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LncRNA sox21-AS1调控sox21表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

中国老年学杂志 2023年第23期43卷 5780-5786页

作者：王春梅吴德慧康燕魏顺英马登云青海红十字医院妇一科青海西宁810000 青海红十字医院妇五科青海西宁810000 青海红十字医院妇二科青海西宁810000 青海红十字医院病理科青海西宁810000

目的探讨长链非编码RNA sox21反义RNA1(LncRNA sox21-AS1)调控sox21对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法利用qRT-PCR检测83例宫颈癌患者癌组织及不同宫颈癌细胞系C33a、SiHa、HeLa、ME180中sox21-AS1表达水平;取对数期的HeLa细胞... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA sox21反义RNA1(LncRNA sox21-AS1)调控sox21对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法利用qRT-PCR检测83例宫颈癌患者癌组织及不同宫颈癌细胞系C33a、SiHa、HeLa、ME180中sox21-AS1表达水平;取对数期的HeLa细胞,分组为空白组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-sox21-AS1组、si-NC组、si-sox21-AS1组、OE-NC组、OE-sox21组、si-sox21-AS1+OE-NC组、si-sox21-AS1+OE-sox21组,CCK-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭与迁移;RNA pull-down和RNA免疫沉淀(RIP)检测sox21-AS1与sox21蛋白之间是否结合;Western印迹检测各组细胞中sox21蛋白表达。结果sox21-AS1在宫颈癌组织和细胞系C33a、SiHa、HeLa、ME180中高表达,且sox21-AS1在HeLa细胞中表达量最高,因此,选择HeLa细胞为研究对象;与空白组、pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-sox21-AS1组细胞中sox21-AS1表达水平、在同一时间点的OD450值(24、48 h)、细胞侵袭数目、细胞迁移数目显著升高(Psox21-AS1组HeLa细胞中sox21-AS1表达水平、在同一时间点的OD450值(24、48 h)、细胞侵袭数目、细胞迁移数目显著降低(Psox21-AS1上调sox21表达;与空白组、OE-NC组比较,OE-sox21组细胞中sox21蛋白表达水平、在同一时间点的OD450值(24、48 h)、细胞侵袭数目、细胞迁移数目显著升高(Psox21-AS1组、si-sox21-AS1+OE-NC组比较,si-sox21-AS1+OE-sox21组HeLa细胞中sox21蛋白表达水平、在同一时间点的OD450值(24、48 h)、细胞侵袭数目、细胞迁移数目显著升高(Psox21-AS1通过上调sox21表达促进HeLa细胞增殖、侵袭及迁移。

关键词：长链非编码RNA sox21反义RNA1 sox21 宫颈癌细胞增殖细胞侵袭细胞迁移

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持续埋植褪黑激素对绒相关基因SOX21、Noggin、BMP4表达影响的研究

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作者：冯林内蒙古农业大学

学位级别：硕士

本试验主要以与次级毛囊衰退功能相关的sox21、BMP4、Noggin基因为研究对象,通过对内蒙古白绒山羊持续两年埋植褪黑激素的方法研究褪黑激素对内蒙古白绒山羊皮肤中绒相关基因sox21、BMP4、Noggin基因表达量的相对变化,进而了解这三个基... 详细信息

本试验主要以与次级毛囊衰退功能相关的sox21、BMP4、Noggin基因为研究对象,通过对内蒙古白绒山羊持续两年埋植褪黑激素的方法研究褪黑激素对内蒙古白绒山羊皮肤中绒相关基因sox21、BMP4、Noggin基因表达量的相对变化,进而了解这三个基因的功能以及褪黑激素对其影响,以期通过对绒的不同生长周期变化的研究揭示绒的生长机理。荧光定量PCR数据处理分析,得到以下结果: 1.经SPSS17.0统计分析发现不同年龄、不同个体相同处理组间差异不显著（P＞0.05）,说明年龄和个体差异对本实验的影响很小或不明显。 2.两年持续埋植褪黑激素对在绒山羊皮肤中表达量的改变影响与一年埋植的影响趋势基本一致但较一年处理组平缓,表明两年持续埋植可以降低受试羊的应激,有利于稳定褪黑激素的作用。 3.褪黑激素对sox21基因表达的影响主要在毛囊的休止期与生长前期,而对生长后期影响不显著;对BMP4休止期表达量的影响差异不显著（P＞0.05）,对生长期有显著影响（P＜0.05）;对Noggin基因在1、2、3、10月份皮肤中的表达量基本没有变化,而在其他各月份都发生不同程度的改变,特别是在4月份有一个比较明显的上调。 4.埋植褪黑激素对BMP4、Noggin相互作用影响的差异不显著（P＞0.05）。 5.埋植褪黑激素的羊在3月下旬到4月初出现脱绒现象,同时处理组有较对照组提前将近2个月诱发二次生绒现象出现,而在这时期三个基因的表达量都有明显改变,经SPSS17.0统计分析差异显著,同时结合生产实际与三基因表达量的改变情况,说明埋植褪黑激素与促进脱绒和实现二次生绒的功能相关。

