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Bacterial Diversity of Anshun sufu, A Traditional Fermented Tofu in Guizhou Province of China

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Transactions of Tianjin University 2019年第5期25卷 497-503页

作者： Shanna Liu Jianjun Qiao School of Environmental Science and Engineering Tianjin UniversityTianjin 300350China College of Food Science and Bioengineering Tianjin Agricultural UniversityTianjin 300384China School of Chemical Engineering and Technology Tianjin UniversityTianjin 300350China

Samples of sufu, a traditional food product made by fermenting soybeans, were collected in the city of Anshun in Southwest China and their bacterial diversity was investigated. Nine samples were divided into groups A C, according to the markets in which they were collected, and the samples were subjected to pyrosequencing of the 16S rRNA V3 V4 regions for evaluation of the bacterial community. A total of 342 operational taxonomic units (OTUs) were determined. One of the samples (B2) included as many as 286 OTUs, and it also displayed the greatest bacterial richness. The most abundant bacterial diversity was shown in group B. F irmicutes was the dominant phylum in groups A and B, while P roteobacteria was the dominant phylum in group C. L actobacillus was the prevailing genus in group A, T etragenococcus in group B, and E mpedobacter in group C. The bacterial composition of sufu depends, to a large degree, on the manufacturer. The obtained results showed regional di erences in the bacterial community patterns of sufu products, which could contribute to a better understanding of the fermentation and ripening bioprocesses of sufu.

关键词： sufu Bacteria Biodiversity Sequencing

sufu调控HIPPO通路影响乳腺癌细胞生物学功能

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SUFU调控HIPPO通路影响乳腺癌细胞生物学功能

作者：方堃大连医科大学

学位级别：硕士

目的:目前乳腺癌仍是全球女性发病率最高的癌症,其发生发展与HIPPO通路密切相关,但乳腺癌中HIPPO通路的调控机制有待于深入研究。LATS1作为HIPPO通路中核心成员通过磷酸化YAP/TAZ,抑制下游靶基因转录进而发挥抑癌作用。Suppressor of fu... 详细信息

