检索结果-南通市图书馆

作者：危智盛广东药学院

学位级别：硕士

背景：多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是以中枢神经系统(central nervous systems, cNS)炎性脱髓鞘为特征的自身免疫性疾病。临床主要表现为复发缓解及进行性加重的神经功能障碍。对于MS急性发作和复发治疗,临床除了部分患者采用β... 详细信息

背景：多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是以中枢神经系统(central nervous systems, cNS)炎性脱髓鞘为特征的自身免疫性疾病。临床主要表现为复发缓解及进行性加重的神经功能障碍。对于MS急性发作和复发治疗,临床除了部分患者采用β干扰素及免疫抑制剂外,仍主要使用大剂量甲泼尼龙(methylprednisolone,MP)短程冲击治疗。然而,目前MP使用剂量尚不统一,临床医生常根据经验采用的剂量有500mg/d,1000mg/d,2000mg/d。而且,少数患者对糖皮质激素(glucocorticoid,Gc)治疗发生抵抗。Gc抵抗机制尚不完全清楚,目前,普遍认为糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的亚型：GRα及GRβ在激素抵抗中起着至关重要的作用。因此,本研究主要是通过MS大鼠模型来分析不同剂量MP冲击治疗后的疗效差异以及疗效与GR亚型之间的关系,并探讨Gc抵抗方面的机制。目的：构建MS的动物模型——实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE),通过不同剂量MP冲击治疗EAE大鼠,从大鼠神经功能评分、组织炎性病灶计数、髓鞘脱失评分、细胞因子含量等方面研究其疗效的差异,探讨MP剂量与疗效之间的关系；并对Gc治疗后大鼠神经组织中GRα、GRβ及srp30c表达的变化及其与激素疗效的相关性以及GRβ表达与剪接因子srp30c的相关性进行分析,探讨Gc抵抗的可能机制。方法：1、以新鲜豚鼠脊髓匀浆加完全弗氏佐剂(complete Freund adjuvant,cFA)为抗原,接种至雌性Wistar大鼠四肢足垫皮下,并在大鼠足背皮下注射百日咳杆菌,构建大鼠EAE模型。2、将EAE大鼠分成大剂量组、小剂量组、模型对照组,分别通过尾静脉注射MP100mg/kg、25mg/kg、等容量生理盐水；另取未造模大鼠作为正常对照组,予等容量生理盐水注射。免疫接种后第12天,大鼠发病达高峰时开始给药。每日对大鼠神经损害表现进行评分,连续给药5天后处死大鼠。3、采血并以放射免疫法检测血浆中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)含量；取大鼠脊髓组织行HE染色及髓鞘染色并对切片进行炎性病灶计数及髓鞘脱失评分；采用免疫组化法检测脊髓组织GRα及GRβ的表达；RT-PcR法对脊髓组织srp30c mRNA作半定量分析；4、对治疗组大鼠及EAE模型组大鼠的临床评分、组织炎性病灶计数、髓鞘脱失评分、细胞因子含量等进行综合分析,评估大、小剂量MP的疗效差异；并对各大鼠的疗效与其GRα、GRβ及srp30c表达,GRp与srp30c的表达进行相关性分析。结果：1、所建立的EAE大鼠临床表现、HE染色、髓鞘染色等方面均符合EAE的临床及病理特征；2、大剂量组及小剂量组EAE大鼠经MP治疗后神经损害表现有明显改善,而模型对照组大鼠症状加重。大剂量组与小剂量组给药前后临床评分改变的差值,无统计学差异；3、大剂量和小剂量组在炎性病灶数、髓鞘脱失评分等方面比较均无统计学差异；4、细胞因子IL-2、TNF-α含量在大、小剂量组间比较无统计学差异；5、GRα及GRβ表达在大、小剂量组间均无显著差异；治疗前后各大鼠临床评分改变的差值与其GRα/GRβ比值呈正相关(r=0.550,P=0.027)；6、srp30c的表达在大、小剂量组间均无显著差异；治疗前后各大鼠临床评分改变的差值与srp30c的表达呈负相关(r=-0.583,P=0.018),srp30c的表达与GRβ呈正相关(r=0.488,P=0.008)。结论：在一定的有效剂量范围内,临床疗效与MP剂量不呈依赖性,增大剂量不能提高疗效；EAE神经组织中GRα/GRβ比值与激素敏感性有着密切的关系,高比值与Gc敏感性增高有关,而比值降低则预示发生Gc抵抗可能；剪接因子srp30c可能具有促进GR前体mRNA选择性剪接形成GRβ的作用,并与Gc敏感性下降有着密切的关系。

关键词：甲泼尼龙实验性变态反应性脑脊髓炎糖皮质激素糖皮质激素受体α 糖皮质激素受体β srp30c

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srp30c导致小鼠HEI-Oc1细胞产生糖皮质激素抵抗

