检索结果-南通市图书馆

slug基因诱导绒癌细胞上皮-间质转化的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Slug基因诱导绒癌细胞上皮-间质转化的研究

作者：陈岩飞河北医科大学

学位级别：硕士

目的:绒毛膜癌,简称绒癌(choriocarcinoma,CC),是妊娠滋养细胞肿瘤(gestational trophoblastic neoplasia,GTN)的一种,恶性程度极高,可继发于葡萄胎妊娠、流产、足月妊娠、异位妊娠,其特点是滋养细胞失去了原有的绒毛结构,而散在地侵入... 详细信息

目的:绒毛膜癌,简称绒癌(choriocarcinoma,CC),是妊娠滋养细胞肿瘤(gestational trophoblastic neoplasia,GTN)的一种,恶性程度极高,可继发于葡萄胎妊娠、流产、足月妊娠、异位妊娠,其特点是滋养细胞失去了原有的绒毛结构,而散在地侵入肌层,发生局部转移,生长迅速,早期即可通过血液转移至肺、脑等重要器官。因其对化疗药物极其敏感,使大部分患者能够通过化疗治愈,但耐药性的产生严重影响着我们攻克绒毛膜癌的进程。本文对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在绒癌转移机制进行研究。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指某些特定部位的上皮细胞所发生的形态学特征的改变,使其在生物学上更适合侵袭和转移,近年来大量实验证明上皮-间质转化参与多种上皮恶性肿瘤的发生与发展。而slug作为锌指转录因子家族成员之一,是EMT重要的调节因子,通过与E-cadherin的E-box结合抑制其细胞内转录,导致细胞间紧密连接遭到破坏,从而诱导上皮-间质转化的发生,本实验通过将slug基因转染人绒毛膜癌JEG-3细胞,使其在细胞中过表达,观察转染后的细胞增殖能力及上皮-间质转化相关标记物的E-cadherin、N-cadherin的表达水平,阐述绒癌的发生发展机制,为绒癌的治疗提供理论依据。方法:1 细胞培养:人绒毛膜癌JEG-3细胞株,在温度为37℃,CO浓度为5%的恒温培养箱中培养;2 实验分组:①实验组,转染pEGFP-N1-slug质粒;②阴性对照组,转染不含目的基因的空白质粒;③脂质体对照组,转染时加入Lipofectamine2000脂质体转染试剂;④空白对照组,常规培养,无转染处理;3 显微镜观察各个实验组转染后细胞形态的变化;4 CCK-8法检测实验组、阴性对照组、脂质体对照组、空白对照组在0h、24h、48h、72h、96h时的增殖情况;5 Realtime-PCR检测实验组、阴性对照组、脂质体对照组、空白对照组细胞转染48小时后,细胞中slug-mRNA的表达水平;6 Western blot检测各组细胞转染48小时后细胞中E-cadherin及N-cadherin表达情况7 数据统计分析,本实验数据使用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,实验数据以均数±标准差(±s)表示。统计前对数据进行正态性及方差齐性检验,对于正态、方差齐的多组间均数比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),组间差异采用LSD/SNK法。检验水准α=0.05,P0.05差异无统计学意义。结果:1 人绒毛膜细胞JEG-3细胞形态的观察显微镜下观察各组细胞形态,空白对照组、脂质体对照组、阴性对照组细胞呈圆形或椭圆形,胞膜完整,呈片状生长;转染后的细胞形态不规则,呈梭形或多角形,细胞排列松散。2 转染效率的观察使用Lipofectamine2000脂质体转染法转染JEG-3细胞,荧光显微镜观察细胞转染效率。实验组及阴性对照组在转染24及48小时后后转染效率分别为15-20%、70-80%。脂质体对照组及空白对照组无荧光表达。3 CCK-8法检测细胞增殖情况0小时:实验组0.142±0.007,阴性对照组0.138±0.003,脂质体对照组0.143±0.003,空白对照组0.139±0.002,各组间比较P>0.05,差异无统计学意义,各组增殖速度无差异;24小时:实验组0.247±0.004,阴性对照组0.244±0.007,脂质体对照组0.193±0.004,空白对照组0.221±0.010,实验组与阴性对照组相比,P>0.05,差异无统计学意义,实验组与另外两个对照组(脂质体、空白对照组)相比,P<0.05,差异有统计学意义,说明实验组增殖速率较空白对照组、脂质体对照组快;48小时:实验组0.509±0.004,阴性对照组0.417±0.003,脂质体对照组0.407±0.011,空白对照组0.418±0.009,实验组与其他三组相比P<0.05,差异有统计学意义,实验组增殖速率较其他三组快;72小时:实验组0.977±0.019,阴性对照组0.617±0.003,脂质体对照组0.515±0.013,空白对照组0.781±0.016,实验组与阴性对照组、脂质体对照组、空白对照组三组相比P<0.05,差异有统计学意义,说明转染后72小时实验组增殖速率较其他三组快;96小时:实验组1.371±0.023,阴性对照组1.163±0.006,脂质体对照组0.801±0.005,空白对照组1.293±0.003,实验组与其他三组相比P<0.05,差异有统计学意义,实验

