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sptbn1对结直肠腺癌细胞及其多倍体肿瘤巨细胞生物学行为的影响及分子机制

临床与实验病理学杂志 2022年第10期38卷 1187-1192页

作者：陈静曹立宇白真真温奕巽王玥安徽医科大学病理学教研室合肥230032

目的探讨sptbn1在结直肠腺癌细胞及其多倍体肿瘤巨细胞(polyploid giant cancer cells,PGCCs)中的作用及分子机制。方法应用CPTAC数据库分析结直肠腺癌组织和癌旁正常组织中sptbn1蛋白表达水平;应用Kaplan-Meier Plotter、PrognoScan和U... 详细信息

目的探讨sptbn1在结直肠腺癌细胞及其多倍体肿瘤巨细胞(polyploid giant cancer cells,PGCCs)中的作用及分子机制。方法应用CPTAC数据库分析结直肠腺癌组织和癌旁正常组织中sptbn1蛋白表达水平;应用Kaplan-Meier Plotter、PrognoScan和UALCAN数据库分析sptbn1蛋白表达与结直肠腺癌患者生存率的关系;应用Western blot法检测sptbn1在结直肠腺癌组织和PGCCs中的表达量;应用平板克隆实验和划痕实验检测细胞的增殖与迁移能力;利用siRNA沉默PTPRN2和sptbn1蛋白的表达。结果CPTAC数据库分析显示,sptbn1蛋白在结直肠腺癌中的表达明显降低,其低表达与结直肠腺癌临床分期呈正相关;生存分析结果显示,sptbn1低表达组患者的总生存率显著低于高表达组;应用奥沙利铂诱导的HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs,其增殖和迁移能力强于对照组HCT116和LOVO细胞;Western blot结果显示,sptbn1蛋白在结直肠腺癌组织和PGCCs中的表达明显下降;sptbn1敲低组HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞的增殖和迁移能力增强;GEPIA数据库结果显示,sptbn1蛋白表达与PTPRN2、E-cadherin蛋白表达呈正相关;敲低sptbn1后,HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞中E-cadherin蛋白表达水平下降;敲低PTPRN2后,HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞中sptbn1、E-cadherin蛋白表达水平明显降低。结论sptbn1在结直肠腺癌和PGCCs中低表达,敲低sptbn1可促进HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞的增殖与迁移,其机制可能与PTPRN2/sptbn1/E-cadherin通路相关。

关键词：结直肠肿瘤多倍体肿瘤巨细胞 sptbn1 PTPRN2 E-cadherin

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sptbn1在T细胞活化中的作用

SPTBN1在T细胞活化中的作用

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作者：赵千喆华中科技大学

学位级别：硕士

目的血影蛋白(Spectrin),最早发现存在于红细胞中,是由α亚基和β亚基组成的一种延伸灵活的细胞骨架蛋白,主要参与维持红细胞的力学稳定性和弹性以及细胞基本形态结构。随着对于血影蛋白的深入研究,除上述等作用外,它还参与细胞信号转... 详细信息

目的血影蛋白(Spectrin),最早发现存在于红细胞中,是由α亚基和β亚基组成的一种延伸灵活的细胞骨架蛋白,主要参与维持红细胞的力学稳定性和弹性以及细胞基本形态结构。随着对于血影蛋白的深入研究,除上述等作用外,它还参与细胞信号转导、细胞黏附、细胞极性和增殖等过程。Spectrin四聚体通过β-spectrin与肌动蛋白微丝结合,形成一个扩展的网络。越来越多的研究表明肌动蛋白骨架在T细胞免疫中发挥重要作用,如参与T细胞受体(T cell receptor,TCR)聚合、免疫突触的形成。作为在结构上与肌动蛋白紧密联系的重要细胞骨架蛋白之一,我们猜想spectrin是否也在T细胞活化过程中发挥作用?若发挥作用,其机制如何?本论文通过构建T细胞特异性敲除βII-spectrin(sptbn1)的小鼠,来探究sptbn1在T细胞活化及功能中的作用与机制。方法1、构建T细胞中特异性敲除sptbn1的小鼠:1)T细胞sptbn1特异性敲除小鼠的获得;2)利用Western Blot检测sptbn1敲除效率。2、利用免疫荧光和共聚焦成像技术探究sptbn1和Actin的定位关系3、探究在稳态下,sptbn1对小鼠免疫系统的影响:1)分离小鼠胸腺、脾脏来源的免疫细胞,使用流式细胞术检测各免疫细胞亚群的比例;2)利用流式细胞术检测胸腺、脾脏来源的免疫细胞分化指标及其他表面标志物表达情况。4、体外探究TCR激活状态下,sptbn1对初始T细胞活化、增殖的影响:1)分离小鼠脾脏细胞,使用流式细胞术检测T细胞活化、增殖指标;2)利用磁珠分离纯化出小鼠脾脏CD8T细胞,使用流式细胞术检测CD8T细胞活化、增殖指标。5、体外探究TCR激活状态下,sptbn1对效应T细胞再次接受刺激的影响:1)利用IL-2扩增活化后的小鼠脾脏CD8T细胞,获得细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL),通过Western Blot检测TCR激活状态下各信号通路中磷酸化位点上蛋白的表达情况;2)流式细胞术检测CTL的效应功能,如各种细胞因子的分泌情况;3)利用免疫荧光和共聚焦成像技术探究TCR激活状态下T细胞极化情况。6、通过建立体内慢性病毒感染(LCMV Clone-13)小鼠模型探究sptbn1对于CD8T细胞抗病毒感染能力的影响:1)利用RT-PCR检测小鼠CD8T细胞对脾脏、肝脏、肺等组织中病毒的清除能力;2)流式细胞术检测感染后的小鼠脾脏CD8T细胞在稳态下抑制性受体的表达情况;3)流式细胞术检测CD8T细胞接受刺激后效应细胞因子的分泌情况。7、通过免疫过继传输的方法在体内探究sptbn1对T细胞分化、增殖的影响:1)将脾脏单细胞传输到免疫缺陷的Rag2鼠体内,流式细胞术检测T细胞增殖情况;2)将骨髓细胞传输到免疫缺陷的Rag2鼠体内,流式细胞术检测T细胞增殖、分化情况。8、通过构建sptbn1敲除的Jurkat细胞系在体外探究sptbn1对其增殖的影响:1)利用CRISPR/Cas9技术在Jurkat细胞系中敲除sptbn1;2)流式细胞术检测Jurkat WT/KO细胞的增殖情况。结果(如无特殊说明,sptbn1敲除小鼠均为T细胞中特异性敲除)1、sptbn1分布在T细胞的细胞膜上,且和Actin有较强的共定位;2、sptbn1不影响小鼠胸腺细胞稳态发育。无论是胸腺CD4/CD8亚群,还是TCRβ/CD69亚群,其组成和比例在sptbn1敲除小鼠和对照组之间均无统计学差异;3、sptbn1影响小鼠脾脏细胞的分化发育。虽然脾脏CD4/CD8亚群的比例在sptbn1敲除小鼠和对照组之间无统计学差异,但在CD4T细胞中,sptbn1敲除小鼠的初始T细胞比例高于对照组,效应T细胞比例明显低于对照组,记忆T细胞比例和对照组之间无统计学差异;在CD8T细胞中,sptbn1敲除小鼠的初始T细胞比例、记忆T细胞比例和对照组之间无统计学差异,效应T细胞比例低于对照组;4、在脾脏CD4T细胞中,sptbn1敲除小鼠的CD5表达量明显低于对照组,CD45的表达量也低于对照组;在CD8T细胞中,sptbn1敲除小鼠的CD45表达量低于对照组;5、用anti-CD3、Beads(anti-CD3&CD28)、PMA+Ionomycin分别刺激脾脏单细胞6h,在三种条件下CD4T细胞活化情况在sptbn1敲除小鼠和对照组之间均无统计学差异;但在anti-CD3刺激的条件下,sptbn1敲除小鼠中CD4T细胞增殖较对照组快;6、用anti-CD3、Beads(anti-CD3&CD28)、PMA+Ionomycin分别刺激脾脏单细胞6h,在Beads刺激的条件下,sptbn1敲除小鼠中CD8T细胞活化较对照组减弱;在anti-CD3刺激的条件下,sptbn1

关键词：血影蛋白 spectrin sptbn1 T细胞活化 T细胞信号

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sptbn1影响滋养干细胞分化参与子痫前期发生机制研究

SPTBN1影响滋养干细胞分化参与子痫前期发生机制研究

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作者：刘津锴重庆医科大学

学位级别：硕士

研究背景:子痫前期(Preeclampsia,PE)是胎盘源性异质性疾病,其早期发病机制至今尚未阐明,当前对PE的研究主要聚焦于绒毛外滋养细胞侵袭功能障碍介导螺旋动脉重塑不足,导致胎盘长期缺血缺氧后大量炎症因子释放入血最终引发高血压、蛋白... 详细信息

研究背景:子痫前期(Preeclampsia,PE)是胎盘源性异质性疾病,其早期发病机制至今尚未阐明,当前对PE的研究主要聚焦于绒毛外滋养细胞侵袭功能障碍介导螺旋动脉重塑不足,导致胎盘长期缺血缺氧后大量炎症因子释放入血最终引发高血压、蛋白尿、全身脏器损伤等一系列临床表现。由于滋养细胞功能发生障碍之前,早期的胎盘发育过程已出现滋养细胞的分化异常,这是导致PE的重要始动因素,而人类滋养干细胞研究滋养细胞分化过程的绝佳模型。非红细胞血影蛋白1(spectrin beta,non-erythrocytic 1,sptbn1)可通过TGF-β通路调控心肌细胞分化过程,但其在胎盘滋养细胞中的表达模式及生物学意义尚未报道。本课题将以滋养干细胞为研究模型,探讨sptbn1对胎盘滋养干细胞分化潜能的影响,以期为研究PE早期发病机制提供新的视野。方法:收集人类早孕绒毛,建立人类滋养干细胞模型并对各分化时期细胞进行真核转录组学测序分析,尝试建立人类滋养层类器官、早孕绒毛类器官模型,利用细胞免疫荧光对建立的模型等进行鉴定;收集正常和PE胎盘组织,进行单细胞转录组学测序;收集PE(n=6)以及匹配孕周的正常(n=6)妊娠晚孕期胎盘组织,并检测sptbn1在其中的表达情况。利用CRISPRCAS9基因编辑技术构建人类滋养干细胞sptbn1基因敲除株,诱导该敲除细胞株向绒毛外滋养细胞分化,流式细胞术及Western blot检查其细胞分化情况。结果:真核转录组分析鉴定提取细胞符合人类滋养干细胞表达谱,类器官分别符合人类滋养层、早孕绒毛类器官标志物表达,sptbn1在滋养层细胞中表达并在PE胎盘组织中表达显著下降,sptbn1的缺失会表达下调抑制滋养干细胞向绒毛外滋养细胞分化途径。结论:人类滋养干细胞中sptbn1缺失可抑制其向绒毛外滋养细胞分化,此过程可能会导致胎盘形成早期绒毛外滋养细胞数量不足,进而导致PE发生。

关键词：子痫前期 sptbn1 人类滋养干细胞

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RBM8A、sptbn1蛋白在结直肠癌中的表达及意义

RBM8A、SPTBN1蛋白在结直肠癌中的表达及意义

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作者：张晓宇河北医科大学

学位级别：硕士

目的:测定结直肠癌(Colorectal carcinoma,CRC)患者肿瘤组织及癌旁组织中核糖核酸结合基序蛋白8A(RNA binding motif protein 8A,RBM8A,Y14)及βII血影蛋白(beta2 Spectrin,sptbn1,β2SP)的表达水平,初步分析两者与临床资料之间的关系,探讨RBM8A与sptbn1两者之间的相关性,以进一步探究两者在CRC中的表达及意义。方法:1.应用UniHI、ONCOMINE生物信息学数据库发现RBM8A、sptbn1在CRC癌组织和癌旁组织中存在差异性表达,针对性查阅文献,确定研究目标蛋白RBM8A、sptbn1在CRC中的表达。2.筛选秦皇岛市第一医院一年间CRC术后癌组织及相应癌旁组织标本各60例互为对照。3.运用免疫组织化学法(IHC)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别研究CRC癌组织及癌旁组织中RBM8A、sptbn1的表达情况。4.统计学方法:采用SPSS21.0统计软件进行统计分析及柱状图绘制。Western blot结果采用均数±标准差(x±s)表示,IHC结果采用百分比表示。(1)分析RBM8A、sptbn1在CRC癌组织与癌旁组织中是否存在差异性表达:定量资料采用t检验,定性资料采用χ检验或Fisher确切概率法。(2)分析CRC癌组织中RBM8A、sptbn1的表达与临床资料之间的关系:采用χ检验、Fisher确切概率法、基于秩的非参数检验、非参数秩相关分析及Logistic回归分析。(3)在CRC癌组织中RBM8A、sptbn1的表达相关性:采用非参数秩相关分析。均以检验水准α=0.05,P1)Western blot结果:RBM8A在结直肠癌组织及癌旁组织中均有表达,差异无统计学意义(t=0.974,P=0.332)。(2)IHC结果1)RBM8A在结直肠癌及相应癌旁组织中均有表达,差异有统计学意义(χ=11.109,P=0.001);2)RBM8A在分化程度(χ=16.367,P=0.000)、肿瘤直径(χ=8.910,P=0.003)和浆膜是否浸润(χ=13.806,P=0.000)分组中的表达差异具有统计学意义;3)RBM8A的表达与分化程度呈负相关(r=-0.460,P=0.000),与肿瘤直径呈正相关(r=0.575,P=0.000),与浆膜浸润程度呈正相关(r=0.620,P=0.000)。4)分化程度(OR=5.900,95%CI:2.035-17.104,P=0.001)、肿瘤直径(OR=6.429,95%CI:1.757-23.524,P=0.005)、浆膜浸润程度(OR=10.200,95%CI:2.689-23.693,P=0.001)均与RBM8A的表达存在关联。***1实验结果(1)Western blot结果:sptbn1在结直肠癌及相应癌旁组织中均有表达,差异有统计学意义(t=-2.662,P=0.010)。(2)IHC结果1)sptbn1在结直肠癌及相应癌旁组织中均有表达,主要分布于细胞膜和细胞质,差异有统计学意义(χ=11.442,P=0.001)。2)sptbn1在分化程度(χ=10.048,P=0.007)、肿瘤直径(χ=4.077,P=0.043)分组中的表达水平差异具有统计学意义。3)sptbn1的表达与分化程度成正相关(r=0.406,P=0.001),与肿瘤直径成负相关(r=-0.261,P=0.044)。4)分化程度(OR=0.282,95%CI:0.122-0.653,P=0.003)、肿瘤直径(OR=0.341,95%CI:0.118-0.982,P=0.046)均与sptbn1的表达存在关联。3.结直肠癌组织中RBM8A的表达水平与sptbn1呈负相关(r=-0.267,P=0.039)。结论:***8A在CRC组织中的表达水平高于癌旁组织,且与分化程度、肿瘤直径和浆膜是否浸润有关,提示RBM8A与CRC的恶性程度、增殖和侵袭能力存在一定的关系。***1在CRC组织中的表达低于癌旁组织,且与分化程度、肿瘤直径有关,提示sptbn1与CRC的恶性程度、增殖能力存在一定的关系。***组织中,RBM8A的表达与sptbn1呈负相关,提示二者之间可能存在相互调控关系,并共同作用于CRC的发生、发展过程。

关键词： RBM8A sptbn1 结直肠癌 IHC Western blot

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ATP1A1、TINK及sptbn1作为肺腺癌骨转移的生物标志物

ATP1A1、TINK及SPTBN1作为肺腺癌骨转移的生物标志物

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2024中国肿瘤标志物学术大会暨CACA整合肿瘤学高峰论坛暨第十七届肿瘤标志物青年科学家论坛暨中国肿瘤标志物产业创新大会

作者：李茂琛张志华张红霞河北北方学院附属第一医院

肺癌是我国乃至全球癌症相关死亡的主要原因,发病率逐年上升。非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的80%以上。NSCLC可进一步细分为腺癌(AD),鳞状细胞癌(SQCC)和大细胞癌(LCC),分别约占所有肺癌病例的40%、25%-30%和5-10%。肺癌(LC)相关死亡... 详细信息

肺癌是我国乃至全球癌症相关死亡的主要原因,发病率逐年上升。非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的80%以上。NSCLC可进一步细分为腺癌(AD),鳞状细胞癌(SQCC)和大细胞癌(LCC),分别约占所有肺癌病例的40%、25%-30%和5-10%。肺癌(LC)相关死亡的主要因素是远处转移,这是一种不可避免的肺癌生长结果。大多数肺癌在脑(15-43%)和肝(33-40%)内转移,并且各种临床肺癌亚型具有特定的有利转移部位。特别是,脑转移和肝转移在SCLC患者中更为常见,而骨转移在NSCLC患者中更为常见。研究表明,50%的肺癌患者在尸检中也发现了骨转移。肺癌骨转移患者的中位生存时间仅为6个月至10个月,治疗后1年的生存率仅为40%-50%。虽然在转移性NSCLC的整体管理方面取得了相当大的进展,但骨转移仍然是发病率、死亡率和生活质量下降的常见原因。血清蛋白标志物检测是液体活检,具有创伤小,易采集、便于动态监测,可以早期提示肿瘤微环境的变化等优点。本研究运用深度血液DIA蛋白质组学技术探寻在肺腺癌组与肺腺癌骨转移组之间的差异表达的血清蛋白,旨在发现新型蛋白标志物,为肺腺癌骨转移的早期筛查诊断及治疗提供新的思路。方法:采用4D-DIA蛋白质组学技术,纳入6例肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)及6例肺腺癌骨转移(lung adenocarcinoma bone metastasis,LUADBM)患者进行血清蛋白质组学分析,筛选出上调差异蛋白ATP1A1、TINK及下调差异蛋白sptbn1;收集我院肺腺癌患者181名(非骨转移100名,骨转移81名)空腹血,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测ATP1A1、TINK及sptbn1的表达。结果:ATP1A1、TINK及sptbn1表达在两组中有显著差异;ATP1A1、TINK在肺腺癌骨转移患者中表达上调(Psptbn1在肺腺癌骨转移患者中表达下调(P1A1、TINK及sptbn1可以作为肺腺癌骨转移非侵入性诊断和早期诊断的生物标志物,具有良好的诊断效能,为肺腺癌骨转移的早期诊断及治疗提供新线索。

关键词：肺腺癌骨转移 ATP1A1 TINK sptbn1 早期诊断

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