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靶向hTERT的RNAi载体的构建及其对大肠癌sw-480细胞增殖的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2014年第4期21卷 423-427页

作者：孙彦孟永亮山东万杰医学院医学系内科学教研室山东淄博255213

目的:构建靶向人大肠癌细胞端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的RNAi载体,探讨其对人大肠癌sw480细胞增殖的影响。方法:设计3条靶向hTERT的shRNA序列和阴性对照序列,分别克隆入pGPU6/GFP/Neo载体,构建R... 详细信息

目的:构建靶向人大肠癌细胞端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的RNAi载体,探讨其对人大肠癌sw480细胞增殖的影响。方法:设计3条靶向hTERT的shRNA序列和阴性对照序列,分别克隆入pGPU6/GFP/Neo载体,构建RNAi载体pGPU6-hTERT-1、2、3和阴性对照载体pGPU6-hTERT-NC,转染sw480细胞。RT-PCR检测各组载体对hTERT mRNA表达的影响,MTT法检测下调hTERT mRNA表达对sw480细胞增殖的影响。结果:成功构建3个携带hTERT mRNA序列的重组载体,3种RNAi载体均能明显抑制sw480细胞hTERT mRNA的表达,pGPU6-hTERT-3组sw480细胞hTERT mRNA表达水平较空白对照组下调最为显著(0.347±0.028 vs 0.513±0.032,Psw480细胞增殖,pGPU6-hTERT-3组细胞增殖抑制率较空白对照组、脂质体对照组和pGPU6-hTERT-NC组升高最为显著[(50.08±0.43)%vs(4.11±0.39)%、(3.88±0.35)%、(3.38±0.35)%,Psw480细胞的增殖,其机制可能与降低hTERT基因的表达从而抑制端粒酶活性有关。

关键词：大肠癌 RNA干扰人端粒酶逆转录酶 sw-480细胞增殖

酪酸梭菌诱导结肠癌sw-480细胞凋亡及作用机制

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第三军医大学学报 2013年第22期35卷 2448-2451页

作者：杨金梅张德纯李科刘胜男朱辉重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的探讨酪酸梭菌(Clostridium butyricum,CB)诱导人结肠癌sw-480细胞凋亡的作用及机制。方法采用不同浓度的酪酸梭菌(1.5×103、1.5×104、1.5×105、1.5×106、1.5×107、1.5×108CFU/mL)在不同作用时间(24、48、72、96 h)处理结肠癌sw-480细胞后,CCK8法检测CB对sw-480细胞的增殖抑制。电镜观察CB对sw-480细胞形态的影响。Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡。Caspase试剂盒检测sw-480细胞中Caspase-3和Caspase-9的活性。Western blot法检测sw-480细胞Bax和Bcl-2凋亡蛋白表达的变化。结果酪酸梭菌对sw-480细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性;菌液浓度为1.5×107CFU/mL和1.5×108CFU/mL的酪酸梭菌处理后的sw-480细胞形成典型的凋亡小体;酪酸梭菌(1.5×107CFU/mL和1.5×108CFU/mL)处理能显著增强sw-480细胞Caspase-3和Caspase-9的活性,促进sw-480细胞凋亡(Psw-480细胞凋亡,其作用机制与凋亡相关基因Bax、Bcl-2和caspase-3、caspase-9的表达有关。

关键词：酪酸梭菌结肠癌 sw-480细胞凋亡

重组人肿瘤坏死因子对人结肠癌sw－480细胞在体外的杀伤作用研究

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第三军医大学学报 1995年第1期17卷 19-23页

作者：张胜本周晓武张连阳黄显凯第三军医大学大坪医院普通外科

文中报道了重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）对人结肠癌细胞株ＳＷ－４８０的克隆抑制和细胞毒作用。改良噻唑兰（ＭＴＴ）法表明ＴＮＦ在６００００ｕ／ｍｌ时才有明显的细胞毒作用说明ＳＷ－４８０对ＴＮＦ低度敏感，而且无剂量依赖... 详细信息

文中报道了重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）对人结肠癌细胞株ＳＷ－４８０的克隆抑制和细胞毒作用。改良噻唑兰（ＭＴＴ）法表明ＴＮＦ在６００００ｕ／ｍｌ时才有明显的细胞毒作用说明ＳＷ－４８０对ＴＮＦ低度敏感，而且无剂量依赖关系．但克隆抑制试验表明１０ｕ／ｍｌ就可明显抑制ＳＷ－４８０集落的生长，并有剂量依赖性，且在剂量１５０ｕ／ｍｌ以上时抑制作用随时间而增强．３Ｈ－ＴｄＲ掺入测定的ＴＮＦ抑制ＳＷ－４８０细胞ＤＮＡ合成和ＭＴＴ法测定的细胞毒曲线一致说明ＴＮＦ对ＳＷ－４８０的主要作用是抑制ＤＮＡ合成．ＴＮＦ对ＳＷ－４８０抑制后超微结构变化：最初是胞膜出现微孔，然后细胞内线粒体变性，溶解，核固缩，溶解，最后细胞溶解．这些结果与ＭＴＴ法细胞毒试验及３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验相结合说明ＴＮＦ对ＳＷ－４８０杀伤作用主要针对细胞核内外染色体的ＤＮＡ合成上．