关键词： slug基因上皮-间质转化绒毛膜癌 JEG-3细胞 E-cadherin N-cadherin

Twist、slug基因在宫颈癌中的表达及与预后的关系

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

临床检验杂志 2013年第10期31卷 757-760页

作者：张一鸣张铭王一钱晖许文荣南京医科大学附属常州妇幼保健院检验科江苏常州213003 江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013

目的探讨Twist、slug基因在宫颈癌中的表达水平及与临床预后的关系。方法用实时定量PCR检测56例宫颈癌患者、120例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者组织和血浆中Twist、slug mRNA的表达,以35例正常宫颈及慢性宫颈炎组织和血浆作为对照。免疫组... 详细信息

目的探讨Twist、slug基因在宫颈癌中的表达水平及与临床预后的关系。方法用实时定量PCR检测56例宫颈癌患者、120例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者组织和血浆中Twist、slug mRNA的表达,以35例正常宫颈及慢性宫颈炎组织和血浆作为对照。免疫组化染色检测Twist、slug蛋白在宫颈癌组织中的表达,并分析其与宫颈癌复发的关系。结果对照组、CIN组、宫颈癌组组织中Twist mRNA表达水平分别为(1.98±0.48)×10-3、(3.89±0.86)×10-3、(6.53±1.25)×10-3,血浆中Twist mRNA表达水平分别为(1.62±0.55)×10-4、(1.76±0.68)×10-4、(2.08±0.90)×10-4;3组组织中slug mRNA表达水平分别为(1.33±0.32)×10-2、(3.02±0.95)×10-2、(4.69±1.02)×10-2,血浆中slug mRNA表达水平分别为(2.08±0.75)×10-3、(2.30±0.78)×10-3、(3.09±1.02)×10-3;宫颈癌组、CIN组组织中Twist、slug mRNA表达水平均高于对照组(F分别为46.69、55.30,Pslug mRNA相对表达水平最高(F分别为10.56、17.97,Pslug相对表达水平高于术后2周的水平(t分别为2.12、2.03,Pslug mRNA呈正相关(r=0.483,Pslug蛋白表达阳性率(55.4%、78.6%)高于对照组的表达阳性率(8.6%、37.1%)(χ2分别为20.15、15.80,Pslug基因在宫颈癌组织和血浆中表达上调,Twist阳性表达与宫颈癌的复发关系密切。

关键词： Twist基因 slug基因宫颈癌上皮-间质转化预后

宫颈癌组织中slug基因及其蛋白质的表达与意义

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

临床检验杂志 2011年第8期29卷 618-620,640页

作者：张铭张一鸣董一善王梅赵崇辉丁小青钱晖许文荣江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013 常州市妇幼保健院检验科江苏常州213003

目的检测slug基因在宫颈癌和慢性宫颈炎症组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生、发展的相关性及在宫颈癌诊疗中的意义。方法收集31例宫颈癌组织和17例慢性宫颈炎症组织标本,用RT-PCR、实时定量PCR检测slug mRNA的表达;用western blot分析S... 详细信息

目的检测slug基因在宫颈癌和慢性宫颈炎症组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生、发展的相关性及在宫颈癌诊疗中的意义。方法收集31例宫颈癌组织和17例慢性宫颈炎症组织标本,用RT-PCR、实时定量PCR检测slug mRNA的表达;用western blot分析slug蛋白的表达水平,并分析slug mRNA在宫颈癌中的表达水平与临床病理因素及高危型HPV病毒载量的相关性。结果宫颈癌组织中slug mRNA表达阳性率及相对表达水平均显著高于慢性宫颈炎症组织(χ2=9.872;U=140,P均slug蛋白表达水平高于慢性宫颈炎症组织(U=98,Pslug的阳性表达与国际妇产科学联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)肿瘤分期相关,Ⅱ期阳性率高于Ⅰ期(χ2=4.037,Pslug基因相对表达水平与高危型HPV病毒载量呈正相关(r=0.554,Pslug的表达上调,且与宫颈癌的FIGO分期相关,在宫颈癌的发生机制中,可能存在slug和高危型HPV的协同作用。

关键词： slug基因宫颈癌上皮-间质转化人乳头瘤病毒

靶向slug基因诱导PUMA上调增强AsPC-1细胞对γ射线的敏感性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华放射医学与防护杂志 2010年第4期30卷 410-413页

