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皂角刺含药血清诱导直肠癌细胞sw-480凋亡及其对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2013年第19期19卷 217-221页

作者：何峰何光志张利新王琴李志王开平邓文玲符中柱贵阳中医学院第一附属医院贵阳550002 贵阳中医学院贵阳550002

目的:采用血清药理学方法探讨皂角刺含药血清诱导肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:制备皂角刺药液,50只健康SD大鼠分为皂角刺高中低剂量组(每1 mL分别含有生药2 000,1 000,500 mg),环磷酰胺阳性对照组(50 mg·kg-1)和生理盐水空白对照组5... 详细信息

目的:采用血清药理学方法探讨皂角刺含药血清诱导肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:制备皂角刺药液,50只健康SD大鼠分为皂角刺高中低剂量组(每1 mL分别含有生药2 000,1 000,500 mg),环磷酰胺阳性对照组(50 mg·kg-1)和生理盐水空白对照组5个组,按20 mL·kg-1大鼠体质量给药,以制备含药血清。取含药血清培养液在体外作用于sw-480细胞(密度为1×106/mL),分别在24,48,72 h后,采用MTT法检测含药血清对sw-480增殖的影响;加入药物血清培养液处理细胞24 h后,采用流式细胞仪检测sw-480凋亡率,RT-PCR检测各组含药血清对细胞B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)/Bel-2相关x蛋白(Bax)基因表达的影响。结果:与空白对照组比较,皂角刺含药血清培养液作用细胞的吸光度(A)在20,40,60 h均明显低于空白组(0.370±0.005)%,(0.624±008)%,(1.078±0.038)%(Psw-480凋亡依次为(37.386±0.163)%,(35.834±0.092 3)%,(27.572±1.193)%显著高于空白对照(5.036±0.378)%(Psw-480细胞的Bcl-2表达(0.258±0.037,0.442±0.024和0.652±0.072)明显低于空白对照组(0.936±0.047)(Psw-480生长和诱导其凋亡,Bcl-2 mRNA基因表达减少与Bax mRNA基因表达增多可能是皂角刺诱导肠癌细胞凋亡的机制之一。

关键词：皂角刺含药血清 sw-480 抑瘤作用凋亡 B细胞淋巴瘤/白血病2基因/Bel-2相关x蛋白基因

PMS2调节PCNA/MMR通路对结肠癌细胞sw-480生物学行为的影响

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PMS2调节PCNA/MMR通路对结肠癌细胞SW-480生物学行为的影响

作者：丁绪浩锦州医科大学

学位级别：硕士

目的探讨PMS2对结肠癌细胞sw-480侵袭、增殖以及铂类药物敏感性的影响,并通过对错配修复(MMR,mismatch repair)通路蛋白的检测阐明其机制。方法1、TIMER数据库对PMS2进行泛癌分析,利用TCGA数据库下载一个包含696个样本的数据并进行生信... 详细信息

目的探讨PMS2对结肠癌细胞sw-480侵袭、增殖以及铂类药物敏感性的影响,并通过对错配修复(MMR,mismatch repair)通路蛋白的检测阐明其机制。方法1、TIMER数据库对PMS2进行泛癌分析,利用TCGA数据库下载一个包含696个样本的数据并进行生信分析,对PMS2对结直肠癌的预测能力和临床意义进行分析。通过荧光定量PCR法与免疫荧光印记法检测PMS2的表达水平,筛选出合适的细胞系sw-480,设计针对PMS2的si-RNA和过表达质粒,通过瞬时转染法对sw-480进行转染。2、检测敲减和过表达PMS2后sw-480的细胞的生物学行为,将转染后的细胞分为敲减组:实验组(si-PMS2),对照组(si-NC);过表达组:实验组(PMS2mimics),对照组(PMS2mimics NC)。3、通过CCK8法对细胞的增殖能力进行检测;Transwell法检测细胞的侵袭能力;检测sw-480细胞对顺铂的半数致死率浓度,并使用流式细胞术和CCK8法检测sw-480细胞对顺铂的敏感性。4、在线运用蛋白互作网站STRING预测PMS2在错配修复通路(MMR)上起到关键作用,使用免疫蛋白印记法(Western blot)检测PMS2敲减和过表达后MMR下游通路蛋白的表达水平。结果1、TIMER的分析,PMS2在大部分癌症组织中的表达水平高于正常组织或癌旁组织;通过对TCGA下载的结直肠癌数据分析也发现,PMS2的表达水平在结直肠癌组织中高于正常组织,对样本中PMS2的ROC曲线分析中发现ROC曲线的cut-off值是2.867,PMS2对肿瘤预后有一定的统计学意义(AUC=0.791,CI=0.751-0.831)。2、转染si-RNA后,对si-PMS2组与对照组进行RT-PCR与Western blot检测,si-PMS2组的PMS2表达水平要远低于si-NC组(Psw-480增殖能力增强(Psw-480的增殖能力、侵袭能力减弱,顺铂敏感性增强;敲减则会使sw-480的增殖能力、侵袭能力增强,顺铂敏感性减弱。2、PMS2通过PCNA/MMR通路调控结肠癌细胞sw-480的生物学行为。