目的:目前乳腺癌仍是全球女性发病率最高的癌症,其发生发展与HIPPO通路密切相关,但乳腺癌中HIPPO通路的调控机制有待于深入研究。LATS1作为HIPPO通路中核心成员通过磷酸化YAP/TAZ,抑制下游靶基因转录进而发挥抑癌作用。Suppressor of fused homolog(sufu)是Hedgehog(Hh)通路的重要组成部分,通过参与细胞内多种信号通路的调控进而控制肿瘤的发展进程。已报道sufu在体外抑制乳腺癌细胞生长,但其作用机制不详。本研究通过探讨sufu调控HIPPO通路的分子机制,阐明sufu调控乳腺癌生长的作用机理,从而揭示了乳腺癌中HIPPO通路调控的新机制,为深入研究HIPPO通路在乳腺癌进展中的作用提供新的依据。方法:1.分析TCGA公共数据库中乳腺癌患者基因表达谱,比较低表达sufu和高表达sufu的乳腺癌患者生存率间差异。2.慢病毒构建稳定敲低、稳定过表达sufu的乳腺癌细胞株。包括:HCC1954、MDA-MB-231、MCF-7、T47D、SK-BR-3,免疫印迹验证其敲低、过表达效率。3.CCK-8检测乳腺癌细胞敲低、过表达sufu后生长活力的变化。4.建立荷瘤小鼠模型:裸鼠皮下接种对照组及敲低sufu组MDA-MB-231细胞,观察并记录肿瘤生长情况。H&E染色、免疫组化实验检测敲低sufu对肿瘤生长及相关蛋白表达的影响。5.转录组测序技术对稳定敲低sufu和对照组HCC1954细胞以及稳定过表达sufu和对照组SK-BR-3细胞进行全基因组测序,分别比较两组的信号通路和基因表达差异,并采用免疫印迹实验加以验证。6.蛋白免疫印迹检测sufu及HIPPO通路相关蛋白表达。7.Luciferase荧光素酶报告基因实验检测sufu对YAP转录活性影响。8.免疫荧光、核质分离实验检测sufu对YAP出入核影响。9.免疫共沉淀检测sufu与HIPPO通路关键组分蛋白的相互作用。10.免疫荧光检测sufu与LATS1共定位。11.分子克隆实验构建sufu野生型和区段缺失突变体质粒。结果:1.sufu与乳腺癌患者生存率相关分析根据TCGA公共数据库生物信息学结果显示,sufu表达高低与乳腺癌患者生存率高低有关,sufu低表达乳腺癌患者的生存率低于高表达的乳腺癌患者(p=0.0329),且在5年生存期时差异最显著。2.细胞模型构建通过对乳腺癌细胞中sufu蛋白表达水平的检测,构建HCC1954、MDA-MB-231、MCF-7、T47D敲低sufu以及MDA-MB-231、HCC1954、MCF-7、SK-BR-3过表达sufu的乳腺癌细胞模型,免疫印迹验证细胞中sufu敲低、过表达效率。3.sufu影响乳腺癌细胞的生长活力3.1过表达sufu,抑制MDA-MB-231、HCC1954、MCF-7、SK-BR-3细胞生长活力。3.2敲低sufu,促进MDA-MB-231、HCC1954、MCF-7细胞生长活力。4.体内实验检测sufu对肿瘤生长影响裸鼠荷瘤模型显示:敲低sufu显著促进肿瘤生长,经H&E染色、IHC检测,敲低sufu显著上调Ki67表达。5.sufu抑制乳腺癌细胞生长活力的分子机制5.1 RNA seq表达谱测序结果显示sufu与HIPPO通路密切相关,且敲低sufu显著上调YAP下游基因AXL、ACSL4,过表达sufu后显著下调YAP下游基因AXL、ACSL4,并通过免疫印迹实验得到验证。5.2敲低sufu促进乳腺癌细胞YAP转录活性,过表达sufu后抑制YAP转录活性。5.3敲低sufu促进乳腺癌细胞YAP表达,促进YAP入核,过表达sufu后抑制乳腺癌细胞YAP表达,抑制YAP入核。5.4敲低sufu下调乳腺癌细胞P-LATS1/LATS1的比值,过表达sufu后上调乳腺癌细胞P-LATS1/LATS1的比值。5.5敲低LATS1促进乳腺癌细胞AXL和ACSL4的表达,过表达sufu后抑制AXL和ACSL4的表达,但在敲低LATS1细胞中再过表达sufu后,sufu不能抑制AXL和ACSL4的上调。5.6 sufu与LATS1存在内源及外源的相互作用HEK293T细胞中过表达V5-sufu、Myc-LATS1,免疫共沉淀结果显示sufu与LATS1存在外源相互作用。在HCC1806细胞中检测到sufu与LATS1存在内源相互作用。5.7 sufu与LATS1共定位于细胞质MDA-MB-231和MCF-7细胞中外源过表达Flag-sufu,Myc-LATS1,激光共聚焦结果显示sufu与LATS1共定位于细胞质。5.8缺失174-385氨基酸区段,sufu不能与LATS1相互作用,不能调控YAP出入核及下游靶基因转录。5.9 sufu对乳腺癌细胞生长活力的调控依赖于YAP。结论:1.sufu低表达乳腺癌患者的生存率低于高表达的乳腺癌患者。2.sufu抑制乳腺癌细胞生长活力

关键词： sufu 乳腺癌 HIPPO YAP 细胞生长

Expressions of Beta-Catenin,sufu and VEGFR-2 Proteins in Medulloblastoma

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Chinese Journal of Cancer Research 2007年第4期19卷 299-303页

