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塔斯品碱衍生物对人肝癌smmc7721细胞生长的抑制作用研究

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中药材 2011年第7期34卷 1094-1097页

作者：张彦民王楠代秉玲贺浪冲西安交通大学医学院陕西西安710061

目的:分析探讨塔斯品碱衍生物对人肝癌smmc7721细胞的生长抑制作用,研究其作用机制。方法:采用MTT法测定5种塔斯品碱衍生物对肝癌smmc7721细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测Tas-D1对肝癌smmc7721细胞周期的影响,ELISA法测定Tas-D1对肝... 详细信息

目的:分析探讨塔斯品碱衍生物对人肝癌smmc7721细胞的生长抑制作用,研究其作用机制。方法:采用MTT法测定5种塔斯品碱衍生物对肝癌smmc7721细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测Tas-D1对肝癌smmc7721细胞周期的影响,ELISA法测定Tas-D1对肝癌smmc7721细胞EGF和VEGF蛋白的影响,PCR法测定Tas-D1对EGF和VEGF的mRNA水平的影响。结果:塔斯品碱衍生物Tas-D1对smmc7721细胞生长具有明显的抑制作用,使细胞阻滞在S期,呈现出良好的剂量依赖性。ELISA法和RT-PCR法结果表明Tas-D1对smmc7721细胞的EGF和VEGF蛋白质的表达和mRNA的表达有一定的抑制作用(Psmmc7721细胞的生长,转换细胞周期,初步作用机制主要为Tas-D1抑制smmc7721细胞EGF和VEGF的表达。

关键词：塔斯品碱衍生物 smmc7721细胞生长抑制表达

过表达PRRX1通过p53介导的线粒体凋亡途径诱导肝癌smmc7721细胞凋亡

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第6期26卷 662-668页

作者：尹东亮卢沛林尹润龙黄会杰林志强东莞市人民医院肝胆外科广东东莞523059 东莞市人民医院病理科广东东莞523059

目的:探讨配对相关同源框1蛋白(PRRX1)过表达对肝癌smmc7721细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:分别用慢病毒介导PRRX1过表达载体(pGMLV-PRRX1)、空载质粒(Vector)感染人肝癌smmc7721细胞,用qPCR和WB实验检测慢病毒感染后细胞中PRRX1 m... 详细信息

目的:探讨配对相关同源框1蛋白(PRRX1)过表达对肝癌smmc7721细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:分别用慢病毒介导PRRX1过表达载体(pGMLV-PRRX1)、空载质粒(Vector)感染人肝癌smmc7721细胞,用qPCR和WB实验检测慢病毒感染后细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达变化,用CCK-8法、Annexin-V FITC/PI染色流式细胞术分别检测PRRX1过表达对smmc7721细胞增殖、凋亡的影响,用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10染色法)检测细胞线粒体膜电位变化,用caspase活性检测试剂盒(分光光度法)测定细胞中caspase-8和caspase-9酶活性,用WB实验检测细胞中p53、Bcl-2、Bax、Fas、Cleaved-caspase-3以及线粒体和细胞质中细胞色素C(Cty C)蛋白的表达。结果:成功构建PRRX1过表达的smmc7721细胞株,感染细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达水平显著升高(均Psmmc7721细胞的增殖能力显著下降、细胞凋亡率显著增高、Cleaved-caspase-3剪切水平显著升高、线粒体膜电位显著下降、线粒体中Cty C蛋白表达下调、胞质中Cty C蛋白表达上调以及caspase-9酶活性升高(P0.05)。结论:PRRX1过表达可诱导肝癌smmc7721细胞凋亡,其机制可能与p53介导的线粒体凋亡途径被激活有关。

关键词：配对相关同源框1蛋白肝癌 smmc7721细胞 p53 线粒体凋亡

新磺酰脲药物BGW刺激smmc7721细胞对葡萄糖的吸收

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中国病理生理杂志 2009年第5期25卷 955-958页

