检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库

spag6基因多态性对种公鸡精液品质和性发育相关性状的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧杂志 2012年第11期48卷 1-6页

作者：毕瑜林陈继兰刘冉冉郑麦青朱静常国斌赵桂苹文杰陈国宏扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室北京100193

本研究旨在筛选北京油鸡spag6基因的SNPs位点,探讨其与种公鸡精液品质和性发育相关性状之间的关系。选择89只35周龄北京油鸡种公鸡,采用质谱SNP技术进行基因分型,利用Phase软件和Haploview软件进行单倍型分析并构建线性模型,对单个位点... 详细信息

本研究旨在筛选北京油鸡spag6基因的SNPs位点,探讨其与种公鸡精液品质和性发育相关性状之间的关系。选择89只35周龄北京油鸡种公鸡,采用质谱SNP技术进行基因分型,利用Phase软件和Haploview软件进行单倍型分析并构建线性模型,对单个位点、单倍型与精液品质和性发育相关性状进行关联分析。结果表明:spag6基因内含子区域共有5个SNPs,其中C29756T和T23041C与精液量、精子活率和精子畸形率显著相关(Pspag6基因是影响鸡精液品质的候选基因;其单个位点SNP突变C29756T、T23041C和H4H4单倍型组合可作为高精液品质鸡群选择的分子标记。

关键词： spag6 多态位点精液品质性发育相关性状北京油鸡

维普期刊数据库

spag6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代肿瘤医学 2023年第5期31卷 811-817页

作者：吕灵璐付国庆胡恋岳君秋聂磊李为张志兵张玲武汉科技大学医学院公共卫生学院环境卫生与职业医学系湖北武汉4300652 湖北省肿瘤医院病理科湖北武汉430079 湖北省肿瘤医院肝胆胰外科湖北武汉430079 韦恩州立大学妇产科美国底特律48201

目的:探讨抑制精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,spag6)对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养正常卵巢上皮细胞(NOE-71)和卵巢癌细胞(SKOV-3、OVCAR-3),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测细胞中spag6基因的... 详细信息

目的:探讨抑制精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,spag6)对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养正常卵巢上皮细胞(NOE-71)和卵巢癌细胞(SKOV-3、OVCAR-3),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测细胞中spag6基因的表达。将4种潜在抑制spag6基因表达的“spag6-shRNA”质粒分别转染到SKOV-3细胞,RT-qPCR和Western blot实验筛选有效抑制spag6基因表达的细胞株;采用细胞计数法和平板克隆实验检测抑制spag6基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响;运用细胞划痕实验和Transwell实验检测抑制spag6基因表达对细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞实验检测抑制spag6基因表达对细胞周期的影响;免疫荧光实验和Western blot检测在SKOV-3细胞中抑制spag6表达对p27kip1分布的影响。结果:spag6基因在卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3中的表达均显著高于正常卵巢上皮细胞NOE-71,且在SKOV-3细胞中表达最强。RT-qPCR和Western blot实验显示2种“spag6-shRNA”质粒能够有效抑制SKOV-3细胞中spag6基因的表达;与对照组细胞相比,抑制spag6基因表达能够降低SKOV-3细胞的增殖,差异有统计学意义(Pspag6基因表达能降低SKOV-3细胞的克隆形成率,差异有统计学意义(Pspag6基因表达能够降低卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力(Pspag6基因表达能使细胞G0/G1期显著上调,S期显著下调(Pspag6表达可降低细胞质中p27kip1的水平而增加细胞核中p27kip1的水平。结论:spag6促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词：卵巢癌 SKOV-3细胞株 spag6 增殖

维普期刊数据库

spag6通过mTOR促进食管癌细胞恶性进展机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

SPAG6通过mTOR促进食管癌细胞恶性进展机制研究

作者：高静蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:通过体内实验探讨spag6通过mTOR促进食管癌细胞恶性进展的机制。方法:1.采用慢病毒质粒稳定转染方法,构建空白对照组、空载组及稳定敲低spag6组的KYSE-150和Eca-9706食管癌细胞株;荧光显微镜下观察荧光情况,验证转染效率;提取上述... 详细信息