SRp30c导致小鼠HEI-OC1细胞产生糖皮质激素抵抗

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作者：艾誉峰南昌大学

学位级别：硕士

目的:分析LPS处理HEI-Oc1后IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ、GRα的表达,探讨上调srp30c能否使HEI-Oc1细胞对糖皮质激素的敏感性降低,使HEI-Oc1细胞产生糖皮质激素抵抗。方法:采用HEI-Oc1毛细胞株作为研究工具,使用不同浓度（50、100ug/ml）... 详细信息

目的:分析LPS处理HEI-Oc1后IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ、GRα的表达,探讨上调srp30c能否使HEI-Oc1细胞对糖皮质激素的敏感性降低,使HEI-Oc1细胞产生糖皮质激素抵抗。方法:采用HEI-Oc1毛细胞株作为研究工具,使用不同浓度（50、100ug/ml）LPS处理HEI-Oc1毛细胞株,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ、GRα蛋白在100ug/ml-LPS组、50ug/ml-LPS组及对照组中的表达水平;实时荧光定量PcR（q RT-PcR）检测IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ、GRαmRNA在三组组织中的表达;使用srp30c siRNA质粒及srp30c过表达质粒转染HEI-Oc1细胞,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测GRβ、AP-1、NF-κB和HDAc2蛋白质在srp30c siRNA组、srp30c过表达组、空载组以及对照组中的表达水平;MTT法检测srp30c过表达组、srp30c过表达+地塞米松组、地塞米松组、对照组在0h、24h、36h、48h细胞增殖活性。结果:1.我们使用不同浓度LPS刺激HEI-Oc1毛细胞株后,采用Western blot方法检测IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ、GRα蛋白在100ug/ml-LPS组、50ug/ml-LPS组及对照组中的表达情况,结果显示与对照组相比,50ug/ml-LPS组IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ表达更高,差异均具有统计学意义,与对照组相比,50ug/ml-LPS组GRα表达更低,差异具有统计学意义,与100ug/ml-LPS组相比,50ug/ml-LPS组IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ表达更高,差异均具有统计学意义,50ug/ml-LPS组GRα表达更低,差异具有统计学意义。2.使用qRT-PcR方法检测IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ、GRαmRNA在100ug/ml-LPS组、50ug/ml-LPS组及对照组中的表达情况,结果显示与对照组相比,50ug/ml-LPS组IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ表达更高,差异均具有统计学意义,GRα表达更低,差异具有统计学意义,与100ug/ml-LPS组相比,50ug/ml-LPS组IL-2、TNF-a、srp30c、GRβ表达更高,P值分别为0.4342、0.0020、0.1104、0.2428,GRα表达更低,差异具有统计学意义。3.过表达srp30c后,我们通过Western blot方法检测GRβ、AP-1、NF-κB和HDAc2的蛋白在srp30c过表达组、空载组以及对照组中的表达水平,结果显示与对照组相比,srp30c过表达组srp30c、GRβ、HDAc2、AP-1、NF-κB表达更高,差异均具有统计学意义,与空载组相比,srp30c过表达组srp30c、GRβ、HDAc2、AP-1、NF-κB表达更高,差异均具有统计学意义。4.抑制srp30c后,使用Western blot方法检测GRβ、AP-1、NF-κB和HDAc2的蛋白在srp30c siRNA组、空载组以及对照组中的表达水平,结果显示与对照组相比,srp30c siRNA组GRβ、HDAc2、AP-1、NF-κB表达更低,差异均具有统计学意义,与空载组相比,srp30c siRNA组GRβ、HDAc2、AP-1、NF-κB表达更低,差异均具有统计学意义。5.我们采用MTT法检测srp30c过表达组、srp30c过表达+地塞米松组、地塞米松组以及对照组在0h、24h、36h、48h细胞增殖活性,结果显示与对照组相比,地塞米松组细胞增殖活性更低,过表达srp30c后,细胞的增殖活性明显升高,地塞米松抑制HEI-Oc1细胞增殖,但由于srp30c过表达质粒的转染,其抑制作用减弱。结论:srp30c可上调HEI-OcI细胞中GRβ的表达从而导致HEI-Oc1细胞产生糖皮质激素抵抗。

关键词：脂多糖糖皮质激素 srp30c GR

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糖皮质激素受体α β和剪接因子srp30c在系统性红斑狼疮的表达及意义

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中华风湿病学杂志 2007年第5期11卷 262-266,I0001页

作者：李居一徐建华安徽医科大学第一附属医院风湿免疫科合肥230022

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)糖皮质激素(Gc)抵抗患者外周血单个核细胞(PBMc)中糖皮质激素受体(GR)α、GRβ及剪接因子srp30c的表达及其与临床指标的相关性,以探讨Gc抵抗发生的可能机制。方法根据患者对Gc反应的敏感程度分为Gc抵抗组和G... 详细信息

