检索结果-南通市图书馆

作者：农源广西大学

学位级别：硕士

中国是罗非鱼养殖、消费、贸易大国,以无乳链球菌(Group B Streptococcus,GBS)为主的细菌性疾病,严重阻碍了我国罗非鱼养殖业的发展。早期诊断和使用抗生素治疗是防治鱼类细菌性疾病的有效方法。为此,建立GBS快速诊断体系仍是预防该病... 详细信息

中国是罗非鱼养殖、消费、贸易大国,以无乳链球菌(Group B Streptococcus,GBS)为主的细菌性疾病,严重阻碍了我国罗非鱼养殖业的发展。早期诊断和使用抗生素治疗是防治鱼类细菌性疾病的有效方法。为此,建立GBS快速诊断体系仍是预防该病的主要手段。(一)针对GBS的scpb基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)设计了ORF1和ORF4两对引物,利用PCR分别扩增出ORF1和ORF4基因,构建了PET28a-ORF1-SUMO(+)和PET28a-ORF4-SUMO(+)表达载体,将表达载体转化至BL21大肠杆菌,经终浓度0.8 m M IPTG和1.2 m M IPTG 16℃条件下诱导18 h获得ORF1和ORF4可溶性重组蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot验证,ORF1和ORF4重组蛋白分别大小为68.5 k Da和104.3 k Da。(二)经筛选,将ORF4重组蛋白作为抗原进行ELISA包被,建立了罗非鱼无乳链球菌病抗体间接ELISA检测方法,并对该方法进行优化,确定最优条件为:0.1μg/m L ORF4重组蛋白37℃包被1h;待测血清按1:5稀释,37℃孵育2 h;抗罗非鱼Ig M单克隆抗体2C10 1 mg/m L按1:2 000稀释,37℃孵育0.5 h;羊抗鼠Ig G-HRP多克隆抗体按1:5 000稀释,37℃孵育1 h;TMB显色,37℃孵育20 min。该方法仅能检测出罗非鱼无乳链球菌阳性血清和ORF4重组蛋白抗体血清,与罗非鱼海豚链球菌、嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌和鳗弧菌阳性血清均无交叉反应;其临界值上限为OD450值=0.456,临界值下限为OD450值=0.377;样品血清最大检测稀释倍数为1:640;批内检测和批外检测试验的变异系数分别为3.349%～5.272%和2.793%～5.902%。用该方法对192份罗非鱼临床血清进行检测,阳性率为73.43%,与全菌包被ELISA检测方法的符合率是88.02%。(三)利用优化好的抗体间接ELISA检测方法,对广西贵港、五塘、玉林、金光、北流、陆川、南宁五个地方共919份罗非鱼血清进行GBS流行病学调查。结果表明,在8～11月份,广西罗非鱼无乳链球菌感染血清阳性率达53.972%。本试验成功克隆表达获得ORF1和ORF4重组蛋白,建立了罗非鱼无乳链球菌抗体间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床检测一致性,为GBS血清学流行病学调查和防控提供技术支撑。为广西罗非鱼无乳链球菌病的防控和净化提供参考依据。

关键词：无乳链球菌 scpb蛋白罗非鱼免疫球蛋白M 酶联免疫吸附检测原核表达

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

罗非鱼无乳链球菌特异性IgM抗体ELISA检测方法的建立及对疫苗免疫效果的评估

引用

中国预防兽医学报 2016年第8期38卷 649-653页

作者：陈善真可小丽王志花王贵平卢迈新刘志刚杨洁李其昌广东海大畜牧兽医研究院广东广州511400 中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室广东广州510380

为建立检测罗非鱼无乳链球菌特异性抗体的方法及评价疫苗的免疫效果,本研究首先制备纯化罗非鱼无乳链球菌特异性IgM和兔抗罗非鱼无乳链球菌IgM的IgG,利用原核表达纯化的无乳链球菌scpb蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测无乳... 详细信息