目的:通过体内实验探讨spag6通过mTOR促进食管癌细胞恶性进展的机制。方法:1.采用慢病毒质粒稳定转染方法,构建空白对照组、空载组及稳定敲低spag6组的KYSE-150和Eca-9706食管癌细胞株;荧光显微镜下观察荧光情况,验证转染效率;提取上述三组细胞的蛋白,Western blot验证spag6蛋白表达情况。2.将上述三株细胞接种于裸鼠体内,分别构建三株细胞的裸鼠皮下成瘤模型、尾静脉肺转移模型和脚垫淋巴道转移模型;3.采用q RT-PCR、Western Blot、免疫组织化学染色方法检测三种动物模型中各组皮下成瘤动物组中瘤体中spag6、mTOR、LC3B、ATG5和P62的mRNA和蛋白表达水平的差异、尾静脉肺转移模型中转移瘤数目的差异及脚垫淋巴道转移组中淋巴结肿瘤转移数目的差异。结果:1.荧光及Western Blot检测结果显示,食管癌KYSE-150和Eca-9706细胞株中慢病毒稳定敲低spag6模型构建成功;2.食管癌Eca-9706细胞株spag6稳定敲低组裸鼠皮下成瘤模型构建成功,食管癌细胞组异种移植瘤的最终重量和生长体积明显低于空白和空载体对照组。尾静脉肺转移模型和脚垫淋巴道转移模型构建失败;*** blot和免疫组织化学染色结果显示,spag6敲低组异种移植瘤中spag6、mTOR、LC3B和ATG5蛋白表达显著低于空白组和空载体组;而P62蛋白表达显著高于空白组和空载体组;***-PCR实验结果显示,spag6敲低组异种移植瘤中spag6、mTOR、LC3B和ATG5的mRNA相对表达水平显著低于空白组和空载体组;而P62的mRNA相对表达水平显著高于空白组和空载体组。结论:1.在食管癌Ec9706细胞中稳定敲低spag6,可以在裸鼠体内成瘤,且明显抑制肿瘤的体积和重量。2.动物水平验证spag6可能通过mTOR发挥癌基因的作用。3.动物水平验证spag6 shRNA可能是一种潜在的mTOR抑制剂,在食管癌的靶向治疗中具有潜在应用价值。

关键词：食管癌 spag6 mTOR 裸鼠模型

spag6沉默和地西他滨处理对SKM-1细胞凋亡和PTEN去甲基化的作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

SPAG6沉默和地西他滨处理对SKM-1细胞凋亡和PTEN去甲基化的作用

作者：罗洁重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过短发夹RNA重组慢病毒载体靶向沉默SKM-1细胞株中spag6的表达,并构建小鼠异体移植瘤模型,明确spag6表达差异和地西他滨处理对PTEN基因启动子甲基化在体内外的影响,以期为MDS的治疗提供新的靶点。方法:1.慢病毒载体转染SKM-1细... 详细信息