作者：张克君唐立岷焦学龙张炳远孙传东卢云曹红诗青岛大学医学院附属医院普外二科 266003 青岛大学医学院附属医院放射科 266003

目的探讨siRNA干扰slug基因表达对胰腺癌AsPC-1细胞γ射线敏感性的影响.方法以0、10、50、100感染复数（MOI）的rAAV-EGFP-slug-siRNA（slug-siRNA）转染AsPC-1细胞72 h,免疫组织化学法和Western blotting检测转染前后细胞内slug和PUMA表达.采用4 Gy γ射线细胞进行照射,MTT比色法和Hoechst 33342和PI双染法检测对照组、转染组（MOI 50）、照射组、转染（MOI 50）＋照射组细胞存活率和凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,Giemsa染色观察细胞形态.结果细胞受到MOI为10、50、100作用72 h后,slug蛋白表达相对值分别为0.831±0.14、0.546±0.12和0.178±0.08,明显低于对照组1.17±0.152,差异有统计学意义（F=4.992,P＜0.05）;而细胞受到MOI为10、50、100作用72 h,PUMA蛋白表达相对值分别为0.325±0.07、0.593±0.11和0.978±0.12,明显高于对照组0.143±0.04,差异有统计学意义（F=4.324,P＜0.05）;转染（MOI 50）＋照射组细胞增殖抑制率为（78.76±9.36）%,明显高于转染组和单独射线照射组[（43.68±6.71）%和（19.25±3.72）%],差异有统计学意义（F=5.056,P＜0.05）.另外,转染（MOI 50）＋照射组细胞的凋亡现象较其他组更加明显.结论 siRNA干扰slug基因表达能够解除slug对PUMA的抑制,增强胰腺癌细胞对γ射线的敏感性.

关键词： slug基因干扰 PUMA基因放射敏感性

siRNA干扰slug基因表达对胰腺癌BxPC-3细胞放射敏感性的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

世界华人消化杂志 2009年第11期17卷 1079-1084页

作者：王齐全郑健超魏小斌海口市人民医院消化内科海南省海口市527010 海口市人民医院中心实验室海南省海口市527010

目的:探讨siRNA干扰slug基因表达对BxPC-3细胞γ射线敏感性的影响.方法:制备携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的siRNA-slug质粒载体,用脂质体转染法将siRNA-slug(实验组)、pGCL-GFP(阴性对照)导入BxPC-3细胞(空白对照组),G418筛选阳性细... 详细信息

目的:探讨siRNA干扰slug基因表达对BxPC-3细胞γ射线敏感性的影响.方法:制备携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的siRNA-slug质粒载体,用脂质体转染法将siRNA-slug(实验组)、pGCL-GFP(阴性对照)导入BxPC-3细胞(空白对照组),G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染载体的BxPC-3阳性克隆细胞和未转染载体的BxPC-3细胞采用60Coγ射线对其进行照射***-PCR和Westernblot检测不同组细胞经γ射线后的slug、PUMA表达,MTT检测细胞生长抑制,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果:实验组细胞内slug基因被有效沉默;实验组细胞内PUMA蛋白和PUMAmRNA的相对值明显高于对照组(0.98±0.15vs0.32±0.08,1.03±0.16vs0.38±0.08,均Pslug基因后,解除slug对PUMA基因的抑制,增强BxPC-3对γ射线的敏感性.

关键词：胰腺癌 P53正向凋亡上调因子 slug基因 RNA干扰放射治疗

靶向slug基因的腺相关腺病毒载体的构建与鉴定

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

世界华人消化杂志 2011年第11期19卷 1179-1183页

作者：严明总张克君王齐全欧树安海南省人民医院检验科海南省海口市527102 海南医学院附属医院普外科海南省海口市527000 海口市人民医院消化内科海南省海口市527102

目的:构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-slug-siRNA病毒载体.方法:首先构建pDC316-EGFP-slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收的PCR产物;酶切pSNAV2.0-lacz-α载体质粒,并与上述产物进行连接;转化感受态大肠杆菌DH5α,得到重组质粒pSNAV2.0-EGFP-slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定.建立载体细胞株BHK/slug-siRNA,大规模制备rAAV2-EGFP-slug-siRAN并对其纯化、鉴定和滴度测定.结果:携带编码靶向slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确.将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/?UL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒rAAV2-EGFP-slug-siRNA,经检测目的片段插入成功,滴度为9.23×1010puf.结论:成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV-EGFP-slug-siRNA病毒载体.