作者：张雄张红梅李昱米粲 Department of Pathology Chongqing Medical University

Objective： to investigate the expressions of beta-catenin, sufu and VEGFR-2 proteins in medulloblastoma. Methods： Immunohistochemical staining with SP method was conducted to determine the expressions of beta-catenin, sufu and VEGFR-2 in 33 cases of medulloblastoma and 10 normal cerebellar tissues. Results： the abnormal expression rates of beta-catenin and VEGFR-2 in medulloblastoma were significantly higher than that in normal tissue. While the positive expression of sufu gene in medulloblastoma was significantly lower than that in 10 normal cerebellar tissues, A significant negative correlation was found between beta-catenin and sufu proteins and a positive correlation between beta-catenin and VEGFR-2 was found in medulloblastoma. Conclusion： Beta-catenin, VEGFR-2 and sufu have important effects on the pathogenesis and development of medulloblastoma.

关键词： Beta-cateuln VEGFR-2 sufu Medulloblastoma

sufu抑制AKT磷酸化影响结直肠癌细胞糖酵解

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SUFU抑制AKT磷酸化影响结直肠癌细胞糖酵解

作者：樊佳辉中南大学

学位级别：硕士

目的:结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)发病机制复杂且近年来发病率逐步上升。本研究旨在探讨融合抑制因子(Suppressor of Fused,sufu)调控CRC细胞糖酵解的机制,为CRC治疗提供新方向。方法:(1)生物信息学及实时荧光定量PCR(Quantitative... 详细信息

目的:结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)发病机制复杂且近年来发病率逐步上升。本研究旨在探讨融合抑制因子(Suppressor of Fused,sufu)调控CRC细胞糖酵解的机制,为CRC治疗提供新方向。方法:(1)生物信息学及实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q PCR),免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)对sufu在CRC中的表达进行分析;(2)蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)及q PCR检测糖酵解相关蛋白分子的表达;(3)液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析sufu对CRC细胞能量代谢的影响;(4)AKT激动剂SC79处理探究sufu影响CRC细胞糖酵解的机制;(5)生物信息学、肿瘤球形成实验及WB分析sufu与干性及免疫细胞的相关性。结果:(1)sufu相比于癌旁组织在CRC中表达更低;(2)过表达sufu抑制CRC细胞糖酵解相关蛋白HK2、PKM、LDHA表达,敲低sufu促进HK2、PKM、LDHA蛋白表达。sufu与细胞对低氧环境的适应性应答呈负相关,sufu高表达抑制低氧诱导因子HIF1α蛋白表达,但敲低sufu对低氧诱导因子HIF1α并没有影响;(3)sufu下调HCT116细胞糖酵解途径中多种代谢物水平,但促进2-磷酸甘油酸、3-磷酸甘油酸、果糖-1,6-二磷酸合成;(4)SC79证实sufu可能通过抑制AKT磷酸化调控糖酵解并下调HK2、PKM、LDHA表达;(5)过表达sufu后,干性相关蛋白SOX9、CD133、LGR5表达下调,敲低sufu后干性相关蛋白SOX9、CD133、LGR5表达上调,CD44在过表达及敲低sufu后均无明显变化;(6)过表达sufu抑制HCT116细胞的成球能力,敲低sufu促进SW480细胞成球能力;过表达sufu后干细胞样CRC细胞中PKM,LDHA蛋白表达下调,HK2无明显变化。敲低sufu后干细胞样CRC细胞中PKM,LDHA蛋白表达上调。(7)在CRC组织中sufu表达与免疫细胞数量具有正相关性。结论:相比于癌旁组织,sufu在CRC中表达更低,sufu可能通过调控AKT活化下调CRC细胞糖酵解途径关键蛋白的水平。sufu抑制CRC细胞干性。图35幅,表6个,参考文献67篇