目的:通过短发夹RNA重组慢病毒载体靶向沉默SKM-1细胞株中spag6的表达,并构建小鼠异体移植瘤模型,明确spag6表达差异和地西他滨处理对PTEN基因启动子甲基化在体内外的影响,以期为MDS的治疗提供新的靶点。方法:1.慢病毒载体转染SKM-1细胞构建spag6-/-细胞模型:根据课题组前期研究确定慢病毒载体的序列,慢病毒spag6-sh RNA和NC-sh RNA分别转染SKM-1细胞,荧光显微镜镜下观察转染后SKM-1细胞的绿色荧光的表达情况,流式细胞术检测转染率,利用q RT-PCR和western blot验证spag6沉默效果。2.探讨spag6沉默对PTEN表达和启动子甲基化的影响:MSP检测5种血液系统恶性疾病的细胞株和spag6沉默和过表达组中PTEN的启动子甲基化情况,western blot和q RT-PCR检测spag6-sh RNA和NC-sh RNA组的PTEN和甲基化相关的基因的表达。3.探讨spag6沉默和去甲基化药物地西他滨对SKM-1细胞凋亡和存活率的影响:SKM-1细胞用不同浓度的地西他滨处理72h或组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589处理48h,流式细胞术检测SKM-1细胞的凋亡率,利用CCK-8检测细胞药物处理后OD值计算细胞存活率,western blot检测凋亡相关蛋白的表达。4.明确spag6沉默和地西他滨处理对SKM-1细胞中PTEN的启动子甲基化的影响:Western blot检测不同浓度地西他滨处理后PTEN的表达和甲基化调控相关蛋白的表达,后分组地西他滨/地西他滨联用LBH589处理NC-sh RNA或spag6-sh RNA,共6组,western blot检测各组的PTEN表达,MSP检测PTEN启动子甲基化水平。5.探讨spag6沉默和地西他滨处理对SKM-1细胞的凋亡和PTEN去甲基化的体内影响:构建NOD/SCID小鼠异体移植瘤模型,观察小鼠荷瘤后肿瘤的生长情况,western blot检测肿瘤组织中甲基化相关的指标和PTEN表达情况,MSP检测不同处理组中PTEN启动子甲基化的水平,免疫组化检测小鼠肿瘤组织PTEN、spag6和DNMT1的表达情况。结果:***6-/-的SKM-1细胞模型被成功构建,转染后3天,流式细胞术检测转染率,阴性对照组和干扰组均大于80%。Western blot和q RT-PCR结果提示干扰组的spag6的蛋白和m RNA水平均较对照组降低,表明spag6被成功沉默。***6基因沉默后,SKM-1细胞中干扰组的PTEN蛋白和m RNA水平的表达上调,同时发现甲基化相关DNMT1、DNMT3A和MBD2表达降低,而DNMT3B和Me CP2的表达无明显差异;MSP结果提示PTEN启动子在K562、THP-1、HL60、HEL和SKM-1细胞株中呈现高甲基化状态,且在SKM-1中spag6沉默能够一定程度上降低PTEN的启动子甲基化。3.地西他滨和LBH589不同药物浓度处理SKM-1细胞后,CCK-8结果提示两种药物均可降低细胞的存活率,流式细胞术检测凋亡结果提示地西他滨和LBH589可诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加而凋亡率升高,western blot结果提示地西他滨处理后Caspase-3、Cleaved Caspase-3和Cleaved PARP、Bad表达上调,Bcl2表达降低,而PARP表达无明显变化,提示spag6沉默可能增加地西他滨的凋亡诱导作用。4.地西他滨不同浓度处理后SKM-1细胞中PTEN的表达量增加,而DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达量则降低,MSP结果提示LBH589单药处理对PTEN启动子甲基化无明显作用,而地西他滨单独使用或联用LBH589则能明显降低PTEN启动子的甲基化水平,同时spag6沉默和LBH589能够增加地西他滨诱导的DNMT表达降低的程度和PTEN去甲基化的水平。5.分离小鼠异体移植瘤的肿瘤组织,计算体积,结果提示干扰组的肿瘤体积较阴性对照组小,而地西他滨处理组的肿瘤体积小于安慰剂组,且经地西他滨处理后的干扰组肿瘤组织体积未各组中最小。免疫组化的结果提示地西他滨处理组和干扰组的PTEN表达升高而DNMT1的表达降低。而western blot检测结果提示地西他滨处理组的Caspase-3、Cleaved Caspase-3、PTEN表达增加,而DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达降低;小鼠肿瘤组织的MSP结果提示地西他滨能够降低PTEN启动子的甲基化程度,而spag6沉默联合地西他滨处理组的PTEN去甲基化水平明显低于两者单独作用。结论:spag6基因沉默可以增加抑癌基因PTEN的表达,地西他滨处理可以增加SKM-1细胞的凋亡且降低PTEN的启动子甲基

关键词：骨髓增生异常综合征(MDS) spag6 PTEN 甲基化细胞凋亡

spag6、DNAH6和DNAH10基因突变导致精子鞭毛多发形态异常（MMAF）的分子机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

SPAG6、DNAH6和DNAH10基因突变导致精子鞭毛多发形态异常（MMAF）...

作者：邵忠梅安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:弱畸精子症是指精液中精子活力和正常精子形态低于参考值,是男性不育主要原因之一。精子鞭毛多发形态异常(MMAF)是精子鞭毛出现多种异常形态,是弱畸精子症中的一种严重类型。spag6是鞭毛和纤毛轴丝中央二联管的一种主要组份,轴丝... 详细信息

