节因子在骨形态发生蛋白诱导骨生成中的作用做一综述。

关键词：骨形态发生蛋白质类 Smad蛋白质类 smurf1

smurf1通过抑制LKB1的多聚泛素化而调控其蛋白稳定性

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重庆医科大学学报 2019年第11期44卷 1485-1491页

作者：袁志马林强程志梁森黄慧哲重庆医科大学基础医学院发育生物学研究室重庆40001 重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的:为了探寻肝脏激酶B1(liver kinase B1,LKB1)的上游调控分子,并研究其对LKB1的影响。方法:首先,利用UbiBrowser数据库预测LKB1可能的上游调控分子,并根据评分筛选出可能对LKB1具有调控作用的smurf1基因。然后,构建smurf1和LKB1相关... 详细信息

目的:为了探寻肝脏激酶B1(liver kinase B1,LKB1)的上游调控分子,并研究其对LKB1的影响。方法:首先,利用UbiBrowser数据库预测LKB1可能的上游调控分子,并根据评分筛选出可能对LKB1具有调控作用的smurf1基因。然后,构建smurf1和LKB1相关过表达质粒,并转染HEK293T细胞,通过Western blot检测LKB1蛋白质表达的变化。最后,运用荧光定量PCR(qPCR)、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)探索smurf1调控LKB1可能的分子机制。结果:①成功构建LKB1和smurf1相关过表达质粒。②在HEK293T细胞中过表达0、0.5、1、2μg的野生型smurf1时其对应的LKB1蛋白相对表达量分别为0.0262±0.0007、0.0727±0.0003、0.1301±0.0013、0.4315±0.0010。经单因素方差分析,其结果为F=79636.433,P=0.000。与0μg对照组相比,进一步采用LSD-t法分析,0.5、1、2μg各组P值分别为0.000、0.000和0.000。③在HEK293T细胞中过表达0、0.5、1、2μg的突变型smurf1时其对应的LKB1的蛋白相对表达量分别为0.0180±0.0001、0.0530±0.0004、0.1250±0.0010、0.2004±0.0017。经单因素方差分析,其结果为F=12887.993,P=0.000。与0μg对照组相比,进一步采用LSD-t法分析,0.5、1、2μg各组P值分别为0.000、0.000和0.000。④以GAPDH为内参,未过表达smurf1组和过表达smurf1组中,LKB1的相对mRNA表达水平分别为1.0851±0.4125、2.3982±1.7669。经独立样本t检验统计分析,P=0.257。⑤以β-actin为内参,未经smurf1处理组、野生型smurf1(WT)处理组、突变型smurf1(C699A)处理组中LKB1的相对泛素化水平分别为1.8238±0.0278、0.0881±0.0051、0.2127±0.0062。经单因素方差分析,其结果为F=6721.953,P=0.000。与未经smurf1处理组相比,进一步采用LSD-t法分析,野生型smurf1组和突变型smurf1组各组P值分别为0.000和0.000。结论:这些结果表明smurf1通过降低LKB1的多聚泛素化从而参与其蛋白稳定性的调节。

关键词： smurf1 LKB1 多聚泛素化稳定性

smurf1基因靶向RNAi慢病毒载体的构建及转染

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第二军医大学学报 2011年第10期32卷 1147-1150页

作者：袁恒锋何崇儒高金巍徐卫东第二军医大学长海医院骨科上海200433

目的构建Smad泛素调节因子1(smurf1)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,观察其转染骨肉瘤U20S细胞后对smurf1基因表达的抑制作用,为后续研究奠定基础。方法构建smurf1基因过表达质粒,同时针对smurf1基因序列设计合成4条RNAi片段并构建R... 详细信息

目的构建Smad泛素调节因子1(smurf1)基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,观察其转染骨肉瘤U20S细胞后对smurf1基因表达的抑制作用,为后续研究奠定基础。方法构建smurf1基因过表达质粒,同时针对smurf1基因序列设计合成4条RNAi片段并构建RNAi慢病毒载体。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western印迹法进行外源筛靶,筛靶出成功的干扰质粒PSC2939。用慢病毒包装PSC2939后感染U20S细胞,进行内源验证,荧光定量PCR和Western印迹检测U20S细胞中smurf1mRNA及蛋白的表达。结果经PCR及测序证实,smurf1基因过表达载体及4种干扰载体均成功构建;Western印迹外源筛靶显示,PSC2939干扰载体能有效敲减目的基因的表达;慢病毒包装后的PSC2939干扰载体能有效抑制U20S细胞中smurf1蛋白的表达,对smurf1mRNA的抑制率达到60%以上。结论成功构建可供感染的smurf1基因RNAi慢病毒载体,为进一步研究smurf1基因在骨肉瘤细胞中的作用提供了有效的实验工具。