作者：王国光段海峰张根葆吴祖泽皖南医学院病理生理教研室安徽芜湖241000 军事医学科学院放射医学研究所北京100850

目的:观察新磺酰脲药物1-{4-[2-(3-乙基-4-甲基-2-氧-3-吡咯啉-1-甲酰胺基)乙基]-苯磺酰基}-3-(1,4-四亚甲基)脲(BGW)刺激smmc7721细胞对葡萄糖的吸收作用及对葡萄糖吸收相关酶蛋白激酶B(PKB/Akt)活性的影响。方法:体外培养smmc7721细胞... 详细信息

目的:观察新磺酰脲药物1-{4-[2-(3-乙基-4-甲基-2-氧-3-吡咯啉-1-甲酰胺基)乙基]-苯磺酰基}-3-(1,4-四亚甲基)脲(BGW)刺激smmc7721细胞对葡萄糖的吸收作用及对葡萄糖吸收相关酶蛋白激酶B(PKB/Akt)活性的影响。方法:体外培养smmc7721细胞,设计对照组、格列苯脲、胰岛素、BGW和BGW+胰岛素刺激组,利用液闪计数法检测smmc7721细胞对葡萄糖的吸收作用;用Western blotting法检测蛋白激酶B的活性变化。结果:与对照组比较,格列苯脲、胰岛素、BGW及BGW+胰岛素均可显著增加smmc7721细胞对葡萄糖的吸收(P细胞内的Akt磷酸化水平。结论:BGW具有刺激葡萄糖吸收以及促进胰岛素的作用,可作为糖尿病治疗的潜在药物。

关键词：葡萄糖蛋白激酶B 磺酰脲 smmc7721细胞

壁虎多肽混合物对肝癌smmc7721细胞增殖及其自噬的影响

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中国临床药理学杂志 2017年第9期33卷 798-801页

作者：靳颖刘玲段冷昕郭梦丽段一梦王建刚河南科技大学医学院药理学与分子生物学实验室河南洛阳471000

目的研究壁虎多肽混合物(GPM)对人肝癌smmc7721细胞自噬的影响。方法取对数生长期细胞种板,用不同质量浓度的GPM(0,0.04,0.06,0.09,0.14,0.20,0.30,0.45 mg·m L^(-1))处理smmc7721细胞24 h,通过噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖,根据MTT... 详细信息

目的研究壁虎多肽混合物(GPM)对人肝癌smmc7721细胞自噬的影响。方法取对数生长期细胞种板,用不同质量浓度的GPM(0,0.04,0.06,0.09,0.14,0.20,0.30,0.45 mg·m L^(-1))处理smmc7721细胞24 h,通过噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖,根据MTT结果,分别作为正常组(0)、低中高3个质量浓度(GPM:0.1,0.15,0.22 mg·m L^(-1))实验组,对照组(西罗莫司40μg·m L^(-1))。经单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察不同质量浓度GPM对smmc7721细胞自噬的影响;免疫组化法检测细胞内Beclin1及LC3表达的变化;免疫印迹法检测细胞自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果 GPM可抑制smmc7721细胞的增殖,并具有质量浓度依赖性,作用24 h后其IC50值为0.16 mg·m L^(-1)。GPM处理smmc7721细胞6 h后,在胞质中可见大量自噬小泡的形成,在显微镜下呈亮绿色荧光。正常组、对照组、低中高3个质量浓度实验组Beclin1阳性细胞数占总细胞数的百分比分别为(15.70±0.26)%,(63.47±0.54)%,(17.09±0.37)%,(70.66±0.56)%,(78.48±0.68)%;与正常组相比,对照组与中高2个质量浓度实验组差异有统计学意义(均P细胞数占总细胞数的百分比分别为(35.84±0.36)%,(82.41±0.82)%,(60.83±0.61)%,(69.66±0.70)%,(74.61±0.75)%,与正常组相比,各组差异均具有统计学意义(均Psmmc7721细胞自噬现象的发生,可能通过诱导其自噬而使细胞死亡。

关键词：壁虎多肽混合物 smmc7721细胞自噬

腺病毒介导PSMA3基因过表达对肝癌smmc7721细胞增殖、周期、凋亡及其荷瘤生长的影响

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重庆医科大学学报 2019年第12期44卷 1582-1588页