目的:弱畸精子症是指精液中精子活力和正常精子形态低于参考值,是男性不育主要原因之一。精子鞭毛多发形态异常(MMAF)是精子鞭毛出现多种异常形态,是弱畸精子症中的一种严重类型。spag6是鞭毛和纤毛轴丝中央二联管的一种主要组份,轴丝结构在鞭毛和纤毛进化过程中中高度保守。spag6基因突变会造成精子轴丝中央微管缺失,表现为典型的MMAF形式。DNAH6和DNAH10是轴丝动力蛋白重链基因,是外周二联管上内动力蛋白臂的组成成分。它们的变异会造成精子鞭毛及头部的多种形态畸形。我们旨在研究spag6基因突变造成MMAF表型的致病机制,DNAH6和DNAH10基因突变造成精子头部和鞭毛缺陷的机制,以及这些基因突变患者的临床结局及最佳治疗方案,为男性不育患者遗传咨询提供临床依据。方法:我们利用全外显子测序(WES)对男性不育患者的外周血测序,通过生物信息学分析基因突变位点在国际千人基因组计划(1KGP)和基因组聚合数据库(gnom AD)中的等位基因突变频率,并利用计算机技术在SIFT、Poly Phen-2和Mutation Taster平台分析突变位点的有害性。然后通过Sanger测序进行家系共分离验证,最终确定突变基因。根据WHO指南分析患者的精液参数,应用常规的苏木素和伊红染色法、扫描电子显微镜(SEM)和高倍的透射电子显微镜(TEM)观察患者的精子形态以及分析精子横切面和纵切面超微结构的改变。运用免疫荧光染色方法分析与精子结构组成相关蛋白的表达量及表达定位的变化,提取精子蛋白利用蛋白免疫印迹实验分析精子鞭毛和顶体相关蛋白的在变异个体精子中的表达量变化。突变患者采用卵胞浆单精子注射(ICSI)方法进行辅助治疗,统计ICSI及临床妊娠结局。结果:我们在两个家系中鉴定出两个spag6纯合变异,在三个家系中鉴定DNAH6基因三个新的变异,还在另外三个家系中鉴定出DNAH10的三个新的变异。这些突变位点在公共数据库中突变频率很低或不存在,功能预测发现都是有害突变。精液常规分析,这些患者的精子前向运动力严重降低,尤其spag6突变患者的精子前向运动为0。所有患者的精子鞭毛形态异常与典型的MMAF表型一致,且在DNAH6/10突变患者中精子头部绝大部分为无定型。通过透射电镜,观察到spag6突变患者精子轴丝中央微管缺失;DNAH6变异患者的精子头部有空泡和精子顶体缺陷,而精子鞭毛结构主要是内动力蛋白臂和径向辐条的缺失,伴有轴丝周围结构的紊乱;DNAH10突变患者精子头部畸形,顶体缺失、头部有多个空泡以及纤维鞘排列异常紊乱。蛋白实验分析显示在spag6突变患者中其蛋白水平降低;DNAH6突变患者中与精子鞭毛相关的蛋白DNAH1、DNAI2、spag6、AKAP4和RSPH1含量均显著降低;DNAH10突变患者中精子鞭毛相关蛋白仅DNAH1和RSPH1表达量明显下降,DNAI2和spag6表达量没有明显变化;DNAH6/10变异个体中顶体相关蛋白ACTL7A和Acrosin严重缺陷。经过ICSI治疗后,两名具有典型MMAF表型的严重弱畸精子症的spag6突变的患者、一名携带DNAH6突变的不育患者和两名携带DNAH10突变的男性不育患者都成功怀孕。结论:我们的研究结果表明spag6变异影响轴丝中央微管的形成,从而导致具有MMAF表型的弱畸精子症。DNAH6突变和DNAH10突变造成精子头部和鞭毛出现异常,扩大了男性不育的遗传谱。同时,证明了不孕不育夫妇中由男性因素导致的不育,ICSI是临床治疗的有效手段。

关键词：男性不育弱畸精子症 spag6 DNAH6 DNAH10

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

spag6相互作用蛋白的酵母双杂交筛选

SPAG6相互作用蛋白的酵母双杂交筛选

作者：平光伦武汉科技大学

学位级别：硕士

目的：构建重组spag6-PGBKT7质粒，用Yeast-2-Hybriy实验来筛选出与spag6有相互作用的蛋白。方法：1.在“PubMed”数据库，寻找小鼠spag6全长碱基序列，分析spag6的活性区域（CDS区）;2.以小鼠睾丸的cDNA为模板，通过PCR技术扩增spag6序... 详细信息

