检索结果-南通市图书馆

Circ＿0012152/miR-326/st6gal1调控轴介导急性髓系白血病干细胞生物学行为的研究

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Circ＿0012152/miR-326/ST6GAL1调控轴介导急性髓系白血病干细胞...

作者：黄彤大连医科大学

学位级别：硕士

目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)在成人急性白血病中较为常见,患者的预后较差且五年生存率较低。同时,白血病干细胞(leukemia stem cell,LSCs)是AML复发的主要原因之一。作为蛋白质翻译后修饰的重要阶段,研究发现糖基... 详细信息

目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)在成人急性白血病中较为常见,患者的预后较差且五年生存率较低。同时,白血病干细胞(leukemia stem cell,LSCs)是AML复发的主要原因之一。作为蛋白质翻译后修饰的重要阶段,研究发现糖基化在多种癌症中异常表达。因此,本次研究的目的是探索AML-LSCs中唾液酸糖基化修饰的机制,从而寻找新的潜在的白血病诊断以及治疗靶点。方法:1.通过白血病干细胞分离提取试剂盒分离CD34CD38干细胞(LSCs)和非干细胞(non-LSCs),通过q RT-PCR对LSCs和non-LSCs的唾液酸糖基转移酶基因进行检测分析,其中选择st6gal1作为研究对象。2.设计sh st6gal1质粒并通过q RT-PCR、Western Blot验证敲低成功。利用CCK-8、免疫荧光以及甲基纤维素细胞克隆检测细胞增殖。利用流式细胞术检测细胞凋亡。利用皮下成瘤实验检测体内细胞增殖,另外通过免疫组化进一步验证。3.寻找有关AML的circ RNA基因表达数据集,使用R软件筛选差异circ RNA,选择has＿circ＿0012152(circ＿0012152)作为研究对象。通过circ Primer软件验证设计的引物,使用放线菌素D实验研究circ RNA的稳定性,然后利用q RT-PCR检测LSCs和non-LSCs中circ＿0012152的表达水平。4.利用生信网站预测st6gal1的上游micro RNA和circ＿0012152靶向结合的micro RNA,利用R软件做韦恩图取交集确定研究对象mi R-326。分别采用双荧光素酶报告基因实验、WB、q RT-PCR以及免疫共沉淀(RIP)等实验对潜在位点进行验证。5.共同调控circ＿0012152、mi R-326在LSCs中的表达水平,利用q RT-PCR、WB方法检测st6gal1表达情况,利用CCK-8、甲基纤维素细胞克隆形成实验、免疫荧光、流式细胞术对细胞的增殖、凋亡以及耐药进行检测。结果:1.分离提取了AML-LSCs,并且st6gal1在LSCs中表达明显高于non-LSCs。2.敲低st6gal1后,LSCs增殖能力下降,凋亡增加,耐药性降低。另外,体内实验也证实低表达st6gal1组体内增殖降低,通过IHC验证了这一结果。3.根据人circ RNA基因芯片GSE94591和GSE116617分析结果,共有1个上调基因(circ＿0012152)和11个下调基因。经放线菌素D处理后,circ＿0012152表达量较线性RNA稳定。另外,circ＿0012152在LSCs高表达。4.生信网站预测确定目标mi RNA为mi R-326,且在LSCs和non-LSCs中表达存在差异。转染mi R-326 mimic、mi R-NC、mi R-326 inhibitor以及inhibitor-NC,结果显示mi R-326 mimic组st6gal1表达降低,低表达组st6gal1表达升高。另外,通过双荧光素酶报告基因实验、q RT-PCR、WB以及免疫共沉淀实验验证了circ＿0012152、mi R-326、st6gal1的靶向效应。5.敲低circ＿0012152后,st6gal1表达在分子水平和蛋白水平均出现降低。通过共转染si-circ＿0012152和mi R-326 inhibitor,结果显示mi R-326 inhibitor可以部分回复si-circ＿0012152对st6gal1的抑制作用。通过CCK-8、甲基纤维素细胞克隆、免疫荧光、细胞凋亡实验说明circ＿0012152通过竞争性结合mi R-326调节st6gal1表达进而影响LSCs的增殖、凋亡和耐药。结论:st6gal1在AML-LSCs中呈高表达,且与AML-LSCs的增殖、耐药以及凋亡相关。Circ＿0012152与mi R-326竞争性海绵吸附调节st6gal1的表达,进而影响AML-LSCs的功能,从而对AML的进展起到一定调控作用。Circ＿0012152/mi R-326/st6gal1轴可能作为白血病诊断以及治疗的一个潜在靶点,具有一定的价值。