作者：南映瑜项颖龚奕肖春燕杨涛张文军黄德鸿李启英童永红重庆大学附属肿瘤医院/重庆市肿瘤研究所/重庆市肿瘤医院肿瘤转移与个体化诊治转化研究重庆市重点实验室

目的:构建蛋白酶体亚基α3(proteasome subunit alpha type 3,PSMA3)基因腺病毒重组载体,并观测腺病毒介导PSMA3基因过表达对肝癌smmc7721细胞增殖、周期、凋亡及其荷瘤生长的影响。方法:RT-PCR法扩增PSMA3基因全长CDs序列后,克隆入pTG1... 详细信息

目的:构建蛋白酶体亚基α3(proteasome subunit alpha type 3,PSMA3)基因腺病毒重组载体,并观测腺病毒介导PSMA3基因过表达对肝癌smmc7721细胞增殖、周期、凋亡及其荷瘤生长的影响。方法:RT-PCR法扩增PSMA3基因全长CDs序列后,克隆入pTG19-T载体,再亚克隆入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体中,构建重组pAdTrack/PSMA3腺病毒载体,随后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组形成p Ad/PSMA3重组腺病毒,经包装及滴度测定,获高感染力的pAd/PSMA3病毒。用pAd/PSMA3病毒感染人肝癌smmc7721细胞,荧光显微镜观测被感染的smmc7721细胞的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的变化情况。Cell counting kit-8(CCK-8)法检测pAd/PSMA3病毒对smmc7721细胞增殖的影响。Real-time PCR和Western blot分别检测被感染的smmc7721细胞的PSMA3基因、增殖细胞核抗原基因(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Caspase-3促凋亡基因及其编码蛋白的表达情况。流式细胞仪(FCM)检测被感染的smmc7721的周期、凋亡变化。将经pAd/PSMA3病毒感染的smmc7721细胞移植裸鼠皮下以生成荷瘤,逐日观察荷瘤的生长情况。所有实验以空病毒感染及未感染的细胞做对照。结果:克隆到768 bp的PSMA3基因,并构建了其具高感染力的pAd/PSMA3重组病毒。CCK-8法结果表明,过表达PSMA3基因的smmc7721细胞,其增殖明显减慢(Psmmc7721细胞过表达PSMA3基因,上调其Caspase-3基因及其编码蛋白的表达,并下调其PCNA基因及其蛋白的表达(P细胞可被阻滞于G1期(细胞周期),并可促使其凋亡,其凋亡率差异有统计学意义(Psmmc7721细胞阻滞于G1期(细胞周期),抑制其增殖,促使其凋亡,并可抑制其裸鼠荷瘤的生长,这些可能和下调其增殖相关PCNA蛋白,上调其凋亡相关caspase-3蛋白的表达密切相关。

关键词：蛋白酶体亚基α3 smmc7721细胞增殖凋亡荷瘤

紫杉醇对人肝癌smmc7721细胞NDRG1表达及增值的影响

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生物技术通报 2012年第1期28卷 183-187页

作者：胡汉卿高曰文刘超朱晨宇朱耀明三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院普外科宜昌443002

旨在探索紫杉醇对人肝癌smmc7721细胞NDRG1表达的影响,及紫杉醇对肝癌smmc7721细胞系增殖的抑制作用。分别提取紫杉醇处理前后smmc7721细胞的RNA,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),判断紫杉醇处理前后肝癌细胞中NDRG1表达的情况;采用蛋... 详细信息

旨在探索紫杉醇对人肝癌smmc7721细胞NDRG1表达的影响,及紫杉醇对肝癌smmc7721细胞系增殖的抑制作用。分别提取紫杉醇处理前后smmc7721细胞的RNA,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),判断紫杉醇处理前后肝癌细胞中NDRG1表达的情况;采用蛋白印迹技术(Western blotting)分析紫杉醇处理前后肝癌细胞中NDRG1蛋白表达的情况;应用不同浓度紫杉醇处理肝癌细胞,以MTT法检测处理前后肝癌细胞的抑制率,流式细胞术(FCM)观察细胞周期变化的况。结果表明紫杉醇处理后的肝癌smmc7721细胞中NDRG1表达下降,紫杉醇浓度越高,NDRG1表达水平越低,具有浓度依赖性。以MTT法观察紫杉醇对肝癌细胞的抑制作用,试验结果表明不同浓度的紫杉醇处理肝癌smmc7721细胞后,癌细胞被明显抑制;以流式细胞术观察紫杉醇作用后肝癌smmc7721细胞周期的变化,结果显示G2-M期细胞比例升高的程度随浓度增高而升高,细胞越来越多地被阻滞在G2-M期,不能继续分裂增殖。分化相关基因NDRG1的表达可能是肝癌的发病机制之一,紫杉醇可抑制肝癌smmc 7721细胞中NDRG1的表达;同时紫杉醇能使肝癌smmc7721细胞的生长阻滞在G2-M期,从而显著抑制smmc7721细胞的增殖,并且具有剂量、时间依赖效应。