关键词： sufu 糖酵解结直肠癌

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sufu调控乳腺癌细胞铁死亡敏感性研究

SUFU调控乳腺癌细胞铁死亡敏感性研究

作者：熊志鹏大连医科大学

学位级别：硕士

目的:乳腺癌是全球女性发病率最高的肿瘤,其每年的新增死亡率也在所有肿瘤中一直位居前列,目前化疗仍是治疗乳腺癌最主要的方法,然而肿瘤容易对化疗药物产生耐药性,从而降低化疗效果,因此需要寻找新的疗法来克服乳腺癌细胞耐药这一难题... 详细信息

目的:乳腺癌是全球女性发病率最高的肿瘤,其每年的新增死亡率也在所有肿瘤中一直位居前列,目前化疗仍是治疗乳腺癌最主要的方法,然而肿瘤容易对化疗药物产生耐药性,从而降低化疗效果,因此需要寻找新的疗法来克服乳腺癌细胞耐药这一难题。铁死亡作为一种新发现的细胞死亡方式,已有多项临床前研究的证据表明,诱导肿瘤细胞对铁死亡敏感性增加,可以降低乳腺癌对多种化疗药物产生耐药性,因而诱导细胞铁死亡可能是一种有效的乳腺癌治疗策略。近期研究表明,Hippo通路关键组分YAP/TAZ通过细胞密度依赖的方式调控细胞铁死亡。sufu是SHH信号通路Fu的抑制因子,SHH通路主要参与神经发育,其与铁死亡的关系以及能否调控铁死亡目前仍未有报导。本研究探讨了SHH通路抑制因子sufu在乳腺癌细胞中对RSL3诱导的铁死亡敏感性的分子机制,并筛选出能显著下调sufu的表达的临床化疗药物长春新碱,在体内和体外增强乳腺癌细胞对RSL3的敏感性,为铁死亡药物在化疗中的应用提供了参考。方法:1.建立RSL3诱导的乳腺癌细胞铁死亡模型。2.构建乳腺癌细胞稳定过表达/敲低sufu细胞系。3.在乳腺癌细胞sufu稳定过表达/敲低细胞系中,检测sufu对RSL3诱导的乳腺癌细胞铁死亡敏感性的影响。4.在sufu过表达/敲低细胞系中,分别过表达/敲低ACSL4,检测ACSL4在sufu对RSL3诱导的乳腺癌细胞铁死亡敏感性中的作用。5.在sufu过表达/敲低细胞系中,分别过表达/敲低YAP,检测YAP在sufu对RSL3诱导的乳腺癌细胞铁死亡敏感性中的作用。6.筛选能够降低sufu蛋白表达的化疗药物。并在体内和体外与铁死亡诱导剂RSL3联用,验证对肿瘤的抑制效果。结果:1.构建乳腺癌细胞铁死亡模型1.1药物转录组学分析SHH通路与铁死亡诱导剂的相关性。结果显示,铁死亡诱导剂RSL3与sufu有最显著的相关性。1.2 cck8检测RSL3对不同乳腺癌细胞的半抑制浓度IC。1.3 SYTOX Green检测结果证明RSL3诱导乳腺癌细胞死亡。1.4 cck8和脂质过氧化荧光探针检测结果证明RSL3诱导乳腺癌细胞发生铁死亡。2.构建sufu稳定过表达/敲低细胞western blotting检测结果证明,在乳腺癌细胞HCC1954、MDA-MB-231和SK-BR-3中成功构建了sufu稳定过表达细胞系;在乳腺癌细胞MCF-7和T47D中成功构建了sufu稳定敲低细胞系。3.sufu调控RSL3诱导的乳腺癌细胞铁死亡敏感性cck8、GSH/GSSG Assay和脂质过氧化荧光探针检测结果证明,sufu能够降低乳腺癌细胞对RSL3诱导的铁死亡的敏感性。4.sufu通过调控ACSL4活性影响乳腺癌细胞铁死亡敏感性cck8和GSH/GSSG Assay检测证明,ACSL4能够增强乳腺癌细胞对RSL3诱导的铁死亡的敏感性。5.sufu通过调控YAP活性调控乳腺癌细胞铁死亡敏感性cck8和GSH/GSSG Assay检测证明,YAP能够增强乳腺癌细胞对RSL3诱导的铁死亡的敏感性。6.筛选靶向sufu的化疗药物Western blotting检测结果证明,长春新碱能够显著降低sufu蛋白的表达。7.VCR与RSL3联用可在体内和体外抑制肿瘤生长。结论:1.RSL3诱导乳腺癌细胞发生铁死亡。2.sufu抑制乳腺癌细胞对RSL3诱导的铁死亡敏感性。3.sufu促进YAP的磷酸化,使YAP入核减少,降低YAP下游靶基因ACSL4的表达,细胞对铁死亡诱导剂RSL3耐受,不容易发生铁死亡。4.VCR降低sufu蛋白的表达。5.VCR与RSL3联用可以在体外和体内增强乳腺癌细胞对RSL3的敏感性,显著抑制肿瘤发展。