关键词：急性髓系白血病干细胞 has_circ_0012152 st6gal1 miR-326

st6gal1 inhibits the hepatocellular carcinoma intrahepatic metastasis

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

ST6GAL1 inhibits the hepatocellular carcinoma intrahepatic m...

st6gal1在IgA肾病中的作用及其分子机制的研究

2020年糖科学青年科技论坛

作者：邹霞陆吉顺张延上海交通大学系统生物医学研究院教育部重点实验室

The poor prognosis of hepatocellular carcinoma(HCC) is mainly due to its high rate of ***,elucidation of the molecular mechanisms underlying HCC metastasis is of great significance to improve the survival rate of HCC *** is an important post-translational modification,which is closely associated with the tumor *** glycosylation including the altered sialylation resulting from the aberrant expression of sialyltransferase like β-galactoside α2,6 sialyltranferase 1(st6 gal1) have long been considered as an important feature of cancer ***,there is limited information on the molecular details of how st6 gal1 catalyzed glycan structures affect their carrier proteins during tumor *** this study,we systematically investigated the role of st6 gal1 in HCC metastasis and found that st6 gal1 can inhibit the metastasis of HCC in vitro and in vivo using lectin microarray,glycogene microarray and mouse ***,about 300 potential substrate membrane proteins of st6 gal1 were identified by metabolic labeling and MS analysis,and some of them were verified in cell models and clinical *** together,this study provides novel insight into the mechanistic roles of st6 gal1 in HCC progression.

关键词： st6gal1 Sialylation Metastasis HCC

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

ST6GAL1在IgA肾病中的作用及其分子机制的研究

作者：余胡燕天津医科大学

学位级别：硕士

研究背景IgA肾病是世界上最常见的原发性肾小球肾炎,在诊断后的10年内,将有10-20%的患者发展为终末期肾脏疾病（End stage kidney disease,ESKD）。研究认为IgA肾病是由循环中异常的IgA1分子及其复合物在肾小球系膜区沉积,诱发补体激活... 详细信息