关键词： smmc7721细胞 NDRG1 紫杉醇细胞增殖

评估20种寒热中药对smmc7721细胞中NADH的影响

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时珍国医国药 2021年第5期32卷 1276-1278页

作者：张宁王思文赵文杰姚方圆孙艳妮刘建利西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室陕西西安710069

目的考察中药寒热药性与能量代谢关键中间体NADH的关系。方法基于NADH的自发荧光,用荧光法在激发波长342 nm、发射波长461 nm下直接测定20种中药对smmc7721细胞中NADH含量的影响,并总结其变化规律。结果吴茱萸、桂枝、独活、蛇床子、木... 详细信息

目的考察中药寒热药性与能量代谢关键中间体NADH的关系。方法基于NADH的自发荧光,用荧光法在激发波长342 nm、发射波长461 nm下直接测定20种中药对smmc7721细胞中NADH含量的影响,并总结其变化规律。结果吴茱萸、桂枝、独活、蛇床子、木香等5味热性中药能使细胞中NADH的荧光强度大幅增强;刺五加、苍术、肉苁蓉、白豆蔻、川乌等5味热药在高浓度(20~50 mg/mL)时也使NADH的荧光值有不同程度的增强;而10种寒性中药在2~50 mg/mL浓度范围内则使细胞中NADH的荧光值有不同程度的减小。结论中药寒热药性与能量代谢的中间体NADH有一定的相关性,为进一步揭示寒热中药影响能量代谢过程的本质及中药寒热药性的本质提供依据。

关键词： NADH 荧光法寒热药性 smmc7721细胞

芍药内酯苷对肝癌smmc7721细胞增殖及凋亡的影响

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芍药内酯苷对肝癌SMMC7721细胞增殖及凋亡的影响

作者：连建安浙江中医药大学

学位级别：硕士

背景与目的肝癌在全球范围内患病率排名第五,死亡率排名第二,其恶性程度极高,预后极差。国际癌症研究机构公布的数据表明,全球每年有接近100万例的新诊断肝癌患者,每年约69万人死于肝癌,且肝癌的发病率持续上升,对全球人类的健康产生极... 详细信息

