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smgt样机在神户进行试验

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热能动力工程 2003年第5期18卷 474-474页

作者：吉桂明

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纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物对猪精子介导基因转移效率的影响

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中国兽医学报 2013年第3期33卷 466-471页

作者：吴斌戴建军张廷宇张树山吴彩凤顾晓龙陈会兰张德福马恒东上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 四川农业大学生命科学与理学院四川雅安625014

为优化猪精子介导的基因转移(smgt)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入P... 详细信息

为优化猪精子介导的基因转移(smgt)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达。结果显示,0.5μg线状质粒DNA中加入PAMAM-D(质量比20∶1)阳性率最高(P<0.05);孵育时间为90、120min时,阳性率显著高于30、60min组(19.94%、18.57%与8.50%、13.87%;P<0.05);以此条件处理精子,阳性率显著高于无载体和脂质体处理组(23.93%与7.25%、13.25%;P<0.05)。各处理精子经IVF后,PAMAM-D组EGFP表达率显著高于其他2组(9.19%与4.81%、3.43%;P<0.05),各组绿色荧光胚胎经基因组PCR分析均能检测到EGFP基因。结果表明,PAMAM-D可有效介导猪精子转染外源DNA,并通过体外受精将外源基因导入胚胎中。

关键词： smgt 精子 PAMAM-D 猪

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山羊CD4基因外显子6多态性与精子内化外源DNA能力的相关性研究

山羊CD4基因外显子6多态性与精子内化外源DNA能力的相关性研究

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作者：范景胜西南大学

学位级别：硕士

哺乳动物精子具有自发结合内化外源DNA的能力。精子介导基因转移是转基因效率较高的技术方法之一,但同时存在着极大的随机性和不确定性。DNA的内化转运受到精子质膜分子的严格调控,仅有少量结合的DNA能被内化转运到精子细胞核,极大的降... 详细信息

哺乳动物精子具有自发结合内化外源DNA的能力。精子介导基因转移是转基因效率较高的技术方法之一,但同时存在着极大的随机性和不确定性。DNA的内化转运受到精子质膜分子的严格调控,仅有少量结合的DNA能被内化转运到精子细胞核,极大的降低了精子介导基因转移效率。研究发现精子供体对精子载体法制备转基因动物有显著影响,不同品种的动物精子结合内化外源DNA能力存在显著差异。本研究以精子质膜上的转运系统之一CD4分子为研究对象,通过PCR-SSCP技术分析山羊CD4基因,并与精子内化外源DNA能力进行相关性分析。(1)选取了体况、精液品质相近的南江黄羊、波尔山羊和波尔山羊×川东白山羊杂交一代羊(简称波川F)3个品种的种公羊17只,假阴道法采集精液,离心去除精清,与地高辛标记的线性pEGFP-N质粒共孵育,免疫组化法检测转染效率;(2)通过PCR-SSCP技术分析了南江黄羊、川东白山羊、波尔山羊和波川F代山羊4个品种共97个个体的CD4基因外显子6序列的单核苷酸多态性;(3)对南江黄羊、波尔山羊和波川F代山羊3个品种的种公羊CD4基因外显子6多态性与其精子内化转运外源DNA的能力进行相关性分析。主要研究结果如下: 1.不同山羊品种的精子内化外源DNA的能力不同。在3个品种中,南江黄羊精子内化外源DNA的能力较高,为(35.994±1.71)%,其次是波川F代山羊,为(32.06±3.21)%,波尔山羊最低,为(21.54±2.31)%,南江黄羊、波川F代山羊的内化转染效率极显著高于波尔山羊(P＜0.01)。 2.在选取的4个山羊品种中,发现CD4基因外显子6存在1个SNP位点。山羊CD4基因cDNA编码区700 bp处存在G/A突变,引起了234位氨基酸发生G/R突变。南江黄羊、川东白山羊检测到AA、AB和BB型3种基因型,波尔山羊和波川F代检测到AA和AB型2种基因型。4个山羊品种的PIC、He、Ne从大到小排列是南江黄羊,川东白山羊,最后是波尔山羊和波川F代羊。 3.山羊CD4基因外显子6的SNP位点与精子内化外源DNA能力存在相关性。在所检测样本中,BB型山羊精子内化外源DNA效率最高(35.26±0.43)%,AA型和AB型山羊精子内化效率分别为(27.83±2.29)%和(29.37±3.28)%。BB型内化效率显著高于AA型和AB型内化效率(0.01≤P≤0.05),表明山羊CD4基因外显子6的SNP位点可能是影响精子内化外源DNA能力的因素之一,其B型等位基因可能是精子内化外源DNA能力的分子标记之一。

关键词：山羊精子外源DNA smgt CD4 PCR-SSCP

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