研究背景IgA肾病是世界上最常见的原发性肾小球肾炎,在诊断后的10年内,将有10-20%的患者发展为终末期肾脏疾病（End stage kidney disease,ESKD）。研究认为IgA肾病是由循环中异常的IgA1分子及其复合物在肾小球系膜区沉积,诱发补体激活、系膜细胞增生和炎症反应,从而导致肾脏损伤的一种疾病,其临床病理表现多样,进展速度不一。目前IgA肾病患者肾衰的风险仍然很高,迫切需要新的干预方法来延缓肾功能的进展。β-半乳糖苷α-2,6-唾液酸转移酶1（st6 gal Sialytransferase 1,st6gal1）是目前研究最为广泛的唾液酸转移酶之一,它具有介导α-2,6-连接的唾液酸残基转移至末端半乳糖的作用。先前的全基因组关联研究（Genome wide association studies,GWASs）结果显示st6gal1基因的危险型等位基因与IgA肾病的易感性有关,进一步的分析表明,IgA肾病患者肾功能正常（eGFR为90ml/min/1.73 m）组中st6gal1的m RNA表达水平高于轻度肾功能不全（eGFR为60-90ml/min/1.73 m）组。本课题组先前的研究结果表明外周血中st6gal1在IgA肾病中的表达水平升高。但关于st6gal1在IgA肾病患者中表达水平的差异是否影响肾脏结局和相关作用机制仍不清楚。研究目的1.分析IgA肾病患者外周血中st6gal1的表达水平和肾脏结局的相关性;2.探究st6gal1在IgA肾病中作用的相关分子机制。研究方法本研究共纳入180名IgA肾病患者（平均随访时间为17个月）和50名健康成人,收集患者外周血的实验指标及肾脏病理学数据。肾脏结局定义为eGFR的月均下降速率和（或）蛋白尿缓解。通过ELISA法检测患者入院时外周血中st6gal1的表达水平。通过蛋白G亲和层析柱、SNA凝集素琼脂糖柱（Sambucus nigra lectin agarose column,SNA凝集素琼脂糖柱）和Jacalin琼脂糖柱提取IgA肾病患者外周血中唾液酸化的IgG（SA-IgG）,非唾液酸化的IgG（NSA-IgG）,唾液酸化的IgG-IgA复合物（SA-IgG-IgA）和非唾液酸化的IgG-IgA复合物（NSA-IgG-IgA）,用磷酸盐缓冲液（PBS）和超滤离心管进行纯化和浓缩,Western blot实验对提取的SA-IgG进行验证。在体外分离并培养IgA肾病患者外周血中的单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMC）添加不同浓度的重组人st6gal1（r st6gal1）进行刺激后,ELISA法检测细胞上清液中SA-IgG的表达水平;添加SA-IgG、NSA-IgG进行刺激,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、TGF-β和IL-6炎症因子的表达水平,细胞计数试剂盒8（Cell counting kit8,CCK8）法检测PBMC增殖情况;在体外培养的健康人系膜细胞（Human glomerular mesangial cells,HMCs）中分别添加SA-IgG-IgA、NSA-IgG-IgA进行刺激,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、TGF-β和IL-6的表达水平,CCK8法检测HMCs增殖情况。研究结果IgA肾病患者外周血中st6gal1的表达水平高于健康对照组。根据外周血中st6gal1水平的中位数将所有纳入的患者分为两组,即分别为低水平st6gal1组6412pg/ml和高水平st6gal1组>6412pg/ml,对两组患者间的临床病理数值进行比较和分析。结果表明与st6gal1水平较低的患者相比,st6gal1水平较高的患者甘油三酸酯,血清肌酐,尿酸,血清IgA,血清C3,血清C4和24h蛋白尿水平较高,eGFR和IgG水平较低,对于活检的病理指标,st6gal水平较高组的患者更倾向于发生更高的肾小球硬化比例。st6gal1以分类变量表示时,较高水平的st6gal1组患者与较低水平的st6gal1组患者相比,eGFR月均下降速率的风险降低（OR:0.47;95%CI:0.11-0.72）;另外,较高水平的st6gal1组患者具有较高的蛋白尿缓解风险（OR:2.47;95%CI:0.91-6.72）。st6gal1以连续性变量表示时,结果表明它是eGFR月均下降速率和蛋白尿缓解的保护因素。分析了st6gal1肾脏保护作用的机制,体外细胞实验结果表明,st6gal1以浓度依赖性方式导致SA-IgG富集（500 ng/ml比0 ug/ml:0.47±0.10比0.40±0.08,p=0.30;1000 ng/ml比0 ng/ml:0.59±0.21比0.40±0.08,p=0.03）

关键词： IgA肾病 st6gal1 唾液酸化的IgG 炎症因子细胞增殖肾脏结局

st6gal1介导的α2,6-唾液酸修饰对猪胚胎附植期子宫内膜上皮细胞增殖的调控作用研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

ST6GAL1介导的α2,6-唾液酸修饰对猪胚胎附植期子宫内膜上皮细胞...