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)糖皮质激素(Gc)抵抗患者外周血单个核细胞(PBMc)中糖皮质激素受体(GR)α、GRβ及剪接因子srp30c的表达及其与临床指标的相关性,以探讨Gc抵抗发生的可能机制。方法根据患者对Gc反应的敏感程度分为Gc抵抗组和Gc敏感组,分别用反转录聚合酶链反应(RT-PcR)方法检测两组患者与健康人外周血PBMc中GRα、GRβ及剪接因子srp30c的mRNA表达量;免疫细胞化学(Icc)方法测定外周血PBMc中的GRα、GRβ蛋白水平的表达,并分析GR及srp30c变化的意义及与各临床指标之间的关系。结果①SLE患者与正常对照者PBMc中均有GRα、GRβ的mRNA及蛋白的表达,以GRα占人部分;②Gc抵抗组GRβ和srp30c的mRNA表达量均明显高于Gc敏感组及正常对照组(pc抵抗组GRβ阳性细胞数也明显高于Gc敏感组及正常对照组(Pc回归分析后,显示只有GRα和srp30c的mRNA表达量是Gc抵抗发生的独立危险因素。结论GRB及剪接因子srp30c在Gc抵抗的发生中可能发挥重要作用,检测患者外周血PBMc中GRβ及srp30c的表达有可能预测患者对激素治疗的反应,给临床治疗提供进一步的依据。

关键词：红斑狼疮,系统性狼疮肾炎受体,糖皮质激素 srp30c

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甲泼尼龙对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠srp30c的影响

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广东药学院学报 2009年第3期25卷 288-291页

作者：危智盛王晓辉洪铭范苏全喜余青云臧林泉潘雪刁广东药学院临床医学院广东广州510080

目的研究不同剂量甲泼尼龙(MP)作用于实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型后,剪接因子srp30c的表达及其与疗效的关系,探讨MP治疗作用及发生激素抵抗的可能机制。方法构建Wistar大鼠EAE模型,将EAE大鼠分成大剂量组、小剂量组、模型对... 详细信息

目的研究不同剂量甲泼尼龙(MP)作用于实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型后,剪接因子srp30c的表达及其与疗效的关系,探讨MP治疗作用及发生激素抵抗的可能机制。方法构建Wistar大鼠EAE模型,将EAE大鼠分成大剂量组、小剂量组、模型对照组,分别通过尾静脉注射MP 100 mg/kg、25 mg/kg、等容量生理盐水;另取未造模大鼠作为正常对照组,予等容量生理盐水注射。给药5d后处死大鼠,提取新鲜脊髓组织行RT-PcR,检测srp30c mRNA表达,分析其与疗效的关系。结果srp30c在各组均有表达,大、小剂量组srp30c mRNA表达明显高于模型组、正常对照组,差异有显著性;不同大鼠Kono评分改善的差值与其srp30c mRNA表达值呈负相关(r=-0.583,Psrp30c表达与病情及MP剂量无直接关系,但与疗效呈负相关,表明其与糖皮质激素敏感性下降有着密切的关系,EAE模型发生激素抵抗的机制中srp30c扮演着重要的角色。

关键词：甲泼尼龙实验性变态反应性脑脊髓炎糖皮质激素抵抗 srp30c

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流感病毒A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段7和8 mRNAs的低效拼接提高NS1蛋白表达量的研究

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中国畜牧兽医 2012年第4期39卷 157-157页

作者： Ellenor B W 刘丹

A型流感病毒编码的2个片段(7和8)产生的mRNAs拼接后,可潜在地改变NS1蛋白和NS2蛋白及M1蛋白和蛋白M2的比例。本试验研究了A型流感病毒自然发生的序列多态性对其mRNAs拼接的影响,通过对A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)和A/Netherlands/178... 详细信息

A型流感病毒编码的2个片段(7和8)产生的mRNAs拼接后,可潜在地改变NS1蛋白和NS2蛋白及M1蛋白和蛋白M2的比例。本试验研究了A型流感病毒自然发生的序列多态性对其mRNAs拼接的影响,通过对A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)和A/Netherlands/178/95(H3N2)及多个H5N1禽流感病毒株片段7和8mRNAs拼接效率进行比较,发现与其他毒株的片段7和8mRNAs相比,A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段7和8 mRNAs拼接效率低,导致更高水平的NS1功能蛋白的产生,可能有利于A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)的致病性。结果还显示,A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段8 mRNAs对SR蛋白过表达的应答与A/Netherlands/178/95(H3N2)不同。

关键词：流感西班牙流感 NS1 剪接聚腺苷酸化 SR蛋白 ASF/SF2 srp30c srp40

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