目的：构建重组spag6-PGBKT7质粒，用Yeast-2-Hybriy实验来筛选出与spag6有相互作用的蛋白。方法：1.在“PubMed”数据库，寻找小鼠spag6全长碱基序列，分析spag6的活性区域（CDS区）;2.以小鼠睾丸的cDNA为模板，通过PCR技术扩增spag6序列;***克隆;4.构建spag6/PGBKT7重组质粒;5.将spag6/PGBKT7质粒转入AH109细胞以spag6/PGBKT7为饵，使其与小鼠cDNA文库，进行酵母双杂交;6.提取酵母质粒;7.酵母质粒转化;8.测序后分析。结果：构建重组的spag6/PGBKT7质粒通过鉴定，结果正确;酵母双杂交实验，初步筛选出数个与spag6可能发生相互作用的蛋白。结论：有许多蛋白与spag6有着相互作用。为进一步研究与spag6发生相互作用的蛋白提供依据。

关键词： spag6 酵母双杂交相互作用蛋白筛选

spag6介导p27kip1的胞质定位及磷酸化调控卵巢癌细胞增殖与凋亡

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

SPAG6介导p27kip1的胞质定位及磷酸化调控卵巢癌细胞增殖与凋亡

作者：吕灵璐武汉科技大学

学位级别：硕士

目的:探究精子相关抗原6(spag6)对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响及其调控机制。方法:RT-q PCR法检测人正常卵巢上皮细胞NOE-71和人卵巢上皮癌细胞OVCAR-3、SKOV-3细胞中spag6基因的表达。将4种潜在抑制spag6基因表达的“spag6-sh RNA”质... 详细信息

目的:探究精子相关抗原6(spag6)对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响及其调控机制。方法:RT-q PCR法检测人正常卵巢上皮细胞NOE-71和人卵巢上皮癌细胞OVCAR-3、SKOV-3细胞中spag6基因的表达。将4种潜在抑制spag6基因表达的“spag6-sh RNA”质粒转染至SKOV-3细胞中,RT-q PCR和Western blot实验筛选有效抑制spag6基因表达的细胞株。通过平板克隆、细胞生长实验、细胞划痕实验、Transwell实验等检测抑制spag6基因表达对SKOV-3细胞的增殖、迁移以及侵袭能力的影响。采用免疫荧光和Western blot观察对照组和spag6表达抑制组细胞中细胞周期调控蛋白p27的表达与定位。将p27表达质粒“p EGFPN2-p27”和spag6表达质粒“p En MCV-spag6”共转染至HEK293T细胞,免疫荧光观察spag6和p27蛋白在细胞中的定位,分析spag6对细胞内p27定位的影响。Western blot法检测对照组和spag6表达抑制组细胞中PTEN、p-AKT、p-Thr157-p27、Caspase-9、cleaved Caspase-3等蛋白的表达水平;用PI3K抑制剂处理上述两组细胞,Western blot检测细胞中spag6、PTEN、p-AKT、p-Thr157-p27、cleaved Caspase-3等蛋白的表达水平。结果:spag6 m RNA在卵巢癌细胞SKOV-3和OVCAR-3中的表达均显著高于正常卵巢上皮细胞NOE-71,且在SKOV-3细胞中表达最强,因此后续主要用SKOV-3细胞开展实验。RT-q PCR和Western blot结果显示“spag6-sh3”和“spag6-sh4”组SKOV-3细胞中spag6表达抑制的效率最高。与对照组细胞相比,抑制spag6表达显著降低SKOV-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力(Pspag6表达后p27却在细胞核中高表达。在单独转染p27表达质粒的HEK293T细胞中,p27于细胞核中高表达而细胞浆中几乎未见表达;当spag6与p27表达质粒共转染时,p27除了在细胞核中有表达之外,在细胞浆中也有丰富表达。Western blot实验结果显示,与对照组细胞相比,“spag6-sh3”和“spag6-sh4”组SKOV-3细胞中PTEN、Caspase-9、cleaved Caspase-3的表达水平升高,p-AKT和p-Thr157-p27的表达水平降低,且差异具有统计学意义(Pspag6-sh4”组细胞加入PI3K抑制剂后,spag6表达无变化,而PTEN、cleaved Caspase-3蛋白表达进一步升高,p-AKT、p-Thr157-p27蛋白表达进一步降低(Pspag6低表达能降低卵巢癌细胞SKOV-3的增殖、生长、迁移以及侵袭能力;在卵巢癌细胞SKOV-3中,spag6能介导p27的胞浆定位,同时通过PTEN/PI3K/AKT信号通路介导p27蛋白氨基酸位点Thr157发生磷酸化和抑制细胞凋亡来影响SKOV-3细胞的增殖。