关键词： sufu 乳腺癌 YAP ACSL4 铁死亡

丹参含药血清对肝星状细胞Hh通路中sufu和DYRK2表达的影响

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中国中药杂志 2015年第22期40卷 4469-4474页

作者：韩仕庆王海兰冯藜枥曹文富重庆医科大学中医药学院重庆400016 重庆医科大学中医药研究室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院中西医结合科重庆400016

观察丹参含药血清对瘦素刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂(Su Fu)和双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2(DYRK2)表达的影响。清洁级SD大鼠(60只)给予丹参水煎剂、生理盐水、秋水仙碱,连续灌胃1... 详细信息

观察丹参含药血清对瘦素刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂(Su Fu)和双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2(DYRK2)表达的影响。清洁级SD大鼠(60只)给予丹参水煎剂、生理盐水、秋水仙碱,连续灌胃10 d制备丹参含药血清。体外培养的肝星状细胞(HSCs),除空白对照组外,其余各组均予瘦素100μg·L-1刺激24h,各组含药血清干预后置于37℃,5%CO2孵箱中培养。24 h后收集细胞,采用MTT法检测HSCs的增殖,分别采用RT-PCR和Western blot法测定Su Fu和DYRK2的表达情况。用瘦素刺激大鼠HSCs后,DYRK2 mRNA和蛋白表达均明显升高(与空白组比较P<0.01),Su Fu mRNA和蛋白表达均明显降低(与空白组比较P<0.01或P<0.05)。抑制剂组(cyclopamine)、丹参含药血清、秋水仙碱组干预后,DYRK2 mRNA和蛋白表达明显降低(与模型组比较P<0.01),Su Fu mRNA蛋白表达均明显升高(与模型组比较P<0.01)。在模型组的基础上加入Hh通路激动剂(purmorphamine)充分活化后,DYRK2 mRNA和蛋白表达均明显升高(与模型组比较P<0.01),Su Fu mRNA和蛋白表达均明显降低(与模型组比较P<0.01)。用丹参含药血清干预激动剂组后,DYRK2 mRNA和蛋白表达明显降低(与模型组比较P<0.01),Su Fu mRNA和蛋白表达均明显升高(与模型组比较P<0.01)。丹参含药血清可通过干预瘦素诱导的HSCs中Su Fu和DYRK2的表达,进而影响HSCs的活化增殖。