关键词： RNA干扰 smurf1 骨肉瘤慢病毒属

miRNA-125a靶向调控smurf1对结肠癌生物学行为的影响

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肿瘤防治研究 2019年第2期46卷 138-143页

作者：邢旻琰何美文余佳泽张超海宁市人民医院肿瘤科海宁314400

目的探讨miRNA-125a通过对靶基因smurf1的调控在结肠癌中的影响。方法 qRT-PCR检测结肠癌患者血清中miRNA-125a和smurf1表达水平并分析其与结肠癌相关临床指标的相关性;microRNA靶基因数据库预测miRNA-125a靶基因smurf1并使用荧光素酶... 详细信息

目的探讨miRNA-125a通过对靶基因smurf1的调控在结肠癌中的影响。方法 qRT-PCR检测结肠癌患者血清中miRNA-125a和smurf1表达水平并分析其与结肠癌相关临床指标的相关性;microRNA靶基因数据库预测miRNA-125a靶基因smurf1并使用荧光素酶报告基因法验证其结合;qRTPCR和Western blot检测miRNA-125a模拟物对smurf1mRNA及蛋白表达的影响;HE染色检测结肠癌组织中smurf1的表达;CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞法检测miRNA-125a模拟物和smurf1对SW480细胞增殖、迁移及周期的影响;构建结肠癌肿瘤异种移植小鼠模型,采用称重及PCNA染色检测miRNA-125a模拟物对小鼠体内肿瘤生长的影响。结果结肠癌患者血清中miRNA-125a表达水平与结肠癌相关临床指标呈负相关性,smurf1表达水平与结肠癌相关临床指标呈正相关性。结肠癌组织中miRNA-125a的表达水平显著降低,miRNA-125a模拟物可抑制smurf1的mRNA翻译及蛋白水平。结肠癌肿瘤组织中smurf1表达水平明显升高,miRNA-125a模拟物可以抑制SW480细胞的增殖、迁移和S期细胞周期的聚集,然而这种抑制效果会因smurf1表达升高而减弱。miRNA-125a模拟物抑制小鼠体内结肠癌生长及smurf1的表达。结论 miRNA-125a通过下调smurf1的表达在结肠癌的发展过程中发挥抑制作用,具有成为结肠癌诊断及治疗靶点的潜力。

关键词：结肠癌 miRNA-125a smurf1

泛素连接酶smurf1促进PDK1的多聚泛素化修饰

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军事医学 2017年第12期41卷 947-951页

作者：魏军时慧森党智笙张令强张学利锦州医科大学奉贤中心医院研究生培训基地上海201499 锦州医科大学研究生院锦州121000 蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心国家蛋白质科学中心(北京)北京生命组学研究所北京102206

目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)发生多聚泛素化修饰的机制。方法免疫共沉淀(COIP)和免疫印迹(WB)分析PDK1的多聚泛素化修饰,MEF细胞内印证泛素连接酶Smad泛素化修饰调节因子1(smurf1)增强PDK1多聚泛素化修饰,定点突变和CO-IP... 详细信息

目的探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)发生多聚泛素化修饰的机制。方法免疫共沉淀(COIP)和免疫印迹(WB)分析PDK1的多聚泛素化修饰,MEF细胞内印证泛素连接酶Smad泛素化修饰调节因子1(smurf1)增强PDK1多聚泛素化修饰,定点突变和CO-IP及WB确定PDK1多聚泛素化修饰位点。结果 PDK1可发生多聚泛素化修饰,泛素连接酶smurf1增强PDK1多聚泛素化修饰,且依赖HECT类泛素连接酶smurf1 K699位点活性;K304是PDK1多聚泛素化修饰位点。结论泛素连接酶smurf1增强PDK1的多聚泛素化修饰。

关键词：泛素连接酶泛素化修饰免疫共沉淀免疫印迹法 smurf1 PDK1 PDPK1 细胞增殖质粒突变

去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨、肾、下丘脑中smurf1信号转导蛋白的活性变化研究

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中华中医药杂志 2014年第2期29卷 574-578页