关键词： sw-480 结肠癌 MMR通路 PMS2 PCNA

REV3基因联合抗癌药物对sw-480细胞的影响

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宁夏医科大学学报 2012年第6期34卷 561-564,F0003页

作者：黄金娟隋御李元杰金彩霞张竞文贾伟李利坚周翔徐方宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系、生育力保持省部共建教育部重点实验室银川750004

目的探讨REV3基因低表达联合抗癌药物对人结肠癌细胞(sw-480)增殖和凋亡的影响。方法利用RNAi技术降低REV3基因在sw-480细胞中的表达,以实时荧光定量PCR和免疫细胞化学检测REV3表达量的降低情况,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作... 详细信息

目的探讨REV3基因低表达联合抗癌药物对人结肠癌细胞(sw-480)增殖和凋亡的影响。方法利用RNAi技术降低REV3基因在sw-480细胞中的表达,以实时荧光定量PCR和免疫细胞化学检测REV3表达量的降低情况,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞,再用抗癌药物作用48h后运用MTT实验和流式细胞仪,对实验组和对照组细胞进行细胞增殖和凋亡变化情况的检测。结果与空白对照组相比,REV3基因低表达或抗癌药物(顺铂或槐定碱)单独作用均能促进sw-480细胞凋亡并抑制其增殖(Psw-480细胞凋亡和增殖的作用较单一因素更加显著;若将三者联合则比以上任一两种联合作用效果更为显著,以上结果均具有统计学意义(Psw-480细胞的凋亡并抑制其增殖,若三者同时联合作用效果更加显著,提示"基因+药物"联合抑癌具有协同增效的作用。

关键词： REV3基因 RNAi技术 sw-480 qRT—PCR 流式细胞仪

P53信号通路在苦参碱诱导人结肠癌sw-480细胞凋亡的作用机制

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辽宁医学杂志 2021年第5期35卷 8-10页

作者：刘斌刘晔靖边县中医医院陕西榆林718500 靖边县人民医院陕西榆林718500

目的探究P53信号通路在苦参碱诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制;方法通过使用苦参碱干预人结肠癌sw-480细胞,使用CCK-8、Western blot实验检测细胞P53基因以及侵袭力的变化;结果 CCK-8实验,苦参碱干预结肠癌细胞,使其增殖力降低(P<0.05);... 详细信息

目的探究P53信号通路在苦参碱诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制;方法通过使用苦参碱干预人结肠癌sw-480细胞,使用CCK-8、Western blot实验检测细胞P53基因以及侵袭力的变化;结果 CCK-8实验,苦参碱干预结肠癌细胞,使其增殖力降低(Psw-480细胞凋亡,从而诱导细胞凋亡,降低结肠癌细胞的侵袭和转移能力,达到抗肿瘤作用。

关键词： sw-480 P53 苦参碱

阿司匹林对人γδT细胞和消化系统肿瘤细胞的作用比较

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中国医院药学杂志 2009年第4期29卷 272-276页

作者：刘军权陈复兴朱斌张颂张娟孙蕾清陈桂林冯霞中国人民解放军第97医院实验科江苏徐州221004 中国人民解放军第97医院药剂科江苏徐州221004 徐州医学院附属医院实验科江苏徐州221004

目的:比较阿司匹林对人γδT细胞和5株消化系统肿瘤细胞株的作用。方法:用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、sw-1990、sw-480、sw-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测阿司匹林对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测... 详细信息