关键词：肿瘤坏死因子结肠肿瘤 sw-480细胞

MTT检测超声激活血卟啉对sw-480细胞的杀伤作用

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陕西师范大学学报（自然科学版） 2003年第1期31卷 94-98页

作者：张坤齐浩刘全宏张军平李清李萌陕西师范大学生命科学学院陕西西安710062 陕西师范大学应用声学研究所陕西西安710062

采用1.1、1.6、2.3MHz频率聚焦超声结合血卟啉的方式对体外培养的人结肠癌细胞sw 480进行照射,其介质分别为NaCl溶液、RPMI1640、完全培养基,用MTT法测试了SDT对肿瘤细胞的杀伤效果.结果表明,sw 480细胞在声照强度为1.5W/cm2,频率2.3MH... 详细信息

采用1.1、1.6、2.3MHz频率聚焦超声结合血卟啉的方式对体外培养的人结肠癌细胞sw 480进行照射,其介质分别为NaCl溶液、RPMI1640、完全培养基,用MTT法测试了SDT对肿瘤细胞的杀伤效果.结果表明,sw 480细胞在声照强度为1.5W/cm2,频率2.3MHz条件下,介质为NaCl溶液、RPMI1640和完全培养基中都存在超声激活血卟啉增强杀伤肿瘤细胞的效果,且在RPMI1640和完全培养基中这种效果和处理后细胞孵育的时间有一定的相关性.

关键词： MTT检测 sw-480细胞杀伤作用微量培养四唑氮盐检测聚焦超声血卟啉人结肠癌细胞光动力学疗法

重组人肿瘤坏死因子对人结肠癌sw-480细胞的体内作用

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第三军医大学学报 1999年第11期21卷 792-795页

作者：黄显凯张胜本饶本强第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所普通外科重庆400042

目的：探讨ＴＮＦ抗大肠癌的作用及其机制。方法：建立人结肠腺癌裸小鼠移植瘤模型，观察ｒｈＴＮＦ对人结肠腺癌ＳＷ－４８０裸小鼠移植瘤重量、组织学和超微结构及细胞周期动力学的影响。结果：ｒｈＴ－ＮＦ对人结肠腺癌裸小鼠移植瘤... 详细信息

目的：探讨ＴＮＦ抗大肠癌的作用及其机制。方法：建立人结肠腺癌裸小鼠移植瘤模型，观察ｒｈＴＮＦ对人结肠腺癌ＳＷ－４８０裸小鼠移植瘤重量、组织学和超微结构及细胞周期动力学的影响。结果：ｒｈＴ－ＮＦ对人结肠腺癌裸小鼠移植瘤具有抑制作用，抑瘤作用呈剂量依赖性；结肠癌细胞围绕血管出现片状坏死，并有大量炎细胞浸润；ｒｈＴＮＦ能明显抑制结肠癌细胞从Ｇ０／Ｇ１期过渡到Ｓ和Ｇ２Ｍ期，使细胞增殖指数显著降低，ＤＮＡ抑制率呈剂量依赖性。结论：ｒｈＴＮＦ对大肠癌生长具有抑制作用，可能与ｒｈＴＮＦ诱导的炎症反应及血管损伤有关；ｒｈＴＮＦ能特异性抑制大肠癌细胞从Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ和Ｇ２Ｍ期过渡。

关键词：肿瘤坏死因子结肠肿瘤 sw-480细胞

蟾蜍灵对结肠癌sw-480细胞polo-like kinase-1表达及细胞凋亡的影响

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中国病理生理杂志 2006年第3期22卷 491-494页

作者：范钰郑树赵刚浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所浙江大学肿瘤研究所浙江杭州310009 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所上海200032

目的:观察蟾蜍灵对人结肠癌细胞系增殖的抑制作用,并探讨其作用机理。方法:采用不同浓度的蟾蜍灵作用结肠癌sw-480细胞后,采用MTT法检测细胞的恶性增殖,分别采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡情况,分别采用Westernblotting、North... 详细信息

目的:观察蟾蜍灵对人结肠癌细胞系增殖的抑制作用,并探讨其作用机理。方法:采用不同浓度的蟾蜍灵作用结肠癌sw-480细胞后,采用MTT法检测细胞的恶性增殖,分别采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡情况,分别采用Westernblotting、Northernblotting分别检测polo-likekinase-1(PLK1)蛋白、mRNA水平。结果:蟾蜍灵能抑制结肠癌细胞的恶性增殖,且与浓度相关。蟾蜍灵能诱导结肠癌细胞凋亡,且呈浓度依赖性。流式细胞仪检测发现,蟾蜍灵将细胞阻滞在G2/M期。蟾蜍灵能下调结肠癌PLK1蛋白、mRNA水平,且呈药物浓度和作用时间依赖性。结论:蟾蜍灵有效地抑制结肠癌sw-480细胞增殖,其机制可能与其下调PLK1表达,从而诱导凋亡有关。