关键词：丹参 HSCs 瘦素 sufu DYRK2 肝纤维化

miR-10b-5p通过靶向sufu介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性

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肿瘤药学 2022年第6期12卷 752-758页

作者：覃波陆录赵涛利川市人民医院肿瘤科湖北利川445400

目的探讨miR-10b-5p在乳腺癌细胞放疗敏感性中的作用及相关机制。方法采用qPCR和West‐ern blotting检测正常乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231中miR-10b-5p mRNA、sufu mRNA和蛋白的表达。在MDA-MB-231细胞中转染miR-10b-5p inhibitor对miR-10b-5p进行敲减,6 Gy^(60)Coγ-射线照射2 h,分别采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡水平;双荧光素酶报告实验验证靶基因sufu,回补实验验证miR-10b-5p是否通过靶向sufu介导乳腺癌细胞对放疗的敏感性。结果3种乳腺癌细胞系中miR-10b-5p的表达均显著高于正常乳腺细胞MCF-10A(Psufu 3'UTR的荧光强度(Psufu 3'UTR的荧光强度无明显影响(P>0.05)。此外,miR-10b-5p inhibitor组sufu蛋白表达水平显著高于miR-NC组(Psufu#2组细胞增殖水平明显回升,且高于miR-10b-5p inhibitor+si-NC组(Psufu相关。

关键词： miR-10b-5p sufu 乳腺癌放射治疗

基于生物信息学分析sufu基因在胃癌组织中的表达及意义

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河北医学 2023年第4期29卷 551-555页

作者：杨波何磊付田丽程玉王雪梅刘娟河北省承德市中心医院河北承德067000 承德医学院病理教研室河北承德067000

目的:多种数据库结合Real-time PCR实验分析sufu基因在胃癌组织中的表达情况,并探讨其表达差异的临床意义。方法:利用Oncomine数据库分析sufu基因在胃癌中的表达情况,TGCA数据库在线工具UALCAN分析sufu基因在正常胃组织和胃癌组织中表... 详细信息

目的:多种数据库结合Real-time PCR实验分析sufu基因在胃癌组织中的表达情况,并探讨其表达差异的临床意义。方法:利用Oncomine数据库分析sufu基因在胃癌中的表达情况,TGCA数据库在线工具UALCAN分析sufu基因在正常胃组织和胃癌组织中表达差异及与胃癌临床病理特征的关系,Kaplan-Meier Plotter数据库分析sufu基因表达与胃癌患者预后的相关性,并收集临床样本,通过PCR实验进行验证。结果:对Oncomine数据库中12项关于胃癌的研究进行Meta分析,sufu差异表达基因中位数排名为1560.0,P=0.002,其中5项研究显示sufu在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。UALCAN同样显示sufu在胃癌组织中高表达,并且sufu高表达与患者的年龄及肿瘤分化程度相关:低龄组sufu表达水平高于高龄组;低分化组中sufu的表达水平高于高分化组及中分化组(Psufu表达水平与胃癌患者预后显著相关(Psufu高表达患者总生存率低于低表达患者。PCR实验也验证sufu基因在胃癌组织中高表达。结论:sufu在胃癌组织高表达,且与胃癌患者不良预后相关。

关键词：胃癌生物信息学 sufu 信号通路

酵母双杂交筛选抑癌基因sufu相互作用蛋白

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武汉大学学报（理学版） 2013年第4期59卷 351-356页

作者：李勇黄璇杨静张君严汪玲芳罗时文南昌大学第一附属医院医学研究中心江西南昌330006

以Hedgehog信号通路关键负调控因子Suppressor of Fused(sufu)蛋白作为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统从人均一化cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白质,共获得160个阳性克隆,包括Hedgehog信号通路蛋白Gli3和一些肿瘤蛋白如乙醛脱氢酶1(ALDH... 详细信息

以Hedgehog信号通路关键负调控因子Suppressor of Fused(sufu)蛋白作为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统从人均一化cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白质,共获得160个阳性克隆,包括Hedgehog信号通路蛋白Gli3和一些肿瘤蛋白如乙醛脱氢酶1(ALDH1A1)、激酶、转运蛋白、转录因子等.通过免疫共沉淀和免疫细胞化学实验证实,sufu与ALDH1A1发生相互作用,后者可能参与Hedgehog信号通路的调控.

关键词： Hedgehog信号通路 sufu 酵母双杂交肿瘤蛋白