目的:比较阿司匹林对人γδT细胞和5株消化系统肿瘤细胞株的作用。方法:用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、sw-1990、sw-480、sw-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测阿司匹林对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、sw-1990、sw-480、sw-1116和LOVO细胞凋亡率。结果:培养前γδT细胞数为5.12%,CD44表达5.13%;培养10d时γδT细胞数为91.27%,CD44为94.00%。阿司匹林在3.2mmol·L-1时对γδT细胞的生长抑制率达41.3%,明显高于对SGC-7901、sw-1990、sw-480、sw-1116和LOVO细胞株抑制率(分别为19.6%,11.8%,9.2%,6.4%和1.6%)。0.4～1.6mmol·L-1阿司匹林诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过3.2mmol·L-1时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、sw-1990、sw-480、sw-1116和LOVO细胞经不同浓度的阿司匹林诱导24h后γδT细胞对其杀伤活性除sw-1116和LOVO细胞株略有增强外,其他组与对照组比较无明显变化。3.2mmol·L-1阿司匹林对γδT细胞诱导24h的凋亡率(52.7%)显著高于SGC-7901、sw-1990、sw-480、sw-1116和LOVO细胞株(分别为7.9%,8.9%,6.2%,4.5%和3.7%)。结论:阿司匹林在临床常规使用的药物浓度时对5种肿瘤细胞株和γδT细胞无抑制作用,但能增强γδT细胞杀伤5种肿瘤细胞株活性,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加γδT细胞的凋亡率,而对5种肿瘤细胞株作用不明显。这一结果为临床阿司匹林预防消化道肿瘤的用量提供了一定的参考价值。

关键词： γδT细胞阿司匹林消化系统肿瘤SGC-7901 sw-1990 sw-480 sw-1116和LOVO细胞株

TRAIL-BMSCs对直肠癌荷瘤鼠模型的干预及活体示踪研究

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TRAIL-BMSCs对直肠癌荷瘤鼠模型的干预及活体示踪研究

作者：陈安强山西医科大学

学位级别：硕士

目的：探索BMSC、sw-480的稳定体外培养及Trail诱导凋亡的实验并sw-480皮下荷瘤鼠模型的建立及活体示踪的预试验，为进一步活体下BMSC的示踪、定向归巢及Trail过表达治疗直肠癌的活体研究奠定基础。方法：分离培养大鼠BMSC，并进行形态... 详细信息

目的：探索BMSC、sw-480的稳定体外培养及Trail诱导凋亡的实验并sw-480皮下荷瘤鼠模型的建立及活体示踪的预试验，为进一步活体下BMSC的示踪、定向归巢及Trail过表达治疗直肠癌的活体研究奠定基础。方法：分离培养大鼠BMSC，并进行形态学及特异性染色细胞鉴定及SPIO标记BMSC并转染Trail基因的活性测定;直肠癌sw-480细胞的培养及传代;TRAIL诱导BMSCs及sw-480细胞的凋亡实验，并进行CCK-8细胞活力及生长曲线的测定、流式细胞仪细胞凋亡测定;一定浓度癌细胞悬浊液皮下注射裸鼠成瘤并TRAIL-BMSCs细胞液注射荷瘤鼠观察肿瘤生长情况，并MRI活体示踪SPIO-BMSCs的定向迁移及归巢情况。结果：利用全骨髓培养法可以获得稳定的BMSC系，培养到第三代细胞纯度较高;SPIO对BMSC标记率几乎达到99%并且标记后其活性没有受到抑制，并转染Trail基因后BMSCs活性未受到影响;TRAIL对sw-480有明显的诱导凋亡的作用，对BMSC没有明显的诱导凋亡作用（实验组及对照组的细胞活性无明显差异，P>0.05）;利用一定浓度的sw-480细胞悬浊液注射于裸鼠腹股沟皮下可以的到稳定的荷瘤鼠模型，TRAIL-BMSCs细胞液注射荷瘤鼠后实验组荷瘤鼠肿瘤组织生长受到抑制;MRI荷瘤鼠示踪显示Spio-BMSCs可以定向归巢到癌组织。结论：全骨髓培养法可以得到稳定并且纯度高的BMSC为后续的实验及临床应用提供充足的BMSC;TRAIL对BMSC无诱导凋亡的作用，而对sw-480有明显的诱导凋亡的特性并且有浓度呈正相关;一定浓度sw-480细胞液注射于裸鼠皮下可以得到稳定荷瘤鼠模型，MRI活体示踪荷瘤鼠显示SPIO-BMSCs定向归巢到癌组织，为进一步实验奠定了基础。

关键词： BMSC TRAIL sw-480 荷瘤鼠

二脂酰甘油酰基转移酶及脂肪酰胺水解酶在结直肠癌中的表达及临床意义

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二脂酰甘油酰基转移酶及脂肪酰胺水解酶在结直肠癌中的表达及临床...