关键词：绒山羊 sox21 BMP4 Noggin 褪黑激素

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sox21在胃癌中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用

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西部医学 2021年第9期33卷 1284-1289,1295页

作者：李丽萍贾筠蔡永昌赖庆君彭尧东莞市人民医院肿瘤内科四区广东东莞523059 东莞市人民医院肿瘤内科广东东莞523059 东莞市人民医院胃肠外科广东东莞523059 广州医科大学基础医学院广东广州510095

目的探讨性别决定区Y-BOX21(sox21)在胃癌(GC)中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用。方法收集2016年4月~2017年5月于东莞市人民医院行胃癌根治术患者的癌组织及对应的癌旁组织各44例,以胃癌细胞株AGS和人胃粘膜上皮细胞株GES-1... 详细信息

目的探讨性别决定区Y-BOX21(sox21)在胃癌(GC)中的表达和甲基化状态及对体外胃癌细胞的作用。方法收集2016年4月~2017年5月于东莞市人民医院行胃癌根治术患者的癌组织及对应的癌旁组织各44例,以胃癌细胞株AGS和人胃粘膜上皮细胞株GES-1为进一步研究对象,将培养后的细胞分为空白对照组、NC组和sox21组,甲基化特异性PCR检测sox21甲基化状态;qRT-PCR、免疫组化(IHC)和Western blot检测sox21和Wnt/β-catenin通路相关基因表达;CCK-8试剂盒和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。结果与癌旁组织相比,GC组织sox21甲基化率明显升高(Psox21 IHC评分、mRNA表达和蛋白表达均明显降低(Psox21在GES-1细胞中呈去甲基化状态,而在AGS中呈完全甲基化状态。与GES-1细胞相比,AGS细胞中sox21 mRNA和蛋白表达均显著降低(Psox21组中sox21 mRNA表达、蛋白表达和细胞凋亡率明显升高(Psox21在胃癌组织中呈高甲基化状态且表达降低,过表达sox21可能通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

关键词：胃癌 sox21 甲基化 Wnt/β-catenin通路

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sox21-AS1及sox21在宫颈癌中的表达及临床意义

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国际遗传学杂志 2021年第2期44卷 67-72页

作者：智艳芳杜沛霈张婷刘慧班振英曾宪旭李肖甫郑州大学第三附属医院病理科郑州大学第三附属医院检验科

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) sox21-AS1及sox21在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法收集宫颈脱落细胞学标本共43例,其中正常23例,宫颈癌20例。采用实时定量聚合酶链反应( real-time quantitative polymerase cha... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) sox21-AS1及sox21在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法收集宫颈脱落细胞学标本共43例,其中正常23例,宫颈癌20例。采用实时定量聚合酶链反应( real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测所有标本中sox21-AS1及sox21的表达水平,分析sox21-AS1及sox21的表达水平与宫颈癌患者临床病理特征的关系及其对宫颈癌的诊断价值。结果宫颈癌组sox21-AS1和sox21的表达水平均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.000)。相关分析显示,sox21-AS1与sox21的表达量呈显著正相关(P=0.000)。sox21-AS1与sox21的lncRNA表达量均随年龄增大、FIGO分期增高、出现淋巴结转移及浸润深度增加而增高,其中sox21-AS1表达量与淋巴结转移及FIGO分期增高关系最密切(P=0.001;P=0.025);sox21表达量与FIGO分期增高关系密切(P=0.027)。与之相反,sox21-AS1随组织学分级增高表达下降,组间差异有统计学意义(P=0.008)。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析sox21-AS1及sox21表达在宫颈癌中诊断价值,结果显示:二者曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.911(95%CI:0.826～0.996)和0.946(95%CI:0.879～1.000)(P=0.000);敏感性分别为70%和95%,特异性分别为100%和87%。结论 sox21-AS1及sox21在宫颈癌中异常高表达,对宫颈癌具有一定的诊断价值,有望成为宫颈癌诊疗新的生物标志物。

关键词：长链非编码RNA sox21-AS1 sox21 宫颈癌

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长链非编码RNA sox21AS1在胃癌发生发展中的作用及主要机制的探讨