关键词：蟾蜍科结直肠肿瘤细胞凋亡细胞周期 sw-480细胞

藻红蛋白对人结肠癌sw-480细胞凋亡的诱导作用

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广东医学 2012年第17期33卷 2552-2554页

作者：任凭潘若望李侠应俊张洪勤李佩珍温州医学院生物学实验教学中心浙江温州325000 中国人民解放军第118医院浙江温州325000

目的研究藻红蛋白(PE)对人结肠癌sw-480细胞凋亡的诱导作用。方法采用MTT法检测PE对sw-480细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测PE对sw-480细胞凋亡的影响。采用激光共聚焦显微镜Annexin V-FITC/PI双荧光染色观察藻红蛋白作用后sw-480细... 详细信息

目的研究藻红蛋白(PE)对人结肠癌sw-480细胞凋亡的诱导作用。方法采用MTT法检测PE对sw-480细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测PE对sw-480细胞凋亡的影响。采用激光共聚焦显微镜Annexin V-FITC/PI双荧光染色观察藻红蛋白作用后sw-480细胞的变化。结果 PE对sw-480有较强的生长抑制作用,并呈剂量-效应关系(r=0.87,Psw-480细胞的抵制率达54.01%,IC50值为34.32μg/mL。结论 PE对sw-480细胞有较强的抑制作用,可以诱导其凋亡。

关键词：藻红蛋白 sw-480细胞细胞凋亡

二甲双胍对人结肠癌细胞株sw-480增殖的影响

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南方医科大学学报 2010年第8期30卷 1935-1938,1942页

作者：周小智薛耀明朱波沙建平南方医科大学南方医院内分泌代谢科广东广州510515

目的观察二甲双胍对人结肠癌细胞株sw-480增殖的影响并初步探讨其可能机制。方法不同浓度的二甲双胍干预结肠癌细胞株sw-480,MTT法比较其生长曲线的变化,采用流式细胞术研究二甲双胍对sw-480细胞周期的影响,Westernblotting测定CyclinD... 详细信息

目的观察二甲双胍对人结肠癌细胞株sw-480增殖的影响并初步探讨其可能机制。方法不同浓度的二甲双胍干预结肠癌细胞株sw-480,MTT法比较其生长曲线的变化,采用流式细胞术研究二甲双胍对sw-480细胞周期的影响,Westernblotting测定CyclinD1的表达,用TRAP银染法观察其对端粒酶活性的影响。结果 MTT结果示二甲双胍可以抑制人结肠癌细胞的增殖,并呈时间浓度依赖性。PBS对照组与5mmol/L二甲双胍干预组72h后的细胞G0/G1期所占百分比分别为55.81±0.63,63.38±0.99;S期所占百分比分别为31.11±3.05,25.29±1.64;G2/M期所占百分比分别为13.09±3.00,11.33±2.60。Westernblotting示5mmol/L二甲双胍干预组72h后CyclinD1的表达较PBS对照组明显减弱。TRAP银染法检测示5mmol/L二甲双胍干预sw-480细胞72h后可以显著抑制端粒酶活性。结论二甲双胍能抑制人结肠癌细胞的增殖,其主要机制可能与G0/G1期细胞周期阻滞、下调CyclinD1的表达及抑制端粒酶活性有关。

关键词：二甲双胍 sw-480细胞细胞周期 CyclinD1 端粒酶活性

二甲双胍对AGEs诱导人结肠癌细胞sw-480增殖作用的影响及机制的初探

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中国糖尿病杂志 2012年第7期20卷 546-548页

作者：周小智薛耀明高方朱波关美萍南方医科大学南方医院内分泌代谢科广州510515 江西省吉安市中心人民医院内分泌科

目的探讨二甲双胍(Met)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导人结肠癌细胞株sw-480增殖作用的影响及机制。方法实验以体外培养的sw-480细胞为研究对象,分为小牛血清白蛋白(BSA)组,AGE组,AGE+Met组,BSA+Met组,各组均干预72h。四氮唑蓝(MTT)法... 详细信息

目的探讨二甲双胍(Met)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导人结肠癌细胞株sw-480增殖作用的影响及机制。方法实验以体外培养的sw-480细胞为研究对象,分为小牛血清白蛋白(BSA)组,AGE组,AGE+Met组,BSA+Met组,各组均干预72h。四氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,流式细胞术测定细胞周期,Western blot检测周期蛋白D1(CyclinD1)的表达水平,TRAP银染法测定端粒酶活性。结果 AGE组的细胞活力、CyclinD1的表达、端粒酶活性较BSA组显著增加,G0/G1期比率较BSA组显著减少(P均细胞活力、Cy-clinD1表达、端粒酶活性显著降低,而G0/G1期比率显著增加(P均sw-480细胞的生长,并抑制AGEs诱导的促sw-480生长作用。

关键词：晚期糖基化终末产物二甲双胍 sw-480细胞细胞周期周期蛋白D1 端粒酶活性