关键词： slug基因小干扰RNA 重组腺相关腺病毒

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

眼科新进展 2010年第7期30卷 644-648页

作者：王鲜王旭欧树安贵阳医学院附属医院眼科贵州省贵阳市550004 浙江大学医学院附属邵逸夫医院眼科中心浙江省杭州市310000 浙江大学医学院附属邵逸夫医院普外科浙江省杭州市310000

目的构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-slug-siRNA病毒载体。方法首先构建pDC316-EGFP-slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-slug-siRNA片段,EcoRI和SalI双酶切后回收PCR产物。酶切pSNAV2.0-LacZ-α载体质粒,并与上述产物进行连接。转化感受态大肠杆菌DH5α,得到重组质粒pSNAV2.0-EGFP-slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定。建立载体细胞株BHK/slug-siRNA,大规模制备rAAV2-EGFP-slug-siRNA并对其纯化、鉴定和滴度测定。将体外培养的视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞转染rAAV-EGFP-slug-siRNA和pSNAV2.0-EGFP空载体。鸡胚绒毛尿囊膜实验检测血管生成,MTT比色法检测细胞存活率,建立鸡胚绒毛尿囊移植瘤。结果携带编码靶向slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确。将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/UL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒rAAV2-EGFP-slug-siRNA,经检测目的片段插入成功,滴度为90.21×109puf。slug-siRNA有效抑制RB细胞内slug表达后,肿瘤血管密度明显降低,血管生成被抑制,细胞存活率明显降低。实体瘤血管生成和生长受到抑制。结论成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV-EGFP-slug-siRNA病毒载体。干扰slug可抑制肿瘤血管生成,抑制RB细胞的生长增殖。

关键词： slug基因干扰腺相关病毒视网膜母细胞瘤增殖血管生成

RNA沉默slug基因对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及血管生成的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国妇幼保健 2010年第17期25卷 2412-2415页

作者：沈仕兴王齐全海南省儋州市农垦那大医院普外科 571700 湘雅医学院附属海口市人民医院妇科

目的:研究slug-shRNA-1干扰slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过slug-shRNA-1作用于slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技... 详细信息

目的:研究slug-shRNA-1干扰slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过slug-shRNA-1作用于slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察MCF-7通过slug-shRNA-1作用于slug基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果:siRNA-slug作用于slug基因后能明显降低MCF-7穿透Matrigel的能力(Pslug-shRNA-1作用于slug基因后能明显降低MCF-7的侵袭潜力,抑制MCF-7诱导管腔形成能力。

关键词：人乳腺癌细胞 RNA干扰 slug基因侵袭血管形成

过表达和敲除slug基因卵巢癌SKOV3细胞稳定株的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

山东医药 2017年第42期57卷 1-4页

作者：雷静赵然高茹辛灵彪刘欣天津医科大学天津300070

目的利用慢病毒载体和改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统分别构建过表达和敲除slug基因的卵巢癌SKOV3细胞稳定株。方法 (1)以质粒p CMV-Myc-slug为模板扩增出HA-slug基因,将其连接到慢病毒表达质粒p LVX-IRES-Hyg中。将此重组表达载体p LVX... 详细信息

目的利用慢病毒载体和改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统分别构建过表达和敲除slug基因的卵巢癌SKOV3细胞稳定株。方法 (1)以质粒p CMV-Myc-slug为模板扩增出HA-slug基因,将其连接到慢病毒表达质粒p LVX-IRES-Hyg中。将此重组表达载体p LVX-HA-slug通过病毒感染法感染SKOV3细胞(实验组),以相同条件制备p LVX-IRES-Hyg空载体的慢病毒作为阴性对照,Western blotting法检测两组slug蛋白表达。(2)将一对能特异结合slug基因的sgRNA分别连接到载体PX462中,获得的一对重组质粒通过脂质体法共转染SKOV3细胞,筛选稳定株,挑取单克隆细胞(实验组),用Western blotting法检测slug蛋白表达,另设空白对照组,不加任何处理。结果 (1)对挑取的单克隆菌液进行PCR扩增,阳性者提取质粒进行PCR和双酶切,两者验证正确后进行DNA测序鉴定,结果证实重组质粒构建成功。阴性对照组与实验组slug蛋白相对表达量分别为0.92±0.02和3.14±0.04,实验组slug蛋白表达高于阴性对照组(Pslug蛋白的相对表达量分别为0.07±0.01、0.06±0.01、0.21±0.02、0.20±0.01,空白对照组为0.56±0.03。实验组slug蛋白相对表达量低于空白对照组(P均slug基因的SKOV3细胞株构建成功,为进一步探讨slug在卵巢癌中的作用提供了细胞模型。

关键词： slug基因慢病毒载体 SKOV3细胞卵巢癌细胞模型