作者：邓佳第三军医大学

学位级别：硕士

结直肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率居第四位，并且随着我国饮食结构和环境的改变，其发病率逐年上升。恶性增殖与侵袭能力是影响结直肠癌预后的最主要因素之一。所以研究增殖与侵袭的相关机制对于改善结直肠癌患者的预后具有... 详细信息

结直肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率居第四位，并且随着我国饮食结构和环境的改变，其发病率逐年上升。恶性增殖与侵袭能力是影响结直肠癌预后的最主要因素之一。所以研究增殖与侵袭的相关机制对于改善结直肠癌患者的预后具有重要的临床意义。脂肪合成代谢的增加已证实是许多恶性肿瘤的共同现象，包括乳腺癌、前列腺癌和结直肠癌等[1]。脂滴作为脂代谢中重要的细胞器，其数量被发现在包括结直肠癌在内的多种肿瘤细胞中明显增多，并与肿瘤的侵袭能力等多种生物学行为有关[2]。二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT1)是脂滴合成代谢中的关键酶，其在结直肠癌中的表达及生物学行为尚未见报道。恶性肿瘤细胞中脂肪代谢的改变包括多种酶活性的调整，花生四烯酰乙醇胺(Anandamide, AEA)和花生四烯酰甘油(2-Arachidonoylglycerol，2-AG)是抑制恶性肿瘤增殖的两种脂质，其灭活主要通过脂肪酰胺水解酶(Fatty acid amide hydrolase，FAAH)[3]。FAAH在结直肠癌中的表达尚未见报道。本课题拟通过研究脂肪代谢中两种影响肿瘤细胞恶性增殖与侵袭的酶在结直肠癌中的表达，分析其与临床病理学参数的关系，为进一步研究恶性肿瘤的治疗提供方向。目的：检测DGAT1和FAAH在结直肠癌及正常肠粘膜中的表达，探讨其临床意义，并研究抑制DGAT1酶活性对结直肠癌细胞迁移侵袭能力的影响。方法：采用结直肠癌及对应正常肠粘膜病理组织标本及结直肠癌细胞株(HT-29、CaCo2、sw-480、sw-620、HCT-116和LoVo)为研究对象。分三部分进行：第一部分探讨结肠癌细胞株及组织中DGAT1蛋白表达及与各项临床病理参数的关系：采用荧光定量PCR和免疫印迹法检测了HT-29、CaCo2、sw-480、sw-620、HCT-116和LoVo中DGAT1mRNA和蛋白的表达;免疫组织化学染色检测结直肠癌患者103例、相应正常肠粘膜38例中DGAT蛋白表达，分析其与临床病理学参数的关系。第二部分对结直肠癌细胞株HT-29、HCT-116、sw-480施加DGAT1抑制剂，transwell实验观察其迁移侵袭能力的变化。第三部分探讨结肠癌组织中FAAH蛋白表达及与各项临床病理参数的关系：采用组织芯片技术结合免疫组织化学染色检测结直肠癌患者169例、相应正常肠粘膜38例中FAAH蛋白表达，分析其与临床病理学参数的关系。结果 1. DGAT1在高侵袭性结肠癌细胞株HT29中高表达，在低侵袭性细胞株CaCo2、sw-480中低表达;DGAT1在103例结直肠癌组织中的阳性表达率显著高于正常肠粘膜(77.7%vs.44.7%，Psw-480细胞的迁移能力和HT29的侵袭能力不同程度受到抑制，其中高表达DGAT1细胞株HT-29抑制最显著。 3. FAAH在结直肠癌组织中的表达低于正常肠粘膜，169例结直肠癌组织中FAAH的阳性表达率显著低于正常肠粘膜(56.8%vs.97.4%，P<0.001)，并与肿瘤的分化程度密切相关(P<0.01)。结论 1、DGAT1在结直肠癌及正常肠粘膜中表达存在差异性，且高侵袭性细胞株HT29中高表达，提示DGAT1在结直肠的发生发展及侵袭中可能发挥重要作用。 2、DGAT1抑制剂能抑制多种结直肠癌细胞株的迁移侵袭能力，提示DGAT1促进结直肠癌的迁移侵袭。 3、FAAH在结直肠癌及正常肠粘膜中表达存在差异性，并与肿瘤的分化程度密切相关，可能在结直肠癌的发生发展中发挥重要作用。

关键词：结直肠癌脂代谢二脂酰甘油酰基转移酶脂肪酰胺水解酶 HT-29 HCT-116 sw-480