检索结果-南通市图书馆

生物工程学报 2017年第6期33卷 986-994页

作者：张运峰唐山师范学院生命科学系河北唐山063000

stk1基因是玉米大斑病菌调控分生孢子发育、渗透胁迫调节和致病性的重要MAPK基因。本文首先构建了含有增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)的毕赤酵母GSS115(Pichia pastoris GS115)表达载体p PIC3.5K-egfp,再以玉米大班病菌模式菌株01-23的菌... 详细信息

stk1基因是玉米大斑病菌调控分生孢子发育、渗透胁迫调节和致病性的重要MAPK基因。本文首先构建了含有增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)的毕赤酵母GSS115(Pichia pastoris GS115)表达载体p PIC3.5K-egfp,再以玉米大班病菌模式菌株01-23的菌丝c DNA为模板,PCR扩增stk1基因,克隆到p PIC3.5K-egfp,构建了stk1-egfp融合基因的GS115表达载体p PIC3.5K-stk1-egfp。利用电击转化法将该融合基因表达载体转化到GS115感受态细胞内,利用MD培养基筛选、PCR鉴定,获得了stk1-egfp融合基因的毕赤酵母转化子。通过RT-PCR和荧光观察,发现stk1基因和egfp基因均可以高效稳定地表达。另外,在试验中我们还发现,在stk1基因起始密码子前加入Kozak序列可以使stk1-egfp融合基因的表达强度增强4.8倍。以上研究结果为stk1基因表达蛋白的亚细胞功能定位和抗体制备奠定了基础。

关键词：玉米大斑病菌 stk1-egfp融合基因毕赤酵母基因表达

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