作者：邓洋洋孙鑫李佳尚德阳郑洪新辽宁中医药大学基础医学院沈阳110847

目的:观察去卵巢骨质疏松症(OP)模型大鼠股骨、肾、下丘脑中smurf1在细胞中的定位和活性变化,探讨肾虚OP病机的分子生物学机制。方法:实验采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚OP模型,同时应用纳米钙补肾中药低、高剂量,对模型大鼠... 详细信息

目的:观察去卵巢骨质疏松症(OP)模型大鼠股骨、肾、下丘脑中smurf1在细胞中的定位和活性变化,探讨肾虚OP病机的分子生物学机制。方法:实验采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法复制肾虚OP模型,同时应用纳米钙补肾中药低、高剂量,对模型大鼠灌胃干预12周,用骨疏康颗粒剂、盖天力、补中益气汤干预模型大鼠作为阳性对照组,以及正常组、假手术对照组和模型组;免疫组化SABC法检测股骨、肾、下丘脑中的smurf1蛋白活性表达。结果:smurf1在股骨中的表达结果:与正常组比较,模型组表达显著下降(P1);与模型组比较,各用药组可上调其表达,其中补肾中药低、高剂量组、补中益气汤组有显著差异(P1)。在肾中表达的结果:与正常组比较,模型组表达显著下降(P1);与模型组比较,各用药组均可上调其表达情况(P1)。在下丘脑中的表达结果:与正常组比较,模型组表达显著升高(P1);与模型组比较,各用药组均可下调其表达情况(P1)。结论:肾虚OP模型大鼠股骨、肾中smurf1的表达降低,下丘脑中表达水平升高,可能是肾虚OP发生的机制之一。纳米钙补肾中药可能通过改善和调控股骨、肾、下丘脑中smurf1表达,而起到防治原发性OP的作用。

关键词：骨质疏松症补肾 smurf1 纳米钙

smurf1调控LOXL3蛋白表达水平及Th17细胞分化的机制研究

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SMURF1调控LOXL3蛋白表达水平及Th17细胞分化的机制研究

作者：蒋铭昆明医科大学

学位级别：硕士

背景:肿瘤微环境是肿瘤细胞赖以生存和发展的复杂环境,肿瘤微环境由细胞成分和非细胞成分组成。其中细胞成分包括肿瘤细胞本身、免疫细胞、间充质干细胞、内皮细胞、以及与肿瘤相关的成纤维细胞。当初始T细胞进入复杂的肿瘤微环境中,将... 详细信息

背景:肿瘤微环境是肿瘤细胞赖以生存和发展的复杂环境,肿瘤微环境由细胞成分和非细胞成分组成。其中细胞成分包括肿瘤细胞本身、免疫细胞、间充质干细胞、内皮细胞、以及与肿瘤相关的成纤维细胞。当初始T细胞进入复杂的肿瘤微环境中,将受到不同细胞因子的诱导从而分化为不同类型的T细胞亚群,其中,初始T细胞在TGF-β和IL-6的共同诱导下分化为Th17。Th17细胞是一种能够分泌白介素17的辅助性T细胞亚群,许多研究证明,Th17细胞在结肠癌中起着促进肿瘤进展的作用。因此,探索一个抑制T细胞向Th17细胞分化的调控机制,对改善结肠癌的微环境具有意义。LOXL3又叫赖氨酰氧化酶3,是一种铜依赖性胺氧化酶,有研究发现,LOXL3可抑制初始T细胞向Th17分化。有测序数据显示,在LOXL3基因敲除的小鼠中smurf1/smurf2呈高表达,提示LOXL3可能受smurf1/smurf2的调控,smurf1/smurf2都属于素连接酶,其主要作用是连接靶蛋白,使被连接的靶蛋白通过泛素蛋白酶体途径被降解,因此,本研究的主要内容是探索smurf1/smurf2对LOXL3表达的调控及对Th17细胞分化的影响,以期为调控Th17细胞的分化及改善结肠癌的微环境提供新的靶点。研究内容及方法:分离人外周血T细胞;构建smurf1、smurf2的过表达载体,转染T细胞并进行验证;用smurf1、smurf2的过表达载体转染T细胞,检测LOXL3的表达水平;构建smurf1、smurf2的干扰沉默载体,转染T细胞并进行验证;用smurf1、smurf2的干扰沉默载体转染T细胞,检测LOXL3的表达水平;流式细胞学检测转染smurf1沉默载体的T细胞中Th17的百分比;在TGFβ存在的条件下,研究T细胞中smurf1、LOXL3的表达水平及转染smurf1沉默载体的T细胞LOXL3的表达水平。结果:转染smurf1过表达载体的T细胞smurf1表达高于空载体及空白对照(Psmurf2过表达载体的T细胞smurf2表达高于空载体及空白对照(Psmurf1过表达载体的T细胞LOXL3表达低于空载体及空白对照(Psmurf2过表达载体及干扰载体的T细胞LOXL3的表达水平与空载体及空白对照均无统计学差异(P>0.05);转染smurf1沉默载体的T细胞smurf1表达低于空载体及空白对照(Psmurf2沉默载体的T细胞smurf2表达低于空载体及空白对照(Psmurf1沉默载体的T细胞LOXL3表达高于空载体及空白对照(Psmurf2沉默载体的T细胞LOXL3的表达水平与空载体及空白对照均无统计学差异(P>0.05);(五)转染smurf1沉默载体的T细胞中Th17细胞的百分比低于空载体及空白对照(Psmurf1表达高于对照组(Psmurf1沉默载体的T细胞LOXL3的表达高于空载体及空白对照(Psmurf1的修饰,但可能不受smurf2得修饰;通过沉默smurf1可减少Th17的分化。