背景与目的肝癌在全球范围内患病率排名第五,死亡率排名第二,其恶性程度极高,预后极差。国际癌症研究机构公布的数据表明,全球每年有接近100万例的新诊断肝癌患者,每年约69万人死于肝癌,且肝癌的发病率持续上升,对全球人类的健康产生极大威胁。在中国,肝癌在恶性肿瘤发病率种排第4位,在恶性肿瘤死亡占第2位。目前已有诸多中医临床实践表明,多种中药及其提取物在治疗恶性肿瘤上有相当良好的效果。临床治疗肝癌的常用验方有234个,共用药280余味,其中芍药使用次数为73次。芍药包含苷类、萜类、黄酮类、鞣质类、挥发油类、酚类和糖类等多种生物活性物质。现代药理研究表明,芍药提取物具有多种生物活性,例如免疫调节、镇痛、解痉、保肝、抗炎等作用。近年研究表明芍药具有抗肿瘤的内在生物活性,而这种抗增殖和抗肿瘤的活性可能与芍药内的多羟基化合物有关。芍药内酯苷（albiflorin）又名白芍苷,是芍药中含量仅次于芍药苷的化合物,有研究报道其具有抗惊厥、调节单胺类神经递质、增强免疫力、升高白细胞等作用,但目前尚无芍药内酯苷抗肿瘤活性的报道。本研究以奥沙利铂为阳性对照药,力图探究芍药内酯苷在抑制肝癌smmc-7721细胞增殖及诱导起细胞凋亡中的作用。方法将人肝细胞癌细胞株smmc-7721细胞分为以下几组:1)芍药内酯苷组,根据剂量不同分为低剂量组（0.25g/L）,中剂量组（0.5g/L）,高剂量组（1g/L）;2)奥沙利铂组,药物浓度为32μM/L;3)联合用药组,根据剂量不同分为低剂量混合组（0.25g/L芍药内酯苷+32μM/L奥沙利铂）,中剂量混合组（0.5g/L芍药内酯苷+32μM/L奥沙利铂）,高剂量混合组（1g/L芍药内酯苷+32μM/L奥沙利铂）;4)对照组,加入等量PBS缓冲液。采用HE染色法在光学显微镜下观测各组细胞形态学在给药后48h的变化;使用MTT 比色法分别检测各组细胞在24h、48h、72h时生长抑制情况;使用流式细胞仪检测各组细胞在48h时细胞周期及细胞凋亡的情况;采用DNA Ladder电泳进一步观测各组细胞在48h时凋亡情况,记录并分析结果。结果HE染色结果显示药物作用48h后,肝癌smmc-7721细胞形态发生了明显的变化,且细胞形态变化的程度与药物剂量呈正相关。MTT检测则表明在不同剂量下不同时间下,芍药内酯苷均对肝癌smmc7721细胞有明显的抑制作用,各组及联合用药组抑制率相比对照组差异均有统计学意义,P＜0.05。同时我们发现同组细胞在24h、48h、72h的生长抑制率均逐渐增高,表明芍药内酯苷对肝癌smmc-7721细胞的抑制作用呈时效-量效关系。流式细胞仪分析结果则表明在48h时,芍药内酯苷高剂量组及联合用药高剂量组能明显的改变肝癌smmc-7721细胞的细胞周期并诱导其凋亡,其中奥沙利铂单药主要将smmc-7721细胞阻滞于S期,而芍药内酯苷单药作用主要在G2/M期阻滞smmc-7721细胞,联合用药后时smmc-7721细胞则被阻滞于S及G2/M期。DNA电泳结果同样支持以上结论,实验组各组DNA降解明显,其中奥沙利铂组、混合用药组及芍药内酯苷组的DNA条带均有明显的抹带,且降解程度也随混合用药组、奥沙利铂组及芍药内酯苷组依次降低。结论综上所述,本研究通过探究芍药内酯苷在抑制肝癌smmc-7721细胞增殖及诱导起细胞凋亡上的影响,发现芍药内酯苷不仅能显著抑制肝癌smmc-7721细胞的增殖,而且能显著诱导肝癌smmc-7721细胞凋亡。虽然其抑制活性对比市售抗肿瘤药物有显著的差距,但由于目前尚无文献报道芍药内酯苷的抗肿瘤活性,本研究具有极强的前瞻性和创新性,芍药内酯苷也有作为结构母核而成为新型抗肿瘤药物的先导化合物的潜质。

关键词：芍药内酯苷肝癌 smmc7721细胞细胞凋亡 MTT检测

过表达整合蛋白α5β1的smmc7721细胞株的建立和鉴定

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上海医科大学学报 1999年第3期26卷 161-164页

作者：周国飞范勤冯晔葛昊平查锡良卫生部糖复合物重点实验室上海医科大学基础医学院生物化学教研室

构建过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株。方法应用分子克隆技术和基因转染建立过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株，应用ＲＴ－ＰＣＲ及流式细胞术鉴定ＳＭＭＣ７７２１细胞表面整合蛋白α５β１的表达。结... 详细信息

构建过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株。方法应用分子克隆技术和基因转染建立过表达整合蛋白α５β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株，应用ＲＴ－ＰＣＲ及流式细胞术鉴定ＳＭＭＣ７７２１细胞表面整合蛋白α５β１的表达。结果获得过表达整合蛋白α５／β１的ＳＭＭＣ７７２１细胞株α５．３－７７２１，β１．６－７７２１，α５β１．６－７７２１细胞。结论整合蛋白α５β１基因转染后，ＳＭＭＣ７７２１细胞整合蛋白α５β１的ＲＮＡ及蛋白质表达明显提高。

关键词：整合蛋白基因转染 smmc7721细胞肝肿瘤