作者：谭喜红华中农业大学

学位级别：硕士

提升猪的分子育种技术与种质创新能力,是我国养猪业迫切需要解决的关键问题。产仔数是猪繁殖效率最直观的度量指标,在猪的遗传改良中占有非常重要的地位。胚胎死亡率是限制母猪产仔潜能的关键因素,30%的胚胎死亡发生在猪胚胎附植阶段,... 详细信息

提升猪的分子育种技术与种质创新能力,是我国养猪业迫切需要解决的关键问题。产仔数是猪繁殖效率最直观的度量指标,在猪的遗传改良中占有非常重要的地位。胚胎死亡率是限制母猪产仔潜能的关键因素,30%的胚胎死亡发生在猪胚胎附植阶段,因此对猪胚胎附植调控机制的研究将有助于解析猪产仔数遗传基础。蛋白质糖基化修饰是比较常见的翻译后修饰,但由于聚糖结构的多样性,目前对蛋白质糖基化修饰在猪胚胎附植中的作用鲜有报道。唾液酸是一种九碳单糖,常位于聚糖结构末端形成蛋白质的唾液酸化修饰。在本课题组前期的研究中发现:(1)α2,6-唾液酸结构在猪胚胎附植期子宫内膜上皮细胞中表达,且表达模式在胚胎附植前后存在差异,仅在胚胎附植期(妊娠15天)子宫腔上皮表达。(2)α2,6-唾液酸转移酶基因st6gal1是介导子宫内膜上皮细胞中蛋白质发生α2,6-唾液酸化修饰的关键基因。因此,本研究首先检测到胚胎附植期(妊娠15天)的猪子宫内膜上皮细胞具有增殖能力,与课题组前期研究发现的st6gal1和α2,6-唾液酸结构在猪子宫内膜中的表达模式一致,在此基础上研究了st6gal1介导的α2,6-唾液酸化修饰对子宫内膜上皮细胞增殖的调控作用。主要结果如下:1.猪胚胎附植子宫内膜上皮细胞具有增殖特征。本研究对猪妊娠早期的子宫内膜组织进行免疫荧光染色,发现细胞增殖标记蛋白KI67在猪妊娠15天子宫内膜高表达而在12天只有零星表达;同时细胞-基质黏附标记蛋白Integrin-β1在妊娠12天高表达但在妊娠15天子宫内膜低表达,表明胚胎附植期(妊娠15天)的猪子宫内膜上皮细胞具有增殖能力。2.α2,6-唾液酸结构参与调控细胞的增殖。在Ishikawa细胞中利用SNA凝集素对细胞表面的α2,6-唾液酸结构进行覆盖,然后对覆盖前后的细胞增殖情况进行检测。结果表明α2,6-唾液酸结构的存在会促进细胞的增殖。***6gal1介导形成的α2,6-唾液酸结构会促进细胞的增殖。(1)利用RNA干扰技术进行细胞增殖能力的检测,发现抑制st6gal1基因的表达后,细胞的增殖能力极显著降低(P1);(2)利用流式细胞术对转染siRNA/NC的Ishikawa细胞进行细胞周期检测,结果表明抑制st6gal1基因的表达后,Ishikawa细胞发生细胞周期的G1期阻滞;(3)利用Hoechst染色对转染siRNA/NC的Ishikawa细胞进行细胞凋亡分析,发现抑制st6gal1基因后Ishikawa细胞表现出细胞凋亡的特征(细胞核浓染及核碎裂),说明抑制st6gal1基因的表达会促进Ishikawa细胞的凋亡。***6gal1基因介导的α2,6-唾液酸化修饰的GRP78通过调控细胞内质网应激通路影响细胞的增殖。(1)对siRNA/NC干扰后的Ishikawa细胞进行SNA凝集素免疫沉淀,对获得的蛋白质进行LC-MS/MS蛋白质组测序分析。siRNA/NC转染细胞后鉴定出α2,6-唾液酸修饰蛋白分别有177种和152种,其中30%的蛋白质与内质网应激有关。(2)对SNA凝集素沉淀获得的蛋白质进行western blot实验分析发现内质网应激标记蛋白GRP78发生α2,6-唾液酸修饰。进一步对其下游调控蛋白进行western blot分析发现GRP78经α2,6-唾液酸化修饰后通过激活PERK通路影响细胞的增殖。综上所述,本研究发现st6gal1基因可能通过介导GRP78的α2,6-唾液酸化修饰调控内质网应激通路影响子宫内膜上皮细胞的增殖。