为建立检测罗非鱼无乳链球菌特异性抗体的方法及评价疫苗的免疫效果,本研究首先制备纯化罗非鱼无乳链球菌特异性IgM和兔抗罗非鱼无乳链球菌IgM的IgG,利用原核表达纯化的无乳链球菌scpb蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立检测无乳链球菌特异性IgM抗体的ELISA方法,并通过比较测定无乳链球菌疫苗免疫后血清抗体水平变化与攻毒后相对免疫保护率的关系来评估该方法的有效性。结果表明:该方法仅能够特异性的检测罗非鱼的血清抗体,而与其它鱼类的血清抗体无交叉反应,特异性良好,其敏感性为1∶800,批内、批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性,并且抗体水平的变化与相对免疫保护率(RPS)变化具有平行相关性,变化趋势基本一致。本研究首次建立了检测罗非鱼无乳链球菌特异性IgM抗体的ELISA方法,该方法可以作为评估无乳链球菌疫苗免疫效果的有效手段,也为罗非鱼无乳链球菌病的检测提供技术支撑。

关键词：罗非鱼无乳链球菌 IgM scpb蛋白 ELISA

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

罗非鱼补体C3的克隆及无乳链球菌C5a肽酶免疫前后的组织表达分析

罗非鱼补体C3的克隆及无乳链球菌C5a肽酶免疫前后的组织表达分析

引用

作者：李晓恬上海海洋大学

学位级别：硕士

近年来,罗非鱼链球菌病严重危害我国罗非鱼养殖产业,目前尚无有效防治措施。通过疫苗预防是一种可行办法。本实验室前期的研究发现,无乳链球菌C5a肽酶(Scp B)蛋白免疫罗非鱼后,能显著提高罗非鱼对无乳链球菌的抵抗力,且能增强其非特异... 详细信息

近年来,罗非鱼链球菌病严重危害我国罗非鱼养殖产业,目前尚无有效防治措施。通过疫苗预防是一种可行办法。本实验室前期的研究发现,无乳链球菌C5a肽酶(Scp B)蛋白免疫罗非鱼后,能显著提高罗非鱼对无乳链球菌的抵抗力,且能增强其非特异免疫能力。补体C3是连接特异性免疫和非特异免疫的桥梁,通过克隆罗非鱼补体C3基因,并了解其在Scp B免疫前后的组织表达特点,可为进一步研究Scp B蛋白抗无乳链球菌感染的作用机制奠定基础。补体C3(Complement component C3)是补体系统的中心效应分子,在鱼类抗病原感染中发挥重要作用。为研究罗非鱼补体C3在抗无乳链球菌感染中的作用,本实验克隆了罗非鱼补体C3基因,并对其氨基酸序列、理化特性及组织表达特点进行了分析。结果显示,罗非鱼补体C3基因c DNA序列(Gen Bank登录号:KU977109)为6994bp,ORF区全长5361bp,共编码1786个氨基酸;通过电子克隆获得罗非鱼补体C3基因组DNA 32250bp,包含外显子44个和内含子43个。罗非鱼补体C3蛋白分子量为200.14k Da,等电点为7.11,为疏水性蛋白;补体C3氨基酸序列同源性分析表明,尼罗罗非鱼与伯氏朴丽鱼(Haplochromis burtoni)相似性最高(94%),并在系统进化树中聚为一支,与其他聚为一簇的鱼类的相似性则介于36%3.2%之间。根据所得的罗非鱼补体C3基因c DNA序列,设计引物,运用实时定量PCR技术检测Scp B免疫及无乳链球菌(GBS)感染罗非鱼前后补体C3基因在各组织中的表达量。结果表明:补体C3基因在健康罗非鱼各组织中均有表达,其中在肝脏中表达量最高;Scp B蛋白免疫组和对照组罗非鱼在人工感染GBS12h后,肝脏中补体C3表达量均上调;组间比较发现,免疫组罗非鱼肝脏中补体C3表达量在感染后4h时显著高于对照组(p<0.05);此外,感染前(0h)免疫组罗非鱼头肾和脾脏中补体C3表达量均显著低于对照组(p<0.05),但在感染后42h,免疫组表达量均呈升高趋势,而对照组则呈降低趋势。根据所得的罗非鱼补体C3基因c DNA序列,设计引物,合成RNA探针,利用原位杂交技术,定位补体C3基因在罗非鱼肝脏中的分布。初步实验结果显示,补体C3基因在罗非鱼的肝脏组织中具有较强的阳性表达。本结果为进一步研究补体C3参与受免罗非鱼机体抗无乳链球菌感染的作用机制奠定理论基础。

关键词：罗非鱼补体C3 无乳链球菌 scpb蛋白免疫

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：