长链非编码RNA SOX21AS1在胃癌发生发展中的作用及主要机制的探讨

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作者：毛玉娣安徽医科大学

学位级别：硕士

目的胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,目前仍缺乏有效的治疗措施,为了寻找新的胃癌生物标记物及有效的治疗靶点,在分子层面探索胃癌的发病机制非常重要。近年来,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在胃癌中的作用受到广泛关... 详细信息

目的胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,目前仍缺乏有效的治疗措施,为了寻找新的胃癌生物标记物及有效的治疗靶点,在分子层面探索胃癌的发病机制非常重要。近年来,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在胃癌中的作用受到广泛关注。本研究主要研究lnc RNA基因表达谱在胃黏膜炎症恶性转变至胃癌过程中的变化,以及筛选出的lnc RNA sox21AS1对胃癌细胞生物学行为的影响和主要的作用机制。方法我们首先在安徽省立医院内镜中心收集5例正常胃黏膜组织、5例萎缩胃炎伴肠上皮化生组织、5例进展期胃癌组织及5例癌旁组织,提取各组织总RNA进行lnc RNA+m RNA人类基因芯片检测,筛选出具有差异性表达的lnc RNA,荧光定量PCR检测筛选出的lnc RNA sox21AS1在各组织中的表达情况。然后合成过表达sox21AS1的慢病毒载体转染胃癌细胞AGS和BGC823,构建稳定过表达sox21AS1的细胞株。运用流式细胞技术研究分析过表达sox21AS1的胃癌细胞株细胞周期及凋亡的变化;划痕实验及Transwell实验判断过表达sox21AS1对胃癌细胞迁移能力的影响;以及通过体内异种移植BALB/c裸鼠模型判断过表达sox21AS1对肿瘤生长的影响。最后通过荧光定量PCR和Western bolt实验探索sox21AS1可能的作用机制。结果通过高通量基因芯片分析技术,以倍数变化FC>2且校正后P215个m RNA在萎缩性胃炎组织异常表达,1428个lnc RNA和3035个m RNA在胃癌组织中异常表达。在胃黏膜炎症恶性转变过程中均有变化的lnc RNA有11个,包括p33715,p29027(H19),p7811,p6625(MIR22GH),p1457,p8725(CTD-3064h18.6),p38190-v4,p4300,p43909-v4,p36288-v4,p38901-v4。本研究选择p4300即sox21AS1作为研究对象,通过荧光定量PCR检测各组织中sox21AS1的表达,发现从正常胃黏膜、萎缩性胃炎到胃癌组织中其表达逐渐下调。同时通过成功构建稳定过表达sox21AS1细胞株,体外实验证明了sox21AS1过表达可以使AGS胃癌细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制DNA合成,使细胞分裂增殖减弱,促进胃癌细胞凋亡,抑制胃癌细胞迁移。体内异种移植裸鼠实验显示,过表达sox21AS1可以使裸鼠体内肿瘤生长缓慢(Psox21AS1瘤体的质量(0.16±0.05g)明显低于空白对照(0.91±0.35g)与阴性对照组(0.90±0.30g)。此外,荧光定量PCR结果显示,sox21基因的表达与lnc RNA sox21AS1表达明显正相关(Psox21蛋白表达量逐渐下调,CDX2在此过程中逐渐上调。同时,在细胞水平检测结果证明,过表达sox21AS1的胃癌细胞株中sox21蛋白表达升高,而CDX2蛋白表达量下降。结论lnc RNA sox21AS1作为一个新的潜在的抑癌基因在胃黏膜炎症恶性转变过程发挥重要的作用,它可以通过调节sox21-CDX2通路促进胃癌细胞凋亡、抑制胃癌细胞增殖和迁移,同时可以抑制异种移植裸鼠模型体内肿瘤的生长。在理论上进一步完善lnc RNA肿瘤调控网络,在临床应用方面,为寻找到新的胃癌生物标记物及治疗靶点提供参考。

关键词：长链非编码RNA sox21AS1 胃癌萎缩性胃炎 sox21

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甲基化修饰的长链非编码RNA在宫颈癌中的表达及临床意义

甲基化修饰的长链非编码RNA在宫颈癌中的表达及临床意义

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作者：王蕊杰郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,其发生率和死亡率已占全球女性肿瘤的第四位,尤其在发展中国家更为常见且呈现年轻化趋势。由于我国人口数量巨大,宫颈癌已经逐步成为社会人群健康的重要问题。目前,宫颈癌的病因和发病机制... 详细信息