关键词：猪胚胎附植 α2,6-唾液酸修饰 st6gal1 内质网应激细胞增殖

唾液酸转移酶st6gal1在结直肠癌发生发展过程中的机制研究及临床应用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

唾液酸转移酶ST6GAL1在结直肠癌发生发展过程中的机制研究及临床...

作者：周乐其上海交通大学

学位级别：硕士

结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是最常见的恶性肿瘤之一,发病率在所有肿瘤中位列第三位而死亡率位列第二位。对于结肠癌的治疗,现阶段以手术治疗为主,辅以放、化疗等手段。肿瘤的转移和复发是CRC患者的主要死亡原因,其中转移以肝转... 详细信息

结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是最常见的恶性肿瘤之一,发病率在所有肿瘤中位列第三位而死亡率位列第二位。对于结肠癌的治疗,现阶段以手术治疗为主,辅以放、化疗等手段。肿瘤的转移和复发是CRC患者的主要死亡原因,其中转移以肝转移为主。因而对于CRC转移的机制研究对改善CRC患者的预后具有重要意义在第一部分研究中,为了探索CRC肝转移的可能机制,我们课题组前期发现唾液酸转移酶st6gal1在结肠癌标本中,随着肿瘤进展其表达量逐渐降低,因而猜测其可能与肿瘤的转移相关。为了探索st6gal1调控CRC转移的可能机制,首先我们分别构建了 st6gal1过表达及敲低的细胞系。利用体内及体外实验,我们发现st6gal1的过表达可抑制CRC细胞的转移能力,而敲低st6gal1则促进CRC细胞的转移。为了进一步探索st6gal1调控CRC细胞转移能力的机制,我们利用质谱及生物信息分析,发现st6gal1主要影响细胞的运动、迁移等能力,并且和细胞粘附因子ICAM-1具有重要联系。随后我们利用免疫印迹发现在结肠癌组织中ICAM-1的表达随着肿瘤进展逐渐降低,且其表达量亦和病人的预后相关。同时通过大数据分析,我们发现st6gal1与ICAM-1呈正相关。此外我们利用免疫沉淀、放线菌酮等手段,发现st6gal1通过增加ICAM-1的唾液酸化而增加其蛋白质的稳定性,进而调控ICAM-1的表达量。第二部分研究中,为了探究ICAM-1作为肿瘤标志物的可行性,我们检测了血清sICAM-1的唾液酸水平与CRC分期的关系,发现非转移期sICAM-1的唾液酸水平要明显低于转移期,因而可以作为一个潜在的肿瘤标志物。综上所述,针对CRC转移的可能机制,我们利用生物化学、细胞生物学等手段,揭示了 st6galI调控其底物蛋白ICAM-1的唾液酸化从而影响CRC转移的机制,并提出了一个新型的肿瘤标志物检测手段,为CRC的诊断和治疗提供新的研究方向。

关键词：结直肠癌 st6gal1 ICAM-1 唾液酸转移

沉默st6gal1增强人肝癌细胞MHCC97-H对多西他赛敏感性的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