关键词： smurf1 LOXL3蛋白 Th17细胞

smurf1调控PIP5K1C蛋白稳定性及相关生物学功能的研究

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Smurf1调控PIP5K1C蛋白稳定性及相关生物学功能的研究

作者：王英聪华东师范大学

学位级别：硕士

smurfl属于HECT类的E3泛素连接酶,是NEDD4亚家族的成员,由HECT结构域、WW结构域及C2结构域组成。smurfl参与调控多条信号途径,如BMP信号途径、Wnt信号途径以及MAPK信号途径等;该蛋白可以靶向调控多种底物,女Smads、RunX2、 RunX3、Tbx6... 详细信息

smurfl属于HECT类的E3泛素连接酶,是NEDD4亚家族的成员,由HECT结构域、WW结构域及C2结构域组成。smurfl参与调控多条信号途径,如BMP信号途径、Wnt信号途径以及MAPK信号途径等;该蛋白可以靶向调控多种底物,女Smads、RunX2、 RunX3、Tbx6、MEKK2、RhoA、Par6、Talin及STAT1等,从而参与调控细胞生长、成骨细胞分化、胚胎发育、细胞极性、细胞迁移及免疫反应等多种生物学功能PIP5K1C是生物体内非常重要的磷脂类激酶,能够催化PIP2的生成,并参与调控多种生物学功能,如细胞迁移、黏着斑的形成、胞吞作用等。人源的PIP5K1C有两个不同的剪切体：一个是分子量为87KD的剪切体,被命名为PIP5K1C-87;另一个是分子量为90KD的剪切体,被命名为PIP5K1C-90。PIP5K1C蛋白的生物学功能不仅受其相互作用蛋白的调控,而且还受该蛋白翻译后修饰的调控,如磷酸化、乙酰化;然而对其泛素化修饰,却鲜有报道。在本论文的研究中,我们发现PIP5K1C在肺癌组织中是异常高表达的,并证明了PIP5K1C受蛋白酶体降解途径的调控;而且我们进一步通过knockdown及过表达E3泛素连接酶的方法,找到了PIP5K1C的E3泛素连接酶smurf1,该蛋白能够调控PIP5K1C的蛋白稳定性;而且通过体内免疫共沉淀实验、体外pull down实验,都能够检测到smurf1与PIP5K1C的结合;我们进一步明确了smurf1是通过增强PIP5K1C的泛素化水平,而调控PIP5K1C的蛋白稳定性的;并且我们找到了smurf1促进PIP5K1C发生泛素化的关键性位点,即K255;而且在生物学功能上,我们证明了smurf1能够抑制PIP5K1C介导的细胞增殖及其他相关生物学过程。进一步我们又对smurf1降解PIP5K1C的调控机制,进行了初步的探索。综上所述,本文提出smurf1-PIP5K1C途径在肺癌细胞中的调控作用,且smurf1能够通过调控PIP5K1C的蛋白稳定性而影响PIP5K1C介导的生物学过程,为深入研究这两个蛋白的生物学功能,提供了一个新的思路。

关键词： smurf1 PIP5K1C 泛素化降解