背景和目的宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,其发生率和死亡率已占全球女性肿瘤的第四位,尤其在发展中国家更为常见且呈现年轻化趋势。由于我国人口数量巨大,宫颈癌已经逐步成为社会人群健康的重要问题。目前,宫颈癌的病因和发病机制尚不十分清楚。人们认为高危型人乳头瘤病毒（High-risk human papillomavirus,HR-HPV）持续感染是宫颈癌发生的重要危险因素,但有证据表明长链非编码基因和DNA甲基化异常引起的表观遗传学改变在宫颈癌的恶性转化过程中也起到了重要作用。另外,在宫颈癌筛查与预防措施中,HR-HPV DNA检测和宫颈液基薄层细胞学检测的联合应用虽然在一定程度上提高了宫颈癌的发现率,但仍存在不及时性及漏检的情况发生,并且晚期或复发性宫颈癌的患者预后较差。因此,基于宫颈癌高发病率和危害性等特点,从宫颈癌新的发病机制着手寻找具有预测潜能的分子标志物进行宫颈癌精准诊断是目前亟待解决的问题。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）是指转录本长度超过200个核苷酸的RNA分子,不具有编码蛋白质功能或仅仅编码较短的多肽链,被认为是基因程序中控制细胞分化和功能的重要组成部分。研究发现,异常表达的lncRNA存在于宫颈病变的不同阶段,其在预测宫颈癌易感性、恶性表型和后等方面具有重要的作用。DNA甲基化是最常见的表观遗传形式之一,其在调控基因组的稳定性和基因表达方面起着重要作用,尤其是基因启动子区DNA甲基化异常修饰是基因功能异常和肿瘤微环境改变的重要机制。近年来研究发现,DNA甲基化是多阶段肿瘤进展中最常见的早期分子事件,并且长链非编码基因在宫颈癌的发生发展中也发生了 DNA甲基化的异常修饰,这种表观遗传学改变与宫颈病变程度有一定相关性。因此,识别具有启动子区甲基化异常修饰的lncRNA对宫颈癌早期诊断具有重要意义,这将为宫颈癌的精准诊疗提供一种新的思路。方法1.全基因组DNA甲基化芯片筛选宫颈癌与正常宫颈脱落细胞中的差异甲基化位点;2.分析筛选出的差异甲基化位点在基因上的位置分布;3.分析国际癌症基因图谱计划（The Cancer Genome Altas,TCGA）数据库中宫颈癌与正常组织中具有表达差异的长链非编码基因与编码基因;4.采用加权基因共表达网络分析（Weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）筛选具有潜在功能的lncRNA;5.韦恩分析宫颈癌中具有潜在功能的启动子区甲基化位点差异修饰的lncRNA;6.基于甲基化芯片与TCGA数据库分析候选长链非编码基因在宫颈癌中的甲基化差异位点表达与转录组水平表达;7.基于TCGA数据库分析候选lncRNA与宫颈癌预后的关系;8.分析lncRNA sox21-AS1基因与靶基因sox21在染色体的定位及二者在宫颈癌中表达的相关性;9.基因集合富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）lncRNA sox21-AS1在宫颈癌中可能参与的生物进程。结果1.聚类分析结果显示,与正常宫颈脱落细胞相比,宫颈癌中有3962个高甲基化表达的位点和4484个低甲基化表达的位点（丨△ β |≥0.20）;2.局部多项式回归拟合（Loess）结果显示,宫颈癌标本与正常组相比,转录起始位点TSS与TSS1500区域间甲基化β值表达差异较大;宫颈癌样本中差异甲基化位点主要分布在甲基化岛;3.生物信息学分析表明在TCGA宫颈癌组织样本中有363个表达上调的lncRNAs和664个表达下调的lncRNAs;1631个表达上调的mRNAs和2114个表达下调的 mRNAs（log2（fold change）≥1.00和FDR＜0.05）;4.WGCNA结果显示宫颈癌中与mRNA相互作用的lncRNA有50个;5.韦恩图显示具有潜在功能的启动子区甲基化位点差异修饰的候选长链非编码基因分别是 lncRNAMAGI2-AS3、lncRNA WT1-AS 和 lncRNA sox21-AS1;6.宫颈癌组织中,lncRNA MAGI2-AS3基因表达降低,其启动子区甲基化位点 cg04652097、cg08641579、cg21784917 甲基化的表达水平均升高（P＜0.01）;lncRNA WT1-AS基因表达降低,其启动子区甲基化位点cg12766736、cg07281879、cg25247290甲基化的表达水平均升高（P＜0.01）;相反的是,lncRNA sox21-AS1基因表达升高,其启动子区甲基化位点cg11007120甲基化的表达水平降低（P＜0.05）;7.Kaplan-Meier 生存分析显示 lncRNA MAGI2-AS3 和 lncRNA WT1-AS 基因与宫颈癌预后无关（P＞0.05）;lncRNA sox21-AS1在宫颈癌中高表达时患者预后良好（

关键词：宫颈癌长链非编码RNA DNA甲基化 LncRNA sox21-AS1 sox21 预后

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