沉默ST6GAL1增强人肝癌细胞MHCC97-H对多西他赛敏感性的机制研究

微小RNA miRNA-9在小鼠肝癌细胞淋巴道转移中的作用

2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会

作者：陈茜茜汪淑晶张嘉宁大连医科大学生物化学与分子生物学教研室糖生物学研究所大连理工大学生命科学与医药学院

＜正＞唾液酰基转移酶st6gal1能够在高尔基体上特异性催化带负电荷的唾液酸以c2-6糖苷键的形式转移至N-聚糖最外侧的半乳糖上。研究表明,st6gal1在多种肿瘤中高表达,其中包括宫颈癌,乳腺癌和胃癌等。然而,st6gal1在肝癌

关键词：肝癌 st6gal1 多西他赛凋亡

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

微小RNA miRNA-9在小鼠肝癌细胞淋巴道转移中的作用

作者：韩逸大连理工大学

学位级别：硕士

肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,据世界卫生组织2014年统计,在我国男性或女性中,肝癌的发病率均位居前五位。转移是导致肝癌症复发及致死的重要原因之一,研究肝癌转移的分子机制刻不容缓。糖基化修饰作为蛋白质转录翻译后一种重要... 详细信息

肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,据世界卫生组织2014年统计,在我国男性或女性中,肝癌的发病率均位居前五位。转移是导致肝癌症复发及致死的重要原因之一,研究肝癌转移的分子机制刻不容缓。糖基化修饰作为蛋白质转录翻译后一种重要的修饰方式,在蛋白质合成、正确折叠、细胞识别等过程中发挥重要的生物学功能。糖基化修饰主要由糖基转移酶糖基催化完成。糖基化修饰异常,即糖基转移酶表达异常及糖链结构异常是恶性肿瘤发生发展及转移的共同特征。唾液酸是一类九碳酸性糖的总称,一般连接于糖蛋白和糖脂糖链的末端,介导或调控炎症、病原感染、肿瘤发生发展及转移等诸多病理过程。α-2,6唾液酸转移酶(st6gall)是脊椎动物唾液酸转移酶家族成员,催化活化的唾液酸以α-2,6连接糖苷键与半乳糖共价结合。本实验室的前期研究发现：上调st6gall及其催化产物α-2,6连接唾液酸的表达,促进小鼠肝癌细胞经淋巴道的转移潜能。miRNA是真核生物中一类内源性具有调控功能的非编码RNA,通过与靶基因3’UTR区域特异结合进而抑制靶基因的表达和相关功能,参与细胞发育、增殖、凋亡等过程。文献报道及本实验的研究结果表明：靶向糖基转移酶的miRNA调控糖基转移酶的表达并改变细胞表面糖蛋白糖基化的修饰。但是,miRNA对st6gal1表达及其催化产物α-2,6连接唾液酸生成的调控作用,尚未见报道。本研究以无、低、高淋巴道转移潜能的小鼠肝癌细胞Hepal-6、Hca-P、Hca-F为对象,基于本实验室前期完成的上述三种细胞高通量芯片分析miRNA表达谱,筛选与转移潜能相关表达显著差异的miRNA,并应用qPCR、免疫印迹分析和流式细胞分析术等方法验证,发现：miRNA-9的表达量与小鼠肝癌细胞淋巴道转移潜能、st6gal1及其催化产物α-2,6连接唾液酸的表达呈负相关。双荧光素酶报告基因分析结果表明,miRNA-9-与st6gal1的3’UTR区域特异性结合。通过转染上调细胞miRNA-9的表达量,能够抑制st6gall及α-2,6连接唾液酸的表达水平,同时降低细胞增殖、迁移、侵袭、黏附能力,抑制与黏附能力密切相关的FAK信号通路：反之,st6gal1及α-2,6连接唾液酸的表达水平提高,细胞增殖、迁移、侵袭、黏附能力升高,FAK信号通路得到激活。以上结果提示：st6gal1是miRNA-9调控的靶基因之一。miRNA-9通过抑制小鼠肝癌细胞中st6gall和α-2,6连接唾液酸的表达,衰减FAK信号通路的激化,进而抑制其淋巴道转移能力。miRNA-9可能是肿瘤转移干预药物设计的靶点分子。

关键词： miRNA-9 肝癌糖基化修饰 st6gal1 α-2,6连接唾液酸

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

唾液酸在结直肠癌转移过程中功能机制研究

唾液酸在结直肠癌转移过程中功能机制研究

作者：张森上海交通大学

学位级别：硕士

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。肿瘤转移是CRC患者的主要死因。目前关于CRC转移的具体机制仍不清楚。因此,深入了解CRC转移相关功能机制对于提高CRC患者生存率,改善患者预后,发现靶向分子具有重要... 详细信息

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。肿瘤转移是CRC患者的主要死因。目前关于CRC转移的具体机制仍不清楚。因此,深入了解CRC转移相关功能机制对于提高CRC患者生存率,改善患者预后,发现靶向分子具有重要意义。糖基化是最常见的翻译后修饰,唾液酸是糖链末端最常见的修饰形式,与细胞粘附、免疫、迁移密切相关。目前已有报道α2,6-唾液酸水平在结直肠癌中表达明显上调,但是对于作用机制目前仍不清楚。本课题利用代谢性标记及糖组学技术,首先在不同转移潜能的两株结肠癌细胞系中对CRC细胞膜上与转移相关的唾液酸底物蛋白进行系统鉴定及筛选;进而针对催化形成α2,6-唾液酸结构的st6gal1唾液酸转移酶,鉴定其在CRC转移过程中可能修饰的特异性唾液酸化膜蛋白,并对部分唾液酸蛋白参与调控CRC转移机制进行了深入研究。在第一部分,以具有相同遗传背景但转移潜能不同的两株结肠癌细胞系SW480(转移能力低)和SW620(转移能力高)作为研究对象,利用代谢性标记技术及质谱鉴定,特异性富集及鉴定细胞膜表面唾液酸蛋白,经过筛选发现至少有28个与肿瘤相关的唾液酸化膜蛋白在两株细胞中差异明显,如Met、E-Cadherin、CD47、ICAM-1、MCAM等,而这些蛋白均与CRC发生或转移密切相关。我们检测了20种唾液酸转移酶在细胞中的表达水平,发现催化形成α2,6-唾液酸结构的st6gal1在两株细胞中差异显著,为后续研究st6gal1在CRC转移中的调控机制奠定了较好的基础。在第二部分,进一步从体内调控α2,6-唾液酸修饰的唾液酸转移酶st6gal1入手开展研究。首先,在62例CRC病人配对肿瘤/正常组织中检测,发现st6gal1在CRC发生发展过程中呈现动态变化,即在非进展期(I+II期)的表达含量明显高于进展期(III+IV期),提示st6gal1可能负向调控CRC的转移过程。为了系统性研究st6gal1作用的底物蛋白,在野生型(WT)及st6gal1过表达(OE)CRC细胞中特异性标记及富集唾液酸膜蛋白,共鉴定到318个差异性膜蛋白,IPA分析显示这些差异性蛋白主要与细胞运动、细胞死亡与生存、细胞生长与增殖等密切相关。对于差异蛋白中的EGFR及ICAM-1,进行了更深入的功能学研究,发现过表达st6gal1后可抑制EGFR信号通路;而过表达st6gal1可通过提高ICAM-1蛋白稳定性,上调ICAM-1蛋白表达。进一步在CRC组织中验证发现,ICAM-1与st6gal1趋势相同,即非进展期表达明显高于进展期;提示st6gal1可能通过影响ICAM-1蛋白稳定性负向调控CRC转移过程。综上所述,本研究针对CRC转移死亡率高的这一临床问题,利用代谢性标记及糖组学的方法系统鉴定与CRC转移相关的唾液酸修饰蛋白,并阐述了唾液酸转移酶st6gal1通过作用底物蛋白参与调控CRC转移的可能机制,为临床干预CRC转移以及药靶开发提供了有意义的科学线索。

关键词：结直肠癌转移唾液酸 st6gal1 代谢性标记