关键词： spag6 人卵巢上皮癌细胞 p27kip1 PTEN/PI3K/AKT通路增殖

猪睾丸ACE启动子驱动的spag6 shRNA真核表达载体的构建

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 224-230页

作者：张燕迪顾涛涛任红艳毕延震方桂杰湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室湖北武汉430064 湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室湖北武汉430068

本文旨在研究猪睾丸ACE启动子驱动的spag6 shRNA在猪睾丸支持细胞(ST)中的干扰作用。利用PCR法从ST细胞基因组中扩增猪睾丸ACE启动子,构建重组质粒ACE-pIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic,通过红色荧光蛋白表达和双荧光素酶报告基因检测试验... 详细信息

本文旨在研究猪睾丸ACE启动子驱动的spag6 shRNA在猪睾丸支持细胞(ST)中的干扰作用。利用PCR法从ST细胞基因组中扩增猪睾丸ACE启动子,构建重组质粒ACE-pIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic,通过红色荧光蛋白表达和双荧光素酶报告基因检测试验检测猪睾丸ACE启动子在ST细胞中的转录活性;根据spag6 mRNA靶序列设计合成3条siRNA序列,通过脂质体转染至ST细胞,利用实时荧光定量PCR及Western Blot检测siRNA的干扰效率;基于人miR-30a结构设计spag6 shRNA,构建重组载体ACE-sh-spag6-pcDNA3.1,Western Blot检测其对spag6的干扰效果。结果表明,成功构建重组质粒ACEpIRES2-DsRed、ACE-pGL3-basic,并证明猪睾丸ACE启动子在ST细胞中具有较强的转录活性;各试验组均能对靶基因spag6 mRNA的表达产生抑制作用,以siRNA-3的作用最佳。siRNA-3转染48 h后,spag6蛋白表达量显著下降(Pspag6基因的最佳干扰序列;成功构建重组质粒ACE-shspag6-pcDNA3.1,转染ST细胞48h后spag6蛋白表达量较阴性对照组显著下调(Pspag6 shRNA真核表达载体,并在ST细胞中验证了其具有较好的干扰效果。

关键词： spag6 ACE siRNA shRNA 基因表达

维普期刊数据库博看期刊

西玛津调控spag6介导AP-1转录活性对小鼠生精细胞凋亡的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代预防医学 2020年第22期47卷 4155-4159页

作者：柳赟昊田清熒邹心宇张文捷贾玉冰汪利芳张志兵张玲武汉科技大学医学院公共卫生学院/环境卫生与职业医学系/职业危害识别与控制湖北省重点实验室

目的研究与探讨西玛津对小鼠精母细胞(GC-2 spd)增殖的影响及作用机制。方法 COS-7细胞共转染pAP1-luc和spag6基因的表达质粒,荧光素酶报告基因实验检测spag6对AP-1转录活性的影响。以不同浓度西玛津(0、5、25、125μg/mL)染毒GC-2 spd... 详细信息

目的研究与探讨西玛津对小鼠精母细胞(GC-2 spd)增殖的影响及作用机制。方法 COS-7细胞共转染pAP1-luc和spag6基因的表达质粒,荧光素酶报告基因实验检测spag6对AP-1转录活性的影响。以不同浓度西玛津(0、5、25、125μg/mL)染毒GC-2 spd细胞24、48和72 h,采用CCK-8法检测细胞存活率。西玛津染毒24 h后,western blot检测spag6和COPS5蛋白的表达变化,qPCR检测促凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl-2 m RNA的表达。结果COS-7细胞内过表达spag6能抑制AP-1的转录活性。与对照组比较,25和125μg/mL西玛津染毒组中GC-2 spd细胞存活率、细胞内spag6蛋白及Bax mRNA的表达水平均下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论西玛津对GC-2 spd细胞具有毒性作用,可能通过抑制spag6蛋白表达从而调节AP-1介导的凋亡基因的表达,诱导生精细胞凋亡。

关键词：西玛津 spag6 AP-1